设计性实验报告植物可溶性蛋白质和糖含量的测定(共7页).doc

精选优质文档-倾情为你奉上设计性实验报告题 目 植物可溶性蛋白质和糖含量的测定课程名称： 基础生物化学实验实验学期： 2011 至 2012 学年 第 一 学期植物组织中可溶性蛋白质和糖含量的测定摘要 本文以生菜、苹果为材料，采用考马斯亮蓝法（蛋白质）、蒽酮法（糖）、分光光度计法进行了可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定。结果表明：生菜的蛋白质含量为5.88（mg/g），糖含量为0.0739g/100g；苹果中蛋白质含量为0.2926（mg/g），糖含量为0.2126g/100g。即说明：生菜中蛋白质含量高于苹果，但苹果中的糖含量更高。关键词 可溶性蛋白、可溶性糖，考马斯亮蓝G-250染色法，蒽酮法，含量测定1、材料与方法1.1 蛋白质含量测定标准蛋白质溶液 、考马斯亮蓝试剂、生菜、苹果分光光度计、离心机、研钵、烧杯、电子秤、移液管、试管等1.2 糖含量测定200ug/ml标准葡萄糖、蒽酮试剂、浓硫酸、生菜、苹果试管、水浴锅、分光光度计、研钵、电子秤、移液管、量筒、试管架2、实验步骤蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝G-250染色法）2.1标准曲线的绘制 取六只试管，按下表加入试剂，摇匀，向个管加入5ml考马斯亮蓝试剂，摇匀，并放置5min左右，以0号试管为空白对照，在595nm下比色测定吸光度。以蛋白质含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。 试剂管号012345标准蛋白质（ml）00.200.400.600.801.00蒸馏水量（ml）1.000.800.600.400.200蛋白质含量（ug）0204060801002.2样品测定 2.2.1样品提取 分别秤取生菜、苹果鲜样 0.250.5g，用5ml蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后，3000r/min离心10min，上清液备用。 2.2.2 吸取样品提取液1.0ml（蛋白质含量适当稀释），放入试管中，加入5ml考马斯亮蓝试剂，摇匀，放置2min后在595nm下比色，测定吸光度，并通过标准曲线查得蛋白质含量。糖含量测定2.3.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，作出标准曲线。2.4.可溶性糖的提取称取1克生菜叶和苹果，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。置沸水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后3000r/min离心10min，滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。2.5.糖含量测定用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中，加1ml水和0.5ml蒽酮试剂。再缓慢加入5ml浓H2SO4（注意：浓硫酸遇水会产生大量的热！），盖上试管塞后，轻轻摇匀，再置沸水浴中10分钟（比色空白用2ml蒸馏水与0.5ml蒽酮试剂混合，并一同于沸水浴保温10分钟）。冷却至室温后，在波长620nm下比色，记录光密度值。查标准曲线上得知对应的葡萄糖含量（g）。3、结果记录及处理3.1（蛋白质）管号012345生菜苹果蛋白质含量（ug、x）020406080100Y1Y2吸光度（nm、y）00.1650.2560.3850.4860.5970.4990.183 散点图表示： 通过计算 上表可用y=0.00547x+0.0496表示样品中蛋白质的含量=（C*Vt/（Vs*Wf*1000）（mg/g） 式中：C查标准曲线值，ug Vt提取液总体积，ml Wf样品鲜重，g Vs测量时加样量，ml 所以 生菜中蛋白质的含量=5.88（mg/g）苹果中蛋白质的含量=0.2926（mg/g）3.2 （糖） 管号123456生菜苹果葡萄糖含量（ug、x）04080120160200Y1Y2吸光度（nm、y）00.01980.2870.4790.5890.7410.7390.780散点图表示 通过计算 上表可用y=0.00347x+0.0424表示 样品中糖含量（g/100g鲜重） （计算所得糖含量（ug）*稀释倍数）/（样品重（g）*106）*100 则 生菜样品中糖含量=0.0739g/100g 苹果样品中糖含量=0.2126g/100g4、结果讨论 结果表示生菜的蛋白质含量为5.88（mg/g），糖含量为0.0739g/100g；苹果中蛋白质含量为0.2926（mg/g），糖含量为0.2126g/100g。即说明：生菜中蛋白质含量高于苹果，但苹果中的糖含量高于生菜。5、收获体会 生物学是一门以实验为基础的自然科学，现代生物科学的发展尤其依赖科学实验。在生物教学中，实验、学习和观察等实践环节对我们掌握生物学知识、科学方法、培养我们的动手能力和形成科学素质都起到了至关重要的作用。正是因此，从我们开始接触生物这门学科开始，就不断有生物实验课程，锻炼我们各式各样的能力。生物化学是一门严密的课程，对于其每一步，都需要我们认真操作好每一步，认真读取数据并按照其规则准确计算。对待这样一门学科，我们必须严谨认真。 【参考文献】 1 中国蔬菜2007第10期 吴青君 龚佑辉 徐宝云 2 曲亚英 苹果的特征特性及其栽培技术 J 3 全妙华，陈东明苹果的营养保健作用与开发利用 J 4 王秀奇，秦淑媛，高天慧，等基础生物化学实验 (第二版) M专心-专注-专业