茶叶中氯噻啉的测定,液相色谱串联质谱法（BJS,202214）.docx

茶叶中氯噻啉的测定,液相色谱串联质谱法（BJS,202214）附件3茶叶中氯噻啉的测定BJS 2022141 范围本方法规定了茶叶中氯噻啉残留量的高效液相色谱-串联质谱测定方法。 本方法适用于茶叶中氯噻啉残留量的测定。 2 原理试样中的氯噻啉经乙腈均质提取后，经浓缩、净化，采纳液相色谱-串联质谱仪检测和确证，外标法定量。 3 试剂和材料除另行规定外，水为GB/T 6682 规定的一级水。 3.1 试剂3.1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。 3.1.2 甲酸（CH2O2）：色谱纯。 3.1.3 二氯甲烷（CH2Cl2）：色谱纯。3.1.4 氯化钠（NaCl）：分析纯。 3.1.5 无水硫酸钠（Na2SO4）：分析纯。 3.2 溶液配制3.2.1 乙腈-二氯甲烷（3+1，体积比）溶液：取乙腈（3.1.1）600 mL，取二氯甲烷（3.1.3）200 mL，混合匀称，备用。 3.2.2 0.1%甲酸水溶液：精确吸取1.0 mL甲酸（3.1.2），用超纯水定容至1.0 L，混匀。 3.2.3 0.1%甲酸乙腈溶液：精确吸取1.0 mL甲酸（3.1.2），用乙腈定容至1.0 L，混匀。 3.3 标准物质标准物质名称等如表1所示，纯度不小于95.0%。 表1 标准物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量化合物名称英文名CAS登录号分子式相对分子质量氯噻啉Imidaclothiz105843-36-5C7H8ClN5O2S261.013.4 标准溶液配制称取氯噻啉标准品（3.3）10 mg（精确至0.01 mg），用乙腈（3.1.1）溶解定容至101 mL，配制成浓度为101 mg/L的标准储备液，于0 4 以下避光保存，有效期12个月。 3.5 氨基硅胶酰胺化聚合物/石墨化碳柱规格1010 mg，6 mL，或等效SPE柱。 4 仪器和设备4.1 液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾离子源（ESI）。 4.2 分析天平：感量分别为0.01g和0.01mg。 4.3 涡旋振荡器。 4.4 高速组织捣碎机：转速不低于15000 r/min。 4.5 离心机：转速不低于4000 r/min。 4.6 旋转蒸发仪。 5 试样制备和保存将茶叶粉碎后置于干燥状态下保存。 6 分析步骤6.1 提取称取2 g样品（精确至0.01 g），置50 mL离心管中，加入15 mL乙腈，涡旋振荡0.5 min，在高速组织捣碎机上以15000 r/min均质1 min后4000 r/min离心5 min，将上清液移入梨形烧瓶中。残渣再用15 mL乙腈重复上述提取一次，合并提取液，在40 水浴中减压旋转浓缩至23 mL。 6.2 净化在固相萃取柱（3.5）上预先加入约1 cm高的无水硫酸钠（3.1.5），先用5 mL乙腈-二氯甲烷（体积比3+1）溶液（3.2.1）预洗固相萃取柱，弃去流出液，将提取浓缩液（6.1）转移到固相萃取柱上，用5 mL乙腈-二氯甲烷（体积比3+1）溶液（3.2.1）分3次洗涤梨形烧瓶并转移至固相萃取柱上，同时用梨形烧瓶收集全部流出液，再用20 mL乙腈-二氯甲烷（体积比3+1）溶液（3.2.1）淋洗固相萃取柱，合并全部流出液，在40 水浴中减压旋转浓缩至近干，氮气吹干。精确加入2.0 mL乙腈溶解残渣，经微孔滤膜（0.22 m，有机相）过滤后，供LC-MS/MS测定。 6.3 仪器参考条件6.3.1色谱条件a） 色谱柱：Eclipse Plus C18（2.1×50 mm，1.8 m），或相当者；b） 流淌相：A为0.1%甲酸水溶液，B为乙腈，洗脱梯度见表2；c） 流速：0.3 mL/min；d） 柱温：35 ；e） 进样体积1 L。 表2 梯度洗脱条件时间（min）流淌相A （%）流淌相B（%）0.0085153.0085156.0025758.0025758.10851510.0085156.3.2质谱条件a） 离子源类型：电喷雾离子源（ESI）；b） 扫描方式：正离子扫描；c） 毛细管电压：4 kV；d） 毛细管温度：300 ；e） 雾化气：氮气，3 L/min；f） 碰撞气：氩气；g） 检测方式：多反应监测（MRM）；h） 定性离子对、定量离子对参见表3表3 氯噻啉主要质谱参数组分母离子（m/z）子离子（m/z）Q1 Pre Bias（V）碰撞能量（eV）Q3 Pre Bias（V）氯噻啉262.00*181.05101530262.00122.10102723注：*表示定量离子6.4标准工作曲线的制作取粉碎的经质谱确认不含氯噻啉的空白试样，依据6.1和6.2步骤操作处理后得到与待测样品相同的空白基质。用该基质稀释标准储备液（3.4），配制浓度为0.005 mg/L、0.02 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.5 mg/L的标准系列溶液，将混合标准系列工作液分别按仪器参考条件（6.3）进行测定，得到相应的标准溶液的色谱峰面积。以混合标准工作液的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 6.5 测定6.5.1 定性测定根据6.3的条件测定试样和标准工作液，假如试样谱图中出现的保留时间与标准工作液中氯噻啉峰保留时间偏差在±2.5%之内；且其定性离子的相对丰度与标准中氯噻啉工作溶液定性离子的相对丰度偏差不超过表4规定的范围时，则可确定为样品中存在氯噻啉。 表4 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度%>50%>20%50%>10%20%10%允许的相对偏差%±20%±25%±30%±50%6.5.2 定量测定待测样液中氯噻啉的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应用空白基质稀释后再进样分析。 6.6空白试验不加试样或仅加经质谱确认不含氯噻啉空白试样的空白试验应采纳与试样测定完全相同的试剂、设备和步骤进行。 7 结果计算试样中氯噻啉以质量分数X计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，按公式（1）计算。 X=C×V×1010m×1010.（1）式中： X 试样中氯噻啉的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C 从标准曲线上得到的氯噻啉浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V 样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）；m 试样的质量，单位为克（g）；计算结果保留两位有效数字，当结果大于1 mg/kg时保留3位有效数字。 8 精密度和精确度8.1 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的肯定差值不得超过算术平均值的10%。 8.2 精确度本方法在0.005-3 mg/kg添加浓度范围内，回收率为70%-120%。 9 检出限和定量限本方法的定量限为0.005 mg/kg，检出限为0.0015 mg/kg。 附录A 氯噻啉总离子流图和特征离子图图1 氯噻啉总离子流图（101 g/L）图2 氯噻啉定量离子对提取色谱图（262.0>181.05）（101 g/L）图3 氯噻啉定性离子对提取色谱图（262.0>122.10）（101 g/L）本方法负责起草单位：浙江省食品药品检验探讨院。 验证单位：四川省食品药品检验检测院、上海市食品药品检验所、山西省食品药品检验所、杭州市疾病预防限制中心、杭州绿城农科检测技术有限公司。 主要起草人：罗金文、刘柱、徐潇颖、张泸文、陈煜、金铨 第12页 共12页第 12 页 共 12 页第 12 页 共 12 页第 12 页 共 12 页第 12 页 共 12 页第 12 页 共 12 页第 12 页 共 12 页第 12 页 共 12 页第 12 页 共 12 页第 12 页 共 12 页第 12 页 共 12 页