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2022实验1,大肠杆菌的培养和分离篇一：实验1 大肠杆菌的培养和分离实验教学提纲 实验1 大肠杆菌的培养和分离教学提纲 实验目的 1. 进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。 2. 进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的划线培养。 3. 说明大肠杆菌的培养条件和操作要求的原理。 实验材料 1. 配制LB液体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，加水50mL溶解。 2. 配制LB固体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，琼脂1g，加水50mL溶解（配制LB固体培养基是用来倒平板和倒试管斜面）。 实验步骤 1. 培养基灭菌。 在两个150mL的三角瓶中分别装入50mL LB液体培养基和50mL LB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜(一种塑料薄膜，中间有小孔的滤膜。既可以通气，又不使细菌进入。)。将培养皿用牛皮纸包好，放入高压灭菌锅中，1kg压力灭菌15min（有压力时开始计时）。 同时将需要灭菌使用的培养皿、试管、三角瓶等和所用器械（接种环、镊子等）等一块灭菌。 2. 倒平板，倒斜面。 灭菌后。待高压锅压力与大气压相同时，打开锅盖，将有培养基的三角瓶、试管、培养皿等放在灭菌后的超净工作台上。 超净工作台操作：打超净工作台的紫外灯（注意：打开紫外灯后人必须离开），持续30min，关闭紫外灯，打开过滤风和白炽灯。 将有培养基的三角瓶和培养皿放在灭菌后的超净工作台上后，点燃酒精灯，用镊子夹出酒精棉球擦拭桌面，并用酒精棉球擦手。待固体培养基冷却到60时（手放上还有些热的时候），在酒精灯火焰旁，以右手无名指及小指夹持含有固体培养基的三角瓶的封口膜，右手其他三个手指拿着三角瓶；左手拿着培养皿，并打开上盖的一边，将三角瓶的培养基约1020mL倒入1 个培养皿中。倒入后立即置于水平位置上，轻轻摇晃，使培养基铺满培养皿底，待凝，使之形成平面。 倒斜面（试管内空白斜面），用玻璃漏斗倒入试管内，每试管2mL。试管斜靠在平放的铅笔上，冷却凝固。 3. 液体培养基用于大肠杆菌的扩大培养。 将大肠杆菌和有液体培养基的三角瓶放在左手中，靠近酒精灯火焰；右手拿着接种环，并用右手无名指和小指夹住斜面的棉塞和三角瓶封口膜。接种环在火焰上烧红，再深入到斜面，使环接触培养基冷却后，再取菌种。将菌体放入三角瓶的封口膜和斜面的棉塞复原。三角瓶在37摇床上震荡培养12h（转速200转/分）。这一步骤由老师完成。 4. 划线分离，分离菌种。 在酒精灯火焰上灼烧接种环，将摇床上培养12h的菌液（老师代做）打开，接种环部分深入到菌液中（只一次）。然后，在固体培养基的平板上连续划，接种环只在菌液中蘸菌液一次，划线后盖好培养基。将培养皿倒置（盖在下面），放在37恒温培养箱中培养1224h后，可看到在划线的末端出现不连续的单个菌落，表明菌已经被分离。 划线的目的是分离菌种。用接种环以无菌 操作取细菌悬液一环，在平板培养基的一边， 做第一次平行划线23条。转动培养皿约70 度角，用烧过冷却的接种环，通过第一次划线 部分，做第二次平行划线。用同法通过第二次 平行划线，做第三次平行划线。注：每下一次的划线之前都需要 将接种环灼烧灭菌，待接种环冷却后，接种环需通过上一次的划 线获得菌种后再进行下一次的划线分离（如图B、C，我们这么做 就是为了使第一次划线后的菌种浓度降低，以达到得到单菌落（分 离菌种）的目的）。 5菌种保存 在无菌操作下将单菌落用接种环取出，再用划线法接种到斜面上，37培养24h后，4冰箱保存。4是一个保菌温度。 篇二：大肠杆菌的培养与分离 一、大肠杆菌 1.大肠杆菌属于革兰氏_性菌,为_型的肠道杆菌。 2.结构:属于_生物。 3.用途:是在_技术中被广泛采用的工具。 4.与人类的关系:它生活在人类的_中,一般对人_(“有”还是“无”)害。有一些菌株对人体能产生危害,因为它们可以侵蚀_并产生_。任何大肠杆菌如果进入人的_系统,都会对人体产生危害。 答案:1.阴 兼性厌氧 2.原核 3.基因工程 4.肠道 无 肠黏膜 毒素 泌尿 二、细菌的培养和分离 1.细菌的培养: (1)细菌的繁殖:细菌以_的方式繁殖,分裂速度很快,约_分裂一次。 (2)培养细菌的方法:培养细菌,需要将_ 转移到_中,一般用_来转移带菌的培养物。 (3)用不同培养基培养细菌的差别: 接种后,培养细菌的培养基类型 接种方法 接种后培养的时间(单位:小时) 培养结果 液体培养基 接种环直接接种 培养8 h后 每毫升培养基中有_个细菌 固体培养基 用接种环在培养基上用_的方式接种(该法还可以用于_) 培养1020 h后 一个细菌细胞会繁殖成许多个细菌细胞,这些细胞 _,形成_ 2.细菌的分离: (1)分离的方法与特点:分离细菌有_和_2种。前者方法简单,后者操作复杂,但是_更易分开。 (2)本实验进行大肠杆菌分离,是用_法,就是在_培养基上进行细菌的_。 答案:1.(1)分裂 20 min (2)已有细菌的培养物 新的培养基 接种环 (3)几亿 划线 分离细菌 紧紧聚集在一起 菌落 2.(1)划线分离法 涂布分离法 单菌落 (2)划线分离 固体平面 划线培养 三、灭菌操作 1.灭菌操作的原因:为了获得_的培养物,其关键是防止外来_的入侵污染。因此,在培养微生物时必须进行_操作。 2.无菌操作的条件: (1)首要条件是_必须是无菌的; (2)_必须是无菌的; (3)_的过程必须是无菌的等。 答案:1.纯净 杂菌 无菌 2.(1)各种器皿 (2)各种培养基 (3)菌转移操作 四、大肠杆菌的培养和分离实验 1.实验目的: (1)进行大肠杆菌的_,利用_培养基进行细菌培养的操作; (2)进行大肠杆菌的_,用_培养基进行细菌的_培养; (3)说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。 2.实验步骤 (1)灭菌:用_在_压力下对lb液体培养基、lb固体培养基和培养皿进行灭菌_min。 (2)自_向_中转移并分装固体培养基: 待冷却至_左右,将三角锥形瓶中的_培养基,在_上分装至几个_中,制成_培养基。 (3)将大肠杆菌自_转移到_中的_培养基中培养: 将大肠杆菌用_在无菌操作下接种至三角锥形瓶中的_培养基中,在_摇床振荡培养_,完成大肠杆菌的培养。 (4)将菌液在_培养基上进行_分离: 从前一步培养得到的菌液中获取菌种,用_以_法接种至第二步所制得的_培养基中,在_恒温箱中培养_h后观察菌落。 (5)菌种保存: 在无菌操作下将_用_取出,再用_法接种在_上,_培养_后,_冰箱保存。 3.分离实验的结果及相应结论: 观察中若看到在_的末端出现_,则表明菌已被分离了。 4.大肠杆菌分离的用途:_的通用方法,也是用于_的最简便方法之一。 答案:1.(1)扩增 液体 (2)分离 固体平面 划线 2.(1)高压锅 1 kg 15 (2)三角瓶 培养皿 60 固体 超净台 培养皿 固体平面 (3)斜面 三角瓶 液体 接种环 液体 37 12 h (4)固体平面 划线 接种环 划线 固体平面 37 1224 (5)单菌落 接种环 划线 斜面 37 24 h 4 3.划线 不连续的单个菌落 4.消除污染杂菌 筛选高表达量菌株 核心解读hexinjiedu1.微生物、细菌与大肠杆菌之间有怎样的关系? (1)概念内涵:其关系图解见下 (2)结构上:三者都是结构简单,形体微小的生物,但是从细胞角度看其结构是不同的,具体如下: 2.培养大肠杆菌的lb培养基中有各种物质,为什么选择这些物质,这些物质有什么作用呢? (1)人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出了供其生长繁殖的营养基质培养基。虽然各种培养基的具体配方不同,但一般都含有五大营养要素,即水、无机盐、碳源(提供碳元素)、氮源(提供氮元素)和生长因子(不同的细菌需要的各不相同,有物种差异,它主要补充自身不能合成的或合成能力较弱的,但却是生长繁殖必需的物质)。见下表: 微生物的营养要素 定义 功能 类型 化合物类型 常用物质 碳源 凡可构成微生物细胞和代谢产物中碳架本文来源：网络收集与整理，如有侵权，请联系作者删除，谢谢！第10页 共10页第 10 页 共 10 页第 10 页 共 10 页第 10 页 共 10 页第 10 页 共 10 页第 10 页 共 10 页第 10 页 共 10 页第 10 页 共 10 页第 10 页 共 10 页第 10 页 共 10 页第 10 页 共 10 页