2022年仪器分析及公式总结.docx

仪器分析及公式总结仪器分析总结一、基础内容 一 绪论化学分析 就是指利用化学反应与它的计量关系来确定被测物质组成与含量的一类分析方法；仪器分析 就是指通过物质某些物理或者物理化学性质、参数及其变化来确定物质的组成、成分含量及化学结构的分析方法；分析仪器 就是仪器分析方法的技术设备,包括通用分析仪器与专用分析、测量一起两大类；仪器分析的特点 :1 、 试样用量少 ,适用于微量、半微量乃至超微量分析;2 、 检测灵敏度高 ,最低检出量与检出浓度大大降低;3 、 重现性好 ,分析速度快 ,操作简便 ,易于实现自动化、信息化与在线检测;4 、 化学分析需要在溶液中进行,仪器分析可在物质原始状态下分析;5 、 可实现复杂混合物成分分别、鉴定或者结构测定;6 、 相对误差较化学分析误差较高,达 35%,不适合常量与高含量分析;7 、 需要结构复杂的分析仪器,分析成本较高；分析方法类型 :1、光化学分析法 ;2、电化学分析法 ;3、分别分析法 ;4 、其她仪器分析法；分析仪器的性能指标 :精密度、灵敏度、检出限、动态范畴、挑选性、响应速度、辨论率； 二 电化学分析法电化学分析导论被测样品 : 溶液分析对象 : 详细物种 分子、离子 分析方法 :就是将待测试液与适当的电极组成一个化学电池,通过测量电池的某些物理量,如电位、电流、电导或电量等来确定物质的组成与含量或测定某些电化学性质；电解池 : 由外加电源强制发生电池反应, 以外部供应的电能转变为电池反应产物的化学能, 在反应中有电荷在金属 / 溶液界面上转移 , 电子转移引起的氧化或仍原反应发生；并遵循Faraday电解定律 , 称为 Faraday 过程 ；非 Faraday过程 : 由于热力学或动力学方面的缘由, 可能没有电荷转移反应发生, 而仅仅发生吸附与脱附的过程 , 使电极 / 溶液界面的结构可以随电位或溶液组成的变化而转变；电极过程 : 电极与溶液界面上发生一系列变化的总与；电极过程的基本历程 :1、 液相物质传递步骤 ;2、 前置的表面转化步骤3、 电子传递步骤4、 随后的表面转化步骤5、 物质传递步骤极化现象 : 当有电流通过电极时, 总的反应速率不为零, 即原有的热力学平稳被破坏, 致使电极电位偏离平稳电位的现象电化学电池中的电极系统:1、 工作电极 : 试验中要讨论或考察的电极, 它在电化学池中能发生所期望的电化学反应, 或者对鼓励信号能做出响应的电极2、 参比电极 : 在测量过程中其电位几乎不发生变化的电极3、 帮助电极 又称对电极 : 供应电子传导的场所 , 与工作电极、 参比电极、 组成三个电极系统的电池, 并与工作电极形成电流通路电分析化学方法 :静态方法 : 平稳态或非极化条件下的测量方法, 如电位法、电位滴定法动态方法 : 有电流通过或极化条件下的测量方法, 如伏安法、计时电位法伏安法 : 指用电极电解被测物质溶液, 依据所得到的电流电压曲线来进行分析的方法电位分析法 : 将一个指示电极与一个参比电极, 或者采纳两个指示电极, 与试液组成电池, 然后依据电池电动势或者指示电极电位的变化来进行分析的方法 电位法、电位滴定法电重量法 : 使用外加电源电解试液 , 电解完成后直接称量电极上析出的被测物质的质量来进行分析的方法电离分别法 : 将电解的方法用于物质的分别库仑分析法 : 依据电解过程中所消耗的电荷量来进行分析 分掌握电流库仑分析法与掌握电位库仑分析法电导分析法 : 依据溶液的电导性来进行分析的方法 包括电导法与电导滴定法电分析化学方法的特点: 分析速度快 ; 灵敏度高 ; 所需试样量少 , 所使用的仪器简洁 , 易于掌握 ; 适用于进行微量操作 ; 可用于各种化学平稳常数的测定以及化学反应机理的讨论；电位分析法电位分析法 : 电位法、电位滴定法电位法 一般使用专用的指示电极, 把被测离子的活 浓 度通过毫伏电位计显示为电位读数, 再有能斯特方程运算求其活度 ; 电位滴定法 类似于化学滴定法 , 就是利用电极电位在化学计量点邻近的突变来代替指示剂的颜色变化来确定滴定终点；被测物质含量的求取与化学滴定法完全相同电位分析法指示电极的分类:第一类电极 : 金属电极与其金属离子溶液组成的体系, 其电极电位打算于该金属离子的活度其次类电极 : 金属及其难溶盐 或络离子 所组成的电极体系第三类电极 : 金属与两种具有共同银离子的难溶盐或难解离的络离子组成的电极体系零类电极 : 惰性金属电极 ,Pt 、 Au、C 等膜电极 : 离子挑选电极电位挑选系数 : 电极对各种离子的挑选性, 用电位挑选系数来表示, 为一常数参比电极与盐桥参比电极基本性质 :1 、可逆性 ;2 、重现型 ;3 、稳固性分类 : 标准氢电极、甘汞电极与银氯化银电极盐桥作用 : 接通电路 , 排除或减小液接电位使用条件 : 1、盐桥中电解质不含有被测离子;2 、电解质的正负离子的迁移率应当基本相等;3 、要保持盐桥内离子浓度尽可能的大, 以保证减小液接电位扩散电位 : 由于离子扩散速度的不同造成的电位差离子挑选电极电位 =内参比电极 +膜电位离子挑选电极类型 :1、 玻璃电极2、 晶体膜电极 :I、氟离子单晶膜电极 ;II、硫、卤素离子电极3、 流淌载体电极 : 液膜电极4、 气敏电极 : 一种气体传感器 , 测定溶液或其她介质中气体的含量5、 生物电极 : 一种将生物化学与电化学原理结合而制成的电极 分为酶电极、 离子敏锐场效应晶体管、组织电极 响应时间 : 从离子挑选电极与参比电极一起与试液接触时算起, 直至电池电动势达到稳固值时为止, 在此期间所经过的时间为实际响应时间分析方法 : 直接比较法、校准曲线法、标准加入法电位滴定法滴定终点的确定 : 滴定反应发生时 , 在化学计量点邻近 , 由于被滴定物质的浓度发生突变, 指示电极的电位随之产生突越 , 由此确定滴定终点滴定反应类型以及指示电极的挑选1、 酸碱反应可用 pH 玻璃电极作指示电极2、 氧化仍原反应在滴定过程中, 溶液中氧化态与仍原态的浓度比值发生变化, 可采纳零类电极作指示电极 , 一般都用铂电极3、 沉淀反应滴定可依据不同的沉淀反应, 选用不同的指示电极4、 络合反应用 EDTA 进行电位滴定时 , 可采纳两种类型的指示电极; 一就是应用于个别反应的指示电极; 另一种能够指示多种金属离子的电极, 谓之 pM电极伏安法与极谱法液相传质方式 : 对流、电迁移、扩散直流直谱装置 : 以滴汞电极为工作电极, 饱与甘汞电极为参比电极组成的电解池干扰电流及其排除方法:残余电流 : 来源于微量杂志的氧化仍原所产生的电流, 采纳作图法加以扣除迁移电流 : 加入大量支持电解质可以排除极谱极大 : 在电流电位曲线上显现的比扩散电流要大得多的突发电流峰: 通常采纳加入表面活性剂来抑制氧电流 : 通入惰性气体 , 或在中性或碱性溶液中加入亚硫酸钠, 强酸中加入碳酸钠或铁粉, 从而排除氧的电流干扰脉冲极谱 : 方波极谱法、常规脉冲极谱法、示差脉冲极谱法伏安法 : 线性扫描伏安法、循环伏安法、溶出伏安法、单扫描极谱法 示波极谱法 特点1、 在汞滴的生长后期施加线性扫描电压, 且扫描速度快2、 在阴极射线示波器记录电流电位曲线3、 在一滴汞生长周期内完成一个极谱波的测定循环伏安法 三角波电位扫描 : 从其实电位 Ei 开头 , 线性扫描到终止电位Et 后, 再扫描到起始电位溶出伏安法 : 先将被测物质以某种方式富集在电极表面, 而后借助线性电位扫描或脉冲技术将电极表面富集物质溶出依据溶出过程得到的电流电位曲线来进行分析的方法 阳极溶出伏安法、阴极溶出伏安法、吸附溶出伏安法、 伏安法常用的电极 : 汞电极、碳电极、金属电极、化学修饰电极电解与库仑法过电压 : 指工频下沟通电压均方根值上升,超过额定值的10%, 并且连续时间大于1分钟的长时间电压变动现象过电位 : 电极的电位差值, 无电流通过 平稳状态下 与有电流通过之电位差值；影响过电位的因素:1 、电极材料与电极表面状态;2 、析出物质的形状;3 、电流密度 ;4 、温度电分析方法的应用1 、 掌握电流电解法 : 指恒电流电解法 , 在恒定的电流条件下进行电解 ,然后直接称量电极上析出物质的质量来进行分析 ,主要用于精铜产品的鉴定与仲裁分析2、 掌握电位电解法 : 掌握阴极或者阳极电位为一恒定值条件下进行电解的方法,特点就是挑选性高 , 可用于分别并测定银 与铜分别 、铜 与铋、铅、银、镍等分别 、铋 与铅、锡、镝等分别 、镉与锌分别 等库仑法掌握电位库仑法优点 : 具有精确、灵敏、挑选性高, 特殊适用于混合物质的测定, 同样也就是讨论电极过程、反应机理等方面的有效方法掌握电流库仑法滴定终点的确定 : 化学指示剂法、电流法 单指示电极电流法、双指示电极电流法库仑滴定法特点 :1、 可以使用不稳固的滴定剂2、 能用于常量组分及微量组分的分析, 能作为标准方法3、 掌握电位法同样适用于库仑滴定, 提高了挑选性4、 可以采纳酸碱中与、氧化仍原、沉淀以及络合等各类反应进行滴定微库仑分析方法 : 动态库仑滴定其她库仑分析法 :Karl Fischer卡尔·费歇尔 滴定法、库仑阵列电极电化学分析新方法化学修饰电极类型 : 吸附型、共价键合型、聚合物型、复合型化学修饰电极功能 : 富集作用、化学转换、电催化、渗透性生物电化学传感器 ; 酶传感器 以氧作为待女子受体的酶传感器、接替型酶传感器、直接电子传递型酶传感器电化学免疫传感器 : 电流型免疫传感器、电位型免疫传感器生物成分的表面固定化法: 夹心法、交联法、包埋法、共价键合法、吸附法微电极特点 :1 、电极表面的液相传质速率加快, 提高测量响应速度;2 、通过电流的电流很小 , 在高阻抗体系的伏安法测量中可以不考虑欧姆电位降的补偿;3 、提高灵敏度、 4、可以用于生物活体及单细胞分析微电极的基本性质 :1 、简洁达到稳固电流 ;2 、微电极的时间常数很小;3 、适用于高阻抗溶液体系 三 光学分析法光化学分析导论光学分析法 :基于物质发射的电磁辐射或物质与辐射相互作用后产生的辐射或发生信号变化来测定物质的性质、含量与结构的一类仪器分析方法；分为光谱法与非光谱法,包括三个过程 :1 、能源供应能量 ;2 、能量与物质作用 ;3 、产生被检测信号；线状光谱 :由如干条强度不同的谱线与暗区相间而成的光谱；带状光谱 :由几个光带与暗区相间而成的光谱；连续光谱 :在肯定范畴内各种波长的光都有,且连续不断 ,无明显的谱线与谱带；电磁波吸取 :由电磁辐射供应能量致使量子从低能级向高能级的跃迁过程按电磁辐射作用对象分为:原子吸取、分子吸取、磁场诱导吸取电磁波发射 :由高能级向低能级跃迁并发射电磁波的过程按受作用的对象分为 :原子发射、分子发射 电磁波共振 :由低能级吸取电磁辐射向高能级跃迁,再由高能级跃迁回低能级并发射相同频率的电磁辐射,同时存在弛豫现象的过程；弛豫现象 :指以发光的形式释放能量的过程；非光谱法 :折射法、旋光法、比浊法、衍射法X 射线衍射法、电子衍射法光谱法 吸取光谱、发射光谱、散射光谱:1、基于原子、分子外层电子能级跃迁的光谱法:原子吸取光谱法、原子发射光谱法、原子荧光光谱法、紫外可见光吸取光谱法、分子荧光与分子磷光光谱法、化学发光分析法2、基于原子内层电子能级跃迁发光谱法:X 射线分析法 X 射线荧光法、 X 射线吸取法、 X 射线衍射法3、基于原子核能级跃迁的光谱法:核磁共振波谱法4、基于 Raman 散射的光谱法光谱仪的组成 :稳固光源系统试样引进系统波长挑选系统检测系统信号处理或读出系统光谱仪分类 :吸取光谱仪、吸取/ 发射与发散射光谱仪以及发射光谱分析仪光源系统 一般指常见光源 :连续光源、线光源、脉冲光源波长挑选系统 :单色器、滤光片、棱镜、光栅、狭缝检测系统 :抱负的检测器、光电检测器硒光电池、真空管电管、光导电检测器、硅二极管、光电倍增器、硅二极管阵列、电荷转移器件、热检测器 真空热电偶、测热辐射计、热释电检测器原子发射光谱法原子光谱法的基础原子能级 :原子有原子核与核外电子组成,核外电子依据肯定规律排列在肯定轨道绕核运动,由于不同轨道的能级不同 ,所以每个电子的能量也由它所处的能级所打算的,意即不同能量的电子发生跃迁时所需的激 发能就是不一样的；不同能级间的能量差不同且量子化;原子的吸取光谱由原子最外层电子的跃迁所产生的；原子化过程 :被测元素由试样转入气相,并转化为基态原子的过程；包括火焰原子化法 常用为乙炔 -空气火焰 与非火焰原子化法最常用的就是管式石墨炉原子化器两种方法；定量分析方法 :1、校正曲线法 ;2、标准加入法 ;3、内标法共振谱线 :由激发态直接跃迁至基态所辐射的谱线称为共振线 ；共振线就是原子发射光谱中最强的谱线；处于较低能级的激发态第一激发态 直接跃迁到基态时所辐射的谱线称为第一共振线 不同元素的 特点谱线 ；用来进行光谱分析的谱线叫做分析线 ,分析线经常选用 灵敏线 或最终线 ；灵敏线 :就是各元素中最简洁激发或激发电位较低,跃迁几率较大的谱线；灵敏线大多就是一些共振线；定性分析 :各种元素都有自己的特点谱线组识别各元素的特点谱线鉴定元素的存在；定量分析 :谱线的强度测定元素的含量；原子发射光谱法定义: 原子发射光谱分析AES就是依据原子所发射的光谱来测定物质的化学组成的分析方21法E； EEhvhc /hc原子发射光谱分析的特点:E光谱定性分析牢靠、灵敏、快速、简便、应用范畴广；周期表上约七十个元素可以用光谱方法较简洁地定性鉴 定,这就是光谱分折的突出应用；在多数情形下 ,分析前不必把待分析的元素从基体元素中分别出来；一次分析可以同时测得样品中多种元素的含量；消耗试样量很少,并具有很高的灵敏度；相宜于作低含量及痕量元素的分折；不适合分析有机物及大部分非金属元素；原子发射光谱法的过程:由光源供应能量使试样蒸发, 形成气态原子 , 并进一步使原子激发产生光辐射将光源发出的复合光排列成谱线 , 形成光谱用检测器检测谱线的强度与波长影响谱线强度的因素有: 统计权重、跃迁概率、激发能、激发温度、基态原子数自吸现象 : 原子在高温时被激发 , 发射某一波长的谱线 , 而处于低温状态的同类原子又能吸取这一波长的辐射的现象自蚀现象 : 当自吸现象特别严峻时 , 谱线中心的辐射讲完全被吸取的现象共振变宽 : 由于同类原子的相互碰撞引起的谱线变宽现象使电极之间的气体电离的方法: 紫外线照耀、电子轰击、电子或离子对中性原子碰撞以及金属灼热时发射电子等击穿 : 当电极间的电压增大到某肯定值时, 电极间的电阻突然变得很小的现象自持放电 : 在电极间的气体被击穿后, 即使没有外界电离作用 , 仍旧连续保持电离, 使放电连续的现象ICP电感耦合等离子体的特点:1、检出限低 ;2 、稳固性好、精密度高、精确度高;3 、自吸效应、基体效应小;4 、挑选合适的观测高度, 光谱背景小 ;缺点 : 在于对非金属测定灵敏度低, 仪器价格昂贵 , 维护费用较高试样引进激发光源方式:1、溶液试样 : 一般采纳气动雾化 同心型、直角型、特殊型 、超生雾化与电热蒸发方式2、气体试样 : 直接引入3、固体试样 :1 、试样直接插入进样 ;2 、电弧与火花熔融法 ;3 、电热蒸发进样 ;4 、激光熔法原子吸取光谱法定义 :AAS就是基于物质产生的原子蒸气对特定的谱线通常就是待测元素的特点谱线的吸取作用来进行定量分析的一种方法；原子吸取光谱谱线变宽的因素: 自然宽度、 Doppler变宽 热变宽 、碰撞变宽 Lorentz洛伦兹变宽、Holtsmark霍尔茨马克变宽 、场致变宽、自吸变宽原子吸取光谱法特点 : 挑选性好、灵敏度高、精密度高、操作便利与快捷、应用范畴广缺点 : 光源单一 , 不相宜用于多元素混合物的定性分析, 对于高熔点、形成氧化物、形成复合物或形成碳化物后难以原子化元素的分析灵敏度极低；原子吸取光谱与原子发射光谱的比较1、原子吸取法的挑选性高,干扰较少且易于克服；由于原于的吸取线比发射线的数目少得多,这样谱线重叠的几率小得多；而且空心阴极灯一般并不发射那些邻近波长的辐射线经 ,因此其它辐射线干扰较小；2、原子吸取具有较高的灵敏度；在原子吸取法的试验条件下,原子蒸气中基态原于数比激发态原子数多得多,所以测定的就是大部分原子；3、原子吸取法比发射法具有更佳的信噪比；这就是由于激发态原子数的温度系数显著大于基态原子；原子吸取分光光度计的基本构造:光源、原子化系统、分光系统、检测系统1、光源 空心阴极灯能发射待测元素的共振线、比吸取光谱线更窄的锐线光谱,光的强度稳固且背景小；空极阴极灯的发光强度与工作电流有关；使用灯电流过小,放电不稳固 ; 灯电流过大 ,溅射作用增强 ,原子蒸气密度增大 ,谱线变宽 ,甚至引起自吸 ,导致测定灵敏度降低 ,灯寿命缩短；因此在实际工作中应挑选合适的工作电流；为了获得稳固的发射强度,在使用前要进行预热 ,依据不同元素灯的性质预热时间也不同,一般在 510 分钟；2、原子化系统原子吸取光谱法常用的原子化系统: 火焰原子化系统 , 石墨炉子原子化系统与低温原子化系统（ 1） 火焰原子化系统结构 : 雾化器、预混合室、燃烧器及其高度掌握、燃气与助燃气气路掌握系统特点 : 适用范畴广 , 分析操作简洁 , 分析速度快、分析成本低缺点 : 同轴雾化器雾化效率低, 所需试样溶液体积较大、火焰原子化效率低相伴复杂的火焰反应、原子蒸气在光程中滞留时间短, 燃气与助燃气体稀释作用限制了方法检出限的降低, 而且只能分析液体试样（ 2） 石墨炉原子化系统结构 : 电源、炉体、石墨管石墨炉原子化法 电热原子化法 特点: 采纳直接进样与程序升温方式可达3500 , 升温速度快 , 肯定灵敏度高 , 可分析元素种类多, 所用试样少 ,缺点 : 分析速度较慢 , 分析成本高 , 背景吸取、光辐射与基体干扰比较大3低温原子化法 化学原子化法 : 冷原子化法与氢化物发生法原子吸取分光光度计的性能指标:1、光学系统的波长显示值误差;2、光学系统辨论率;3、基线的稳固性 ;4、吸取灵敏度 ;5、精密度 ;6、检出限 ;干扰及其排除物理干扰 : 试样溶液物理性质变化而引起吸取信号强度变化, 属于非挑选性干扰削减或排除的方法 :1、配置与待测试样溶液基体相一只的标准溶液;2、当配置与待测试样溶液基体相一样的标准溶液有困难时, 采纳标准加入法 ;3、被测试样溶液中元素的浓度较高时, 采纳稀释方法化学干扰属挑选性干扰;排除方法 :1 、转变火焰类型 ;2 、转变火焰特性 ;3 、加入释放剂 ;4 、加入爱护剂 ;5 、加入缓冲剂 ;6 、采纳标准加入法电离干扰 : 由于电离能较低的碱金属与见图金属元素在原子化过程中产生电离而使基态原子数削减,导致吸光度下降 ;削减的方法 : 加入电离能较低的消电离剂、利用强仍原性富燃火焰、采纳标准加入法、提高金属元素的总浓度光谱干扰 :当光谱通带内存在其她谱线, 分子吸取与光散射也属于光谱干扰削减吸取线重叠干扰方法: 选用较小的光谱通带 ; 选用被测元素的其她分析线; 预先分别干扰元素削减直流发射光谱干扰方法: 采纳锐线光源的电源调制技术削减非吸取线光谱干扰方法: 选用较小的光谱通带 ; 选用较小 HCL灯电流仪器操作条件的挑选 : 1、 HCL电流挑选 ;2 、吸取谱线挑选 ;3 、光谱通带的挑选火焰原子化法正确条件挑选:1、火焰的类型与特性挑选;2、燃烧器高度的挑选 ;3、火焰原子化器的吸喷速率石墨炉原子化法正确条件挑选:1、 石墨管类型的挑选;2、升温程序的挑选;3、基体改进剂挑选;4、进样量的挑选 ;紫外- 可见光分光光度法单色光 具有相同能量 相同波长 的光；混合光 复合光 具有不同能量 不同波长 的光复合在一起；红紫橙蓝白光黄青蓝绿互补色 :青max 最大吸取波长 吸取曲线中 ,吸光度最大处的波长 ,就是定性鉴别物质的基础；吸取曲线 以波长 为横坐标 ,吸光度 A 为纵坐标作图所得曲线；光吸取具有挑选性与加与性；红外吸取光谱法红外光谱 又称为 分子振动转动光谱 ,当样品受到频率连续变化的红外光照耀时,分子吸取某些频率的辐 射,并由其振动运动或转动运动引起偶极矩的净变化,产生的分子振动与转动能级从基态到激发态的跃迁,从而形成的 分子吸取光谱 ；一般指有机物质在4000400cm -1 红外线的照耀下 ,挑选性的吸取其中某些频率后, 用红外光谱仪记录所形成的吸取谱带；特点:1) 红外吸取只有振 -转跃迁 ,能量低 ;2) 应用范畴广 ;3) 分子结构更为精细的表征;4) 固、液、气态样均可用,且用量少、不破坏样品;6) 分析速度快 ;7) 与色谱等联用具有强大的定性功能；红外活性分子 产生红外吸取的分子 ,如非对称分子；反之为非红外活性分子,如对称分子；伸缩振动 原子沿键轴方向伸缩 ,键长发生变化而键角不变的振动；分为对称伸缩振动s与不对称伸缩振动 as；变形振动 又称弯曲振动或变角振动,基团键角发生周期变化而键长不变的振动；分为面内变形振动与面外变形振动；产生吸取峰的条件: 只有偶极矩大小或方向有肯定转变的振动才能吸取红外光而发生振动能级跃迁；线性分子具有 3n-5 种振动方式 ,非线性分子有 3n-6 种；产生红外光谱的两个条件:1. 辐射应具有能满意物质产生振动跃迁所需的能量 ;2. 辐射与物质间有相互偶合作用；红外光谱三要素 :峰位、峰强、峰形；红外谱带位移影响因素 :1、诱导效应与共轭效应2、键应力效应 张力效应 3、空间效应4、氢键效应5、振动偶合与费米共振6、物态变化7、溶剂影响红外光谱的最大特点就是具有特点性；基团频率 与肯定的结构单元相联系的振动频率；核磁共振定量分析的基础就是结构分析；核磁共振波谱法优点 :定性测定不具有破坏性,定量测定不需标样,灵敏度、精确度、精确度及分析速度高；核磁共振谱定量分析的基础:各化学环境不同的质子吸取蜂的面积,只与所包含的质子数有关,可直接依据各共振峰积分值的比值推算所代表的各自旋核的数量；NMR 定量方法 : 1、要求 :1、被测物质的结构必需就是已知;2、核磁共振谱线已归属;3、抱负的被测信号就是多个质子的单蜂;4、信号两端的基线位置一样;5、每一信号需进行5 次积分 ,取平均值；2、分类 :1、内标肯定测定法常用内标 : 六甲基环三硅氧烷与六甲基环三硅胺2、外标肯定测定法样品与外标分别放置在两只核磁管中测定,二管直径必需相同,最好使用同一支样品管；样品与外标必需交叉重复测定以提高分析的精确性；3、相对含量测定法被测样品就是由如干已知化合物组成,假如没有合适的内标化合物时,可采纳以其中一个组分做“标样”；4、峰高定量法通过求出样品中某组质子的峰高,求出样品的含量；峰高与自旋 -自旋弛豫常数有关,而后者与化合物的类型有关,受局部磁场的影响,故不能直接用于定量； 被积信号过于接近而无法精确测定各质子峰积分面积时,可考虑用峰高法进行定量分析,通过试验求出峰高与含 量之间的关系 ,校正误差； 四 质谱法质谱仪 :进样系统、离子源、质量分析器、检测器、运算机系统药用植物中的组分提取分析:低极性组分 GC-MS大极性组分、生物大分子HPLC-MS蛋白质测定 :基质帮助激光解吸/ 电离飞行时间质谱 MALDI-TOF MS 、电喷雾质谱 ESI-MS；蛋白质分子量测定 :1、多肽与蛋白质的 ESI-MS分析采纳正离子方式进行,ESI-MS可以产生多电荷离子峰使检测的分子质量范畴扩大；2、ESI-MS得到的就是一簇多电荷的质谱峰群,相邻两簇质谱峰之间电荷数差1；3、P:多电荷离子质荷比,Mr: 蛋白质分子量 ,Ma: 正离子分子量 来源为氢时 ,Ma=1 、0079,Z:多电荷离子带电量故,Mr=P-MaZ=P-1Z4、高辨论质谱求电荷数:,P、P:相邻同位素峰的质荷比蛋白质鉴定 :肽质量指纹谱 +基于串联质谱多肽测序肽质量指纹谱 PMF 蛋白质的氨基酸序列经酶解为肽段序列,所测得的肽混合物质量数即称为肽质量指纹谱； 五 色谱法色谱法导论色谱法 就是一种重要的分别分析方法,它就是依据组分与固定相与流淌相的作用力不同而达到分别目的；色谱流出曲线或色谱图样品注入色谱柱后 ,信号随时间变化的曲线；基线 试验条件下 ,样品加入色谱柱后仅有纯流淌相进入检测器时的流出曲线,反映了 S/N信噪比 大小的稳固性的水平直线；峰高 色谱峰顶点与基线的距离；保留值 :1、死时间 t 0 不与固定相作用的物质从进样到显现峰极大值时的时间,与色谱柱的间隙体积成正比；流淌相平均流速 :,L 为柱长2、保留时间 t R 试样从进样到显现峰极大值时的时间；包括组份随流淌相通过柱子的时间t0 与组份在固定相中滞留的时间；保留时间为色谱定性依据,但同一组份的保留时间仍与流速有关,因此有时需用保留体积来表示保留值；3、调整保留时间 t= t R - t 0R某组份的保留时间扣除死时间后的时间,它就是组份在固定相中的滞留时间；即 t R4、死体积 V0 色谱柱管内固定相颗粒间间隙、色谱仪管路与连接头间间隙与检测器间隙的总与；V0=t 0Fco,Fco:柱出口的载气流速ml/min5、保留体积 VR 从进样到待测物在柱后显现浓度极大点时所通过的流淌相的体积；6、调整保留体积 VR 某组份的保留体积扣除死体积后的体积；即VR = VR - V07、相对保留值 r2,1 组份 2 的调整保留值与组份1 的调整保留值之比； r2,1 只与柱温与固定相性质有关, 而与柱内径、柱长、填充情形及流淌相流速无关, 又称挑选因子或者分别因子: 反映两组分间的分别情形,=1,就两组分无法分别,而 越大就分别越好；两组分在两相间的安排系数不同,就是色谱分别的先决条件；区域宽度 :1、标准偏差 峰高 0、 607 处的峰宽的一半；2、半峰宽 W1/ 2 峰高一半处的峰宽；3、峰 底宽 W 色谱峰两侧拐点上切线与基线的交点间的距离；色谱流出曲线的意义 :色谱峰数样品中单组份的最少个数;色谱保留值定性依据;色谱峰高或面积定量依据;色谱保留值或区域宽度色谱柱分别效能评判指标;色谱峰间距固定相或流淌相挑选就是否合适的依据；安排系数 K 肯定温度与压力下两相达平稳后,组分在固定相与流淌相浓度的比值；安排比 容量因子或者保留因子k 肯定温度与压力下两相达平稳后,组分在固定相与流淌相质量的比值；塔板理论假定 :1) 塔板之间不连续 ;2) 塔板之间无分子扩散 ;3) 组分在各塔板内两相间的安排瞬时达到平稳达一次平稳所需柱长为理论塔板高度H;4) 某组分在全部塔板上的安排系数相同;5) 流淌相以不连续方式加入以一个一个的塔板体积加入；当塔板数 n 较少时 ,组分流出曲线呈峰形 ,但不对称 ;当塔板数 n>50 时,峰形接近正态分布；速率理论认为 :单个组分粒子在色谱柱内的运动就是高度不规章的、随机的 ,在柱中随流淌相前进的速度就是不均一的；塔板理论讨论的就是 平稳态 ,速率理论就从 动态 角度动身 ,提出转变色谱条件、掌握流速、提高分别效率的理论；色谱分别条件挑选 :1、两组份峰间距足够远:由各组份在两相间的安排系数k打算 ,即由色谱过程的 热力学 性质打算；2、每个组份峰宽足够小:由组份在色谱柱中的传质与扩散H 或 n 打算,即由色谱过程 动力学 性质打算；气相色谱法气相色谱仪 :载气系统、进样系统、色谱柱系统、检测系统、记录系统固定液的挑选 相像性原就 ;组分极性差别较大选用极性固定液,沸点差别较大选用非极性固定液；被分别物质固定液主要作用力出峰次序非极性非极性色散力按沸点次序 ,沸点低者先出柱；相同沸点的极性组分先出 ；中等极性中等极性诱导力与色散力按沸点次序 ,沸点低者先出柱；相同沸点的极性组分 后出 ；极性能形成氢键的试样极性氢键型静电力氢键力按极性次序出柱 ,非极性组分先出柱；按形成氢键的才能大小出柱；常用检测器浓度型热导检测器 TCD电子捕捉检测器 ECD有机与无机 ,适用范畴广 ;一般氢气作载气 ,氮气灵敏度差只对含有电负性强元素的物质有响应;氮气作载气氢焰离子化检测器FID仅用于有机物检测 ;氮气作载气 ,氢气作燃气 ,空气助燃质量型流量关系一般为火焰光度检测器 FPD热离子化检测器 TID,N 2:H2:Air 为 1:11、5:10氦气氦气、氮气速率理论应用1、A=2dp减小 A:粒度较细 ,颗粒匀称 , 一般为 6080 目或 80100 目的填料；2、B=2Dg减小 B:载气线速度较低时用氮气,较高时宜用氦气或氢气;较低的柱温； 1填充柱 <1,空心毛细管柱 1；2Dg 与载气的分子量的平方根成反比,随柱温上升而增大,随柱压增大而减小；3、减小 C:固定相的液膜厚度要薄 ;组分在液相中的扩散系数要大；分别度 R 应用1、增大 k: 峰间隔变大；2、增大 n: 峰宽变窄；色谱柱评判 :1、色谱柱效率峰尖评判 :理论板高 H、理论塔板数 n计策 :将 Van Deemter各因素优化2、挑选性峰的分别度评判 :分别因子或分别度R计策 :挑选极性相当的固定相3、峰的对称性吸附现象评判 :拖尾因子 f计策 :色谱柱进一步老化柱温挑选原就 :不超过固定液最高使用温度;在良好分别前提下,尽可能采纳低柱温；柱长挑选原就 :在达到肯定分别度的条件下,应使用完可能短的柱；其她条件 :1、气化室温度等于或稍高于试样的沸点,不超过沸点 50以上 ,高于柱温 30 50；2、检测室温度高于或至少等于柱温；3、进样速度快 ,试样不超载；定量分析的依据 :在恒定的试验条件下 ,峰面积 或峰高 与组分的 含量成正比；同一检测器对不同物质具有不同的响应灵敏度；需要校正 定量分析方法 :外标法校正曲线法与外标一点法内标法校正曲线法与内标一点法气相色谱与液相色谱的比较1、流淌相GC用气体做流淌相 载气 ,常用载气 氮气、氦气与氢气 种类少 ,可挑选范畴小 ,对分别影响小 ;LC中,流淌相种类多 ,对分别结果奉献大；2、固定相GC 一般选定一种载气,然后通过转变色谱柱 固定相 以及操作参数 柱温与载气流速 来优化分别 ;LC 就往往就是选定色谱柱后 ,通过转变流淌相的种类、组成以及操作参数柱温 来优化分别；3、分析对象GC分别的样品可挥发且热稳固,沸点一般不超过 450 度；已知化合物中 ,有 2025%可用 GC 直接分析 ,其余原就上可用 LC分析；4、检测设备不同5、制备分别GC收集馏分后载气很简洁除去,原理上有优势 ,但由于其柱容量远不及LC,故有用价值很有限,而制备 LC就有很广泛的应用；高效液相色谱法高效液相色谱法 HPLC 在经典液相色谱法的基础上,引入了气相色谱法的理论与试验技术,以高压输送流淌相 ,采纳高效固定相及高灵敏度检测器,进展而成的现代液相色谱分析方法；具有分别效率高、挑选性好、分析速度快、检测灵敏度高、操作自动化与应用范畴广的特点；(I) HPLC与经典 LC比较主要区分 :固定相、输液设备与检测手段的差别1. 经典 LC:仅做为一种分别手段 ;柱内径13cm, 固定相粒径 >100m且不匀称 ;常压输送流淌相 ;柱效低 ;分析周期长 ;无法在线检测；2、HPLC:可用于分别与分析;柱内径 26mm, 固定相粒径 <10m 且匀称 ;高压输送流淌相 ,分析速度快 ;柱效高 ; 采纳高灵敏度检测器 ,分析时间大大缩短;可以在线检测；(II) HPLC 与 GC比较相同 :兼具分别与分析功能 ,均可以在线检测区分 :分析对象与流淌相的差别1、GC:分析可气化、热稳固性好且沸点较低的样品;采纳惰性气体为流淌相,组分与流淌相无亲合作用力,只与固定相作用 ;试验过程常需加温；2、HPLC:分析样品范畴广 ,不受样品挥