2022年PBS缓冲液配制方法.docx
PBS缓冲液配方不管是免疫组化,仍是细胞培育中,常用到PBS 缓冲液,下面是我们试验室的配方,供大家参考;我们试验室的配方:A 液: 0.1mol/L 磷酸二氢钾:磷酸二氢钾( KH2PO4, MW136.09)1.361g,加双蒸水至 100ml;B 液: 0.1mol/L 磷酸氢二钠:酸酸氢二钠( Na2HPO4.2H2O, MW177.99 ) 1.78g,加双蒸水至100ml;或者酸酸氢二钠( Na2HPO4.12H2O, MW358.14 )3.58g,加双蒸水至 100ml;pH A 液 ( ml) B 液( ml)5.60 9.50 0.255.91 9.00 1.006.24 8.00 2.006.47 7.00 3.006.64 6.00 4.006.81 5.00 5.006.98 4.00 6.007.17 3.00 7.007.38 2.00 8.007.73 1.00 9.008.04 0.50 9.50一般免疫组化用PBS 都只包含 Na2HPO4.12H2O(磷酸氢二钠) NaH2PO4.2H2O(磷酸二氢钠)Nacl 用于细胞培育的 PBS需含有氯化钾称取 8g NaCl 、0.2g KCl 、1.44g Na2HPO4 和 0.24g KH2PO4, 溶于800ml 蒸馏水中,用 HCl 调剂溶液的 pH 值至 7.4,最终加蒸馏水定容至 1L 即可 0.01MPBS缓冲液称取 NaCl 8g , KCl 0.2g , Na2HPO4.12H2O3.63g, KH2PO4 0.24g,溶于 900ml 双蒸水中,用盐酸调pH 值至 7.4,加水定容至 1L,常温储存备用;PBS 是最普遍不过的试验室缓冲液,但其配方各异;以下是我的总结:母液的配制: 0.2M Na2HPO4 : 称取 71.6g Na2HPO4-12H2O, 溶于1000ml水0.2M NaH2PO4 : 称 取 31.2g NaH2PO4-2H2O , 溶 于 1000ml 水各 种 浓 度 PBpH=7.4 的 配 制 :先 配 0.2M PB pH=7.4 , 100ml : 取 19ml 0.2mol/L的NaH2PO4,81ml 0.2mol/L的Na2HPO4,即 可 ;然后 只需将 0.2M PB pH=7.4 按相应比例适当稀释即可,如:0.1M PB( PH=7.4):取500ml 0.2M PB ,加水稀释至1000ml 即可;0.01M PB ( PH=7.4):取可50ml 0.2M PB ,加水稀释至1000ml 即;0.02M PB ( PH=7.4):取100ml 0.2 M PB,加水稀释至1000ml 即可;如 需 要 NaCL 的话 , 加 入 NaCL 至 0.9% ( g/100ml ) 即 可;另 : 其 它 各 种 另 PH值 的 0.2M PB ( 100ml 配 方:pH0.2M NaH2PO4( ml)0.2M Na2HPO4( ml)5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.50.57.88.591.57.97938.05.394.7磷酸盐缓冲液( Phosphate Buffer, PB),磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓冲液配方磷酸盐缓冲液( Phosphate Buffer, PB)试剂: NaH2PO4·2H2ONa2HPO4·12H2O配制方法:配制时,常先配制0.2mol/L 的 NaH2PO4 和 0.2mol/L 的Na2HPO4,两者按肯定比例混合即成0.2mol/L 的磷酸盐缓冲液( PB),依据需要可配制不同浓度的PB 和 PBS;( 1 ) 0.2mol/L的 Na2HPO4 ; 称 取 Na2HPO4.12H2O 31.2g 或NaH2PO·4 H2O 27.6g加重蒸水至 1000ml 溶解;( 2 ) 0.2mol/L 的 Na2HPO4:称取 NaHPO4·. 12H2O 71.632g(或Na2HPO·4 7H2O 53.6g 或 Na2HPO4·2H2O 35.6g)加重蒸水至 1000ml溶解;( 3)0.2mol/L pH7.4 的 PB 的配制:取 19ml 0.2mol/L 的 NaH2PO4和 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO·4 12H2O,充分混合即为 0.2mol/L 的 PB( pH 约为 7.4 7.5);如 pH 偏高或偏低,可通过转变二者的比例来加以调整,室温储存即可;0.2mol/L 磷酸盐缓冲液( pH5.78.0)pH0.2mol/L NaH2PO4ml0.2mol/L Na2HPO4ml5.793.56.55.892.08.05.990.010.06.087.712.36.185.015.06.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851.049.06.945.055.07.039.061.07.133.067.07.228.072.07.323.067.07.419.081.07.516.084.07.613.087.07.710.589.57.88.591.57.97.093.08.05.394.7关于磷酸缓冲溶液的学问,我在网上搜寻了好多帖子,但是仍是不能确定正确的答案;现在把他们链接过来,期望有高手们参加讨论,我会把最终的正确解答整理出来,供应应大家;PBS可以为三种溶液的英文缩写,分别是1.磷酸盐缓冲溶液( phosphate buffered solution)、2.磷酸盐缓冲盐水( phosphate buffered saline)及3.磷酸盐缓冲钠( phosphate buffered sodium),其配制方法不同, pH 值不同,发挥的生物学作用亦不完全相同;如无特别说明,生物学上常用的PBS是中性磷酸盐缓冲溶液( phosp hate buffered solution);无钙镁离子磷酸缓冲盐水( PBS)( 0.15Mol/L PH 7.2 ) NaCl 8.0gKCl 0.2g Na2HPO4 1.15g(如为 Na2HPO·4 12H2O,就为 2.89g)KH2PO4 0.2g将上述试剂依次溶于 1 000ml 去离子水中,完全溶解后, 115高压灭菌 10min15min,存在 4冰箱中备用;此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培育物;我们用的都是其次种问题 1:磷酸盐缓冲盐水( phosphate buffered sodium),为什么用第三种或第一种呢 :这么多年以来我都以为PBS就是磷酸盐缓冲溶液, 其他两种说法的英语名称常见到,不过我始终都以为他们是差不多的东西;不同的汉语翻译倒是第一次听说;我们公司用的 PBS有许多种,抗体组用的中和 PBS配方就比较简洁,没有 K+ 离子, 只起到缓冲 PH 的作用; Na2HPO4+ KH2PO4 按照不同比例混匀,可以得到不同PH 的缓冲液,用于不同目的,这个在分子生物学中用得许多; 用于活细胞或者细菌处理的,为了保持渗透压,会加入其他的溶液,最常见的就是NaCl 和 KCl 调剂离子浓度;以上是个人的懂得,欢迎批判;:问题 2:既然抗体组的 PB S是起到缓冲 PH 的作用,那加入 80G 的 NACL 作用是什么?需要平稳渗透压吗?仍有加入 K 离子的是不是由于细胞上 NA-K 泵的缘由啊,血清里面又没有细胞,何来NA-K 泵一说啊?我觉得之所以这么配,其实就是对血清中缓冲环境的一种模拟罢了,血清里面又没有细胞,何来 NA-K 泵一说啊?我没说血清撒; 我们用的又没加 K ,我是说加了 K 的的问题 3:不加 NACL 会怎么样啊?多省钱啊在中和磷酸盐缓冲液中, NaCl 的主要作用应当是保持肯定的离子浓度,以维护抗体的活性;在离子浓度过高或过低的情形下,蛋白质 都会变性,抗体当然不例外;ps:哺乳类需用生理盐水浓度是 0.9%;称取 0.9 克氯化钠,溶解在少量蒸馏水中,稀释到 100 毫升;鸟类需用的生理盐水浓度是 0.75%;称取 0.75 克氯化钠,溶解后用蒸馏水稀释到 100 毫升;两栖类需用的生理盐水浓度是 0.65%;称取 0.65 克氯化钠,溶解后用蒸馏水稀释到 100 毫升;/size/font