水生动物病原微生物学实验改革案例.docx

水生动物病原微生物学实验改革案例 摘要：为了提升水生动物医学专业试验课的质量，在水生动物病原微生物学试验中进行改革探究，设计了“嗜水气单胞菌人工感染异育银鲫及病原菌的分别、鉴定综合性大试验”的案例，巩固了学生对“科赫法则”的理解和运用。该试验项目极大地提高了学生的动手实力和试验爱好，取得了良好的教学效果。 关键词：水生动物病原微生物学试验；科赫法则；综合性试验；试验改革 中图分类号：G642.0 文献标记码：A 文章编号：1674-932421-0273-02 一、引言 “水生动物医学”是2022年被教化部首次批准于上海海洋高校的水产学大类下设置的新本科专业，为国内首个水生动物疾病防控领域的本科专业。水生动物病原微生物学试验是针对“水生动物医学”新专业开设的专业必修课程之一，其理论课是水生动物病原微生物学。为了满意市场对水生动物医学专业人才极其匮乏的需求，水生动物病原微生物学试验承载着该专业重要的专业技能训练使命1。该课程从无到中有，经验了逐步完善的过程，为了提升该专业综合性大试验的比例，提高学生的综合性大试验的技能，我们设计了“嗜水气单胞菌人工感染异育银鲫及病原菌的分别、鉴定”综合性大试验的案例。历经4年的实施与改革，取得了很好的试验效果，对进一步深化教学改革具有重要借鉴意义。 二、试验设计的理念 参考致病性嗜水气单胞菌检验方法GB/T 18652-2002的标准，在水生动物病原微生物学试验专业微生物学试验环节，针对病原菌部分的教学重点，依据“科赫法则”设立了“嗜水气单胞菌人工感染异育银鲫及病原菌的分别、鉴定综合性大试验”，旨在建立病原菌的感染模型，熬炼学生分别、鉴定以及保藏病原菌的综合实力。训练学生敏捷运用理论学问的实力，融合前面单独试验项目中的操作技巧，综合运用到本试验项目中，进一步熬炼学生的团结协作实力。 三、试验目的和要求 通过致病性嗜水气单胞菌人工感染异育银鲫，了解细菌的培育及人工感染方法；视察嗜水气单胞菌感染鱼体后所造成的疾病症状，包括体表以及体内的病理改变特征；驾驭病原菌的体外及体内分别、培育方法，驾驭细菌传统鉴定及16S rRNA分子鉴定方法，理解科赫法则，训练病原菌保藏的技术。以4-5人为一组，分6个学时进行。 四、试验内容和方法 1.试验器材：培育皿、干燥箱、灭菌锅；塑料水族箱、加热棒、充气泵、解剖刀、解剖盤、剪刀、镊子、酒精灯、接种环、酒精棉、1mL无菌注射器、试管、火柴、一次性手套、橡胶手套、口罩；养分琼脂、无菌脱纤维羊血、血琼脂基础培育基、RS琼脂、无菌生理盐水、MS-222麻醉剂。 2.试验菌株：试验室保藏致病性嗜水气单胞菌，菌株编号Ah-js16。 3.试验原理：本综合性试验项目设计的原理依据科赫法则，又称证病律。 4.试验操作步骤：试验打算：包括试验鱼的驯养和试验菌株的活化和扩大培育。人工感染：试验鱼人工感染方法包括浸泡、创伤感染、肌肉注射以及腹腔注射，本试验采纳腹腔注射，感染快速、效果较好。感染后，视察并记录发病状况。病原菌的分别、培育：分别视察记录人工感染后4 h、8 h、16 h、24 h鱼体症状，之后进行病鱼的解剖及病原菌的平板划线分别。病原菌鉴定：细菌的鉴定方法主要包括传统鉴定和现代分类鉴定两种方法。本试验采纳的传统鉴定方法包括：生长特性、菌落特征、革兰氏染色、运动性、氧化酶、吲哚试验、糖发酵试验、细菌的致病性检查共8个项目。细菌的现代分类鉴定采纳16S rRNA序列测定，操作简洁，节约时间，花费低廉。依据测序结果构建系统进化树，登陆NCBI网站，再次确认其分类地位。试验鱼及菌株处理：试验解剖后的感染鱼及分别菌株应进行无害化处理，先经121灭菌15min后，再进行后续处理。病原菌的保藏：将分别鉴定后的病原菌株，进行液体扩大培育，之后根据甘油：菌悬液=37的比例，进行混合，之后分装1-2ml菌种冻存管，9管/株，分别置于-20，-73，-196进行保存、备用。 五、试验考核方法 综合学生之间互动的主动性、试验小组的团队协作精神、试验报告中体现出来的应用所学学问分析和说明试验结果的实力给出该组的成果，分为优、良、中、及格、不及格五级。 六、学生对试验的评价与反馈 通过该综合性大试验，学生坚固强化了微生物学的基本操作技巧，对于无菌操作能够贯穿试验的全过程，对于“病原微生物”的理解更加透彻，对于“科赫法则”非常清晰。下面仅举2例，展示学生的实际收获及试验效果。 例1：“本次试验相对比较胜利，组内同学彼此协作默契，分工明确，通过此次试验有利于培育对病原微生物学的爱好，对同学们的独立思索实力是一个特别好的熬炼机会。” 例2：“这学期的水生动物病原微生物试验已经结束，这是我们第一次接触到微生物的真实世界，起先试验之前我以为这个试验不会很难，但是通过本试验的逐步完成发觉这个课程很有技术含量。不仅须要理论学问作为铺垫，还须要有严谨的试验精神。通过这次试验操作，我们学到了许多，特别有收获。” 七、总结和提高 该综合性大试验，确立了以学生为中心的互动试验教学模式2，明显提高了试验教学的质量和学生的综合素养，提升了教学团队的整体实力。学生的试验报告图文并茂，许多照片也成为科学出版社的待出版教材水生动物病原微生物学试验的素材，因此，对同行有肯定的参考和帮助。今后如何面对高等教化现代化对课程内涵不断提升的需求，培育具有国际竞争力的人才，仍须要更多的思索和实践。希望此试验案例能够抛砖引玉，与同道共勉。 参考文献： 1张庆华，宋增福，郭婧，等.“水生动物病原微生物学”试验的教学与实践J.试验科学与技术，2022，14：130-133，245. 2梅芸，杨华山.以学生为中心的互动试验教学模式探究J.试验科学与技术，2022，12：111-113. 第5页 共5页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页