大鼠脑出血模型脑组织NgR的表达形式.docx
大鼠脑出血模型脑组织NgR的表达形式 摘要：目的视察大鼠脑出血后不同时间点脑组织NgR(Nogo-66 Receptor )的表达状况。方法大鼠断尾取血101 L，分3次注入大脑尾状核,分别于手术后6 h、24 h、48 h、73 h和7 d处死动物。采纳免疫组织化学方法检测脑组织NgR的表达改变。结果与假手术组相比较，脑出血后6 h，NgR表达增高(P<0.01)，73 h达到高峰(P<0.01)，7 d后降低但仍然高于假手术组(P<0.01)。结论NgR的上调是脑出血的重要特征之一，并且在脑组织的病理损害过程中起着重要作用。 关键词：脑出血 NgR 免疫组织化学 轴突再生 中图分类号：R743.3R285.5文献标识码：A文章编号：1673-1349(2022)05-0579-02 哺乳动物中枢神经系统损伤后，受损神经元轴突再生特别有限。已有试验证明轴突生长抑制蛋白髓鞘相关糖蛋白。脑出血组大鼠分别于出血后6 h，24 h，48 h，73 h及7 d处死。假手术组大鼠在脑出血6 h后处死。 1.2脑出血模型采纳自体血三次注血法建立7。采纳微量注射器从颅骨预先钻好的小孔注入。首先注入20 L，停留10 min后，40 L血在2 min内缓慢注入，最终40 L的血以同样的方式注入，停留10 min。假手术组造模方法类似，扎针不注射血。 1.3免疫组织化学染色断头取脑后，将脑组织置于4 的4%多聚甲醛中浸泡8 h12 h，后经过石蜡包埋。制作5m切片进行HE染色和免疫组织化学染色，采纳亲和生物素法的试剂盒。阳性比照：随机抽取多个样本重复证明标记物的存在。阴性比照:采纳非免疫的血清代替一抗进行试验。采纳BI-2000医学图像系统分析NgR表达状况，每张切片随机选取10个视野进行OD值的测定。免组织化的程度通过OD值进行半定量分析。 2结果 2.1HE 染色比照组脑组织正常，组织形态正常，细胞结构完整。脑出血6 h有少量的坏死神经元和散在炎性细胞浸润,炎症细胞浸润在脑出血后24 h渐渐上升，73 h达到高峰，并在血肿四周出现胶质细胞和毛细血管增生。在脑出血7 d时，血肿明显减轻，血肿四周出现明显胶质和毛细血管增生。 2.2脑皮质NgR免疫组织学视察脑出血6 h血肿四周起先出现少量的NgR阳性细胞。阳性表达高于比照组，平均光密度值高于比照组，与对照组相比，7 d降低。详见图1。 图1脑皮质NgR表达平均光密度值 3探讨 本试验发觉，大鼠脑组织NgR的表达在脑出血后12 h,24 h,48 h,73 h呈时间依靠性上调。脑组织NgR的表达形式与脑组织急性期损伤程度改变相一样。 在试验动物脑出血模型中，脑出血四周组织在没有出现脱髓鞘的状况下，出现了轴突损害8。在本试验中，NgR作为中枢神经系统受损后抑制轴突再生的重要因素，在手术后73 h表达最高。说明NgR可能在脑出血早期参加了轴突损害过程。脑出血后NgR表达形式局灶性脑梗死脑组织NgR的表达状况不同，这可能与脑出血后凝血级联以及红细胞裂开后的产物有关6。 NgR的发觉以及其在中枢神经系统突起再生中的抑制性作用促使人们对其进行了大量的探讨。近些年，人们试图通过多种方法从基因水平,蛋白水平对NgR干预以促进轴突的再生。在离体及在体试验中均发觉应用抗NgR的DNA疫苗可以明显促进脊髓损伤后的轴突再生9。 通过皮下注射NgR拮抗肽NEP1-40促进脊髓损伤患者轴突的重塑10。侧脑室赐予NgR受体拮抗剂，可以明显提高小鼠脑梗死模型轴突的可塑性，从而促进神经功能复原11。这些探讨在进一步证明NgR作用的同时为中枢神经系统损害治疗供应了新的治疗措施。但是新的治疗方法须要不断完善以治疗脑出血后神经功能的恶化。本试验发觉脑出血后12 h NgR在脑白质表达渐渐上调，在73 h达到高峰，7 d时开下降。此探讨结果将为采纳NgR抗体治疗脑出血促进神经功能复原供应切实有效的时间窗。 参考文献: 1Li MF，Shi TH，Wei Z,et al.Structural characterization of the human Nogo-A functional domains.Solution structure of Nogo-40，a Nogo-66 receptor antagonist enhancing injured spinal cord regeneration.Eur J Biochemistry，2004,273(17):3512-22. 2Lee DH，Strittmatter SM，Sah DW，et al.Targeting the Nogo receptor to treat central nervous system injuries.Nature Review Drug Discovery，2003,2(11):873-878. 3Josephson A，Trifunovski A，Olson L，et al.Nogo-receptor gene activity:Cellular localization and developmental regulation of mRNA in mice and humans.J Comparative Neurology，2002，453(3):292-304. 4Ellezam B，Bertrand J，Dergham P,et al.Vaccination stimulates retinal ganglion cell regeneration in the adult optic nerve.NeurobiologyDisease，2003，12(1):1-10. 5Wen J，Feng X，Junliang H,et al.Patterns of Nogo-A，NgR，and RhoA expression in the brain tissues of rats with focal cerebral infarction.Translation Reserch，2022，154(1):40-48. 6Keep RF，Hoff JT.Mechanisms of brain injury after intracerebral haemorrhage.Lancet Neurology，2022，5(1):53-63. 7李红玲,刘瑞春,缑元冲,等.自体血三次注入法建立脑出血大鼠模型究J.中国康复理论与实践,2022,8(12):651-653. 8Jason K，Wasserman,Lyanne C,et al.White matter injury in young and aged rats after intracerebral hemorrhage.Exprimental Neurology，2022，214(2):266-275. 9Panpan Y，Lidong H，Jian Z,et al.DNA vaccine against NgR promotes functional recovery after spinal cord injury in adult rats.Brain Research，2022，1147:66-76. 10Li S，Strittmatter SM.Delayed systemic Nogo-66 receptor antagonist promotes recovery from spinal cord injury.Neuroscience，2003，23(10):4219-4227. 11Lee JK,Kim JE,Sivual M,et al.Nogo receptor antagonism promotes stroke recovery by enhancing axonal plasticity.Neuroscience，2004,24(27):6209-6217. 作者简介:贾晓涛(11015),男,现为山西医科高校其次医院神经内科2022 级在读硕士探讨生 (本文编辑王雅洁） 第6页 共6页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页
