例临床生育不良者异常染色体核型分析(共5页).doc

精选优质文档-倾情为你奉上覃靖QIN Jing覃靖通讯作者: 杨泽(1955), 男, 研究员, 博士生导师, 研究方向：分子遗传学。E-mail: (19522008), 女, 研究员, 研究方向：细胞遗传学。作者简介:收稿日期: 20080528; 修回日期: 20080722基金项目: 国家自然科学基金项目(编号：, ), 国家重点基础研究发展规划(973 计划)项目(编号：2006CB), 国家人类遗传资源共享平台建设项目(编号：2006DKA21301)资助Keywords: new karyotype; abnormal karyotype; chromosome; clinical reproductive abnormalityAbstract: To study the relationship between chromosomal abnormality and clinical ending events of reproductive abnor-mality, G-banding and karyotype analyses were carried out by using chromosome preparations from peripheral blood lym- phocytes. Out of 5 774 cases with reproductive abnormality, 550 individuals had chromosomal abnormalities. Among them,255 cases (46.36%) were trisomy, 91 cases (16.55%) were reciprocal translocation, 85 cases (15.45%) were chromosomal inversion, 81 cases (14.73%) were deletions, 21 cases (3.82%) were Robertsonian translocation, 7 cases (1.27%) were short arm increment, 6 cases (1.09%) were Y chromosome increment and 4 cases (0.73%) were abnormal satellites. Thirty-two cases with novel chromosomal abnormality karyotypes in them, being complicated by miscarriage, sterility, and congenital malformation, were firstly reported. The results suggested that chromosomal abnormality could be the one of main factors related to the bad reproductive ending events.XIANG Lei2, SUN Liang2, YANG Ze21. Guangxi Zhuang Autonomous Region Women and Children Care Hospital, Nanning , China;2. Institute of Geriatrics and Beijing Hospital, Minstry of Health, Beijing , China1, ZHENG Chen-Guang1, DU Juan1, CHEN Ke1, TIAN Xiao-Xian1,Analysis of the chromosomal abnormality in 5774 patients withclinical reproductive abnormality and 32 new karyotypes关键词: 新核型; 异常核型; 染色体; 临床生育不良摘要: 为了探讨异常染色体核型在临床生育不良人群中的分布及其与临床生育结局的关系, 采用常规方法制备外周血淋巴细胞染色体, 经 G 显带, 对 5 774 例临床生育不良者做了外周血染色体核型分析, 检查出异常核 型 550 例。其中三体核型 255 例占 46.36, 相互易位 91 例占 16.55, 染色体倒位 85 例占 15.45, 染 色体缺失 81 例占 14.73, 罗伯逊易位 21 例占 3.82%, 短臂增加 7 例占 1.27%, 大丫 6 例占 1.09%, 随体异常4 例占 0.73%。其中 32 例为首次报道的新核型。其临床结局有流产、不育、先天畸形等。结果表明携带异常 核型染色体, 可能是影响生育的重要原因之一。1. 广西壮族自治区妇幼保健院, 广西壮族自治区儿童医院, 南宁 ;2. 卫生部北京医院, 卫生部老年医学研究所, 北京 郑陈光 1, 杜娟 1, 陈科 1, 田晓先 1, 相蕾 2 , 孙亮 2 , 杨泽 21 ,5774 例临床生育不良者异常染色体核型分析及 32 种人类染色体新核型报告DOI: 10.3724/SP.J.1005.2009.00142ISSN 0253-9772研究报告HEREDITAS (Beijing) 2009 年 2 月, 31(2): 142146专心-专注-专业等: 5774 例临床生育不良者异常染色体核型分析及 32 种人类染色体新核型报告143覃靖第 2 期18 w 时, 进行 B 超指引下羊膜腔穿刺, 抽取羊水 20在妊娠1.2.3 产前诊断对 32 例首次报道新核型中的 2 例患者,采用染色体自动分析分析。异常者增加观察数目,仪校对。清、2% PHA、pH 7.2 的 RPMI 1640 培养液中, 在37下培养 72 h, 终止前 2 h 加入秋水仙素终浓度为0.2 g/mL。常规收获细胞。1.2.2染色体标本制备各标本均按我室常规制片, G 显带处理, 必要时 做 C 带等。每例镜检 33 个细胞。选取 3 个核型详细0.2 mL, 接种含 20%小牛血2.2染色体异常新核型分析在 550 例异常的染色体核型中有 32 例核型为第 一次报道。其中 30 例为平衡易位, 一例为 5 号臂内 倒位, 一例为假双着丝粒。32 例患者多有习惯性流 产、不良生育史、性腺发育不良等特征(表 1)。2.3染色体异常新核型的家系传递分析为了验证平衡易位的遗传效应, 我们从 32 例新 核型中选出典型的两例进行家系传递分析。经家系 调查易位携带者在家族中稳定遗传。病例 1: 先证者 为一个涉及 3 条染色体的复杂易位携带者, 自然流 产 4 次、均发生在孕期 50 至 90 d, 外周血染色体核 型分析: 46, XX, t(4; 13; 10)(pl2; q23; ql4), 其父、其 兄的核型为 46, XY, t(2; 20; 4; 13; 10)(2q3; 20p1 2)(20p12; 2q31)(4p12; 10q23)(10q23; 13q14)(图 2)。1.2方法1.2.1细胞培养取受检者外周血图 1异常染色体分布t: 平衡易位; rob: 罗伯逊易位; inv: 倒位; del: 缺失; tri: 三体;others: 其他。5 774 例受检者中 80%以上都有2 次自然流产,最多流产 5 次以上。其余不到 20%者有不良生育史, 包括死胎、畸胎、出生畸形儿(先天性智力发育障碍、 体格发育障碍、原发性闭经、外生殖器畸形)等。受 检者的民族包括壮、汉、瑶族。已经与所有受检者 签署了知情同意书。1.1研究对象1材料和方法16.55%, 染色体倒位和缺失为 85 例和 81 例分别占15.45% 和 14.73%, 罗伯逊易位 21 例占 3.82%, 短 臂增加 7 例占 1.27%, 大 Y 6 例占 1.09%, 随体异常4 例占 0.73%(图 1)。46.36%, 居首位, 其次为相互易位 91 例占例占性出生缺陷，有必要检测患者是否携有染色体核型畸变, 并结合临床症状进行产前诊断是极其重要 的。然而, 广西的异常染色体核型在临床生育不良 人群中的分布及其与临床生育结局的关系仍然不清, 有必要在细胞遗传学染色体核型分型基础上进行研 究。由此, 本文对广西 5 774 例自发流产及有不良 生育史的患者进行外周血核型分析，现将结果和新 发现核型介绍如下。所以, 为预防先天胚胎中可以高达50%以上1, 2。在 5 774 例染色体检查结果发现: 正常核型者5 224 例, 占 90.47%; 染色体异常核型 550 例, 占受 检者的 9.53%(表 1)。在异常核型中三体核型有 2552.1核型分析结果与分析2mL, 离心, 收集羊水细胞, 制片, 进行染色体 G 显带、核型分析。染色体病(Chromosomal disease)是由于先天性的染色体数目异常或结构异常而引起的具有一系列 临床症状的综合征，如患儿智力低下、发育迟缓和 先天性畸形等，同时还会造成流产、死产等。先天 性的染色体数目异常或结构异常也称为染色体畸 变，在妊娠人群中的患病率约为 5%10%, 而在流产46, XX, t(12; 17)(q15; q21)46, XX, t(2; 3)(p23; p11)46, XX, t(9; 18)(p23; p11)46, XX, inv(5)(q22; q32)46, XX, t(9; 15)(q32; q15)46, XX, t(4; 13; 10)(p12; q23; p14)46, XX, t(4; 18; 12; 10)(p11; q11; p13; q11)46, XY, t(8; 21)(q11; q22)46, XY, t(11; 21)(q23; q11)46, XX, t(9; 20)(q22; q11)46, XY, t(6; 21)(q11; q22)46, XX, t(6; 20)(q23; q13)46, XX, t(7; 10)(q13; q26)46, XX, t(2; 7)(q22; q34)46, XY, t(7; 16)(q22; q13)46, XY, t(14; 18)(q21; q21)46, XX, t(3; 6; 11)(p25; p23; p13)46, XX, t(3; 4)(p12; p25)46, X, t(x; 6)(q22; q25)46, XX, t(10; 16)(q11; q11)46, XX, t(x; 7)(p11; p15)46, XX, t(12; 15)(q22; q15)45, /46, X, psu dic(X)46, XX, t(1; 4)(q24; q35)46, XX, t(1; 16)(p13; q13)46, XX, t(10; 22)(q24; q11)46, XX, t(12; 14)(q15; q15)46, XX, t(2; 20)(4; 13; 10)46, XX, t(6; 17)(p21; q23)46, XX, t(4; 11)(p16; p15)46, XX, t(9; 21)(p23; q21)46, XX, 1qh+ t(4; 10; 18)自然流产 3 次不良生育史自然流产 1 次, 死胎 1 次 不孕不育, 阴道短小( 2 cm ) 自然流产内 3 次自然流产 4 次葡萄胎 1 次, 自然流产 1 次生育 1 胎下颌缺陷, 自然流产 3 次 其妻习惯性流产 4 胎习惯性流产 3 胎 其妻自然流产 2 次左手通观掌, 其妻自然流产 2 次 自然流产 3 次原发性闭经、子宫附件缺如, 第二性征发育欠佳 通观掌、尿道下裂、小阴茎、大阴唇内有隐睾 不良生育史自然流产 3 次 自然流产 2 次 无子宫、卵巢、月经 自然流产 2 次 智障、眼距宽、鼻梁低 自然流产 3 次 不良生育史自然流产 2 次, 死胎 1 次 自然流产 2 次不良生育史 自然流产 4 次自然流产 2 次, 死胎 1 次 习惯流产, 不良生育史不良生育史自然流产 3 次自然流产 1 次, 死胎 1 次临床表现染色体异常核型世界首报 32 种人类染色体新核型表 1对夫高危人群中的平衡易位频率是 1.58%，即 32妇中就有一个平衡易位携带者，高约 79 倍。染色体核型分析是临床生育不良检查的一项重要内容。对于有不明原因的流产史、不孕不育夫妇 进行染色体检查, 不仅对病因学诊断有着重要的意3论讨其父有流产史,其进行家系调查, 其母核型正常,核型异常与先证者同型(图 3)。义, 更重要的是检出携带者, 包括家族中的携带者,对明确有染色体异常者, 应进行产前诊断, 避免遗 传病患儿出生。因此孕前染色体检查是评价生育能 力和预测生育结果的重要指标。本文在 550 例异常染色体核型中首次报道了32 例新的异常核型, 确认其中 30 例为平衡易位,大量资料证明一般人群中平衡易位携带者的频率是1/5000。即 2500 对夫妇中就有一个平衡易位携带 者。与其相比，我们研究的 5 774 例临床生育不良病例 2: 先证者为 25 岁女性其核型为 46, XX,t(12; 17), 怀孕 43 d 前来就诊, 曾生过两个畸形儿,第一个肛门闭锁, 出生后 5 min 死亡。第二个畸形儿5 个月后死于先天心脏病。再次怀孕出现流产。对第 31 卷HEREDITAS (Beijing) 2009144等: 5774 例临床生育不良者异常染色体核型分析及 32 种人类染色体新核型报告145覃靖第 2 期罗伯逊易位可产生 6 种配子, 其中一种是正常的,一种是携带者, 其余 4 种是不平衡配子; 而遗传物 质的不平衡严重影响胚胎的发育, 造成流产、死胎 及畸形儿。总之, 易位虽然会导致多次流产, 但仍有型, 由两条短臂重接形成的衍生染色体很小, 通常在细胞分裂过程中丢失, 所以罗伯逊易位的核型只 有 45 条染色体。在本文中多数的罗伯逊易位发生 在 13、14 号染色体上, 15、21、18 也有出现5, 6。正常胎儿或平衡易位携带者出生, 安全的方法是怀孕后及时作产前诊断。夫妇一方为平衡易位携带者 时, 可在妊娠早期取绒毛组织或妊娠中期取羊水细胞 做染色体检查, 判断胎儿是否正常。同源罗伯逊易位 较罕见, 按照孟德尔分离律只能产生两种配子, 均不 正常, 与正常人婚配, 后代只能为单体或三体型。对发现的染色体异常新核型研究显示 : 约94%(30 例)是平衡易位携带者,为了验证平衡易位的 遗传效应, 我们从 32 例新核型中选出典型的两例加 以分析。经家系传递分析(图 2、3)其子代核型有正 常、相互易位, 还有部分三体、部分单体等型。病 例 1 先证者为一个涉及 3 条染色体的复杂易位携带 者 46, XX, t(4; 13; 10)(pl2; q23; ql4)该相互易位在 这个家族已相传三代, 而且通过携带者继续相传。 病例 2 先证者为 25 岁女性其核型为 46, XX, t(12;本文报道最多的先天性染色体结构异常是平衡易位，平衡易位是指遗传物质交换，但不增加或减 少遗传信息。目前认为其起源可能有: (1)遗传性平衡 易位, 由于亲代的父方或母方之一是平衡易位携带 者, 由亲代遗传给子代; (2)新发生的结构畸变, 父 母核型正常, 由于亲代的卵细胞或精细胞早期受 损3, 4。其次为罗伯逊易位，这是平衡易位的特殊类图 3先证者 46, XX, t(12; 17)A: 染色体图; B: 家系图。图 2先证者 46, XX, t(4; 13; 10)(pl2; q23; ql4)A: 染色体图; B: 家系图。1 Philipp T, Philipp K, Reiner A, Beer F, Kloues DK. Em-bryoscopic and cytogenetic analysis of 233 missed abor- tions: factors involved in the pathogenesis of develo-参考文献(References):1098765432pmental defects of early failed pregnancies. Hum Reprod,2003, 18(8): 17241732.DOIKhoury MJ, Erickson JD. Recurrent pregnancy loss as an indicator for increased risk of birth defects: a popula- tion-based case controlstudy. Paediatr Perinat Epidemiol,1993, 7(4): 404416.DOILespinasse J, North MO, Paravy C, Brunel MJ, Malzac P, Blouin JL. A balanced complex chromosomal rearrange- ment (BCCR) in a family with reproductive failure. Hum Reprod, 2003,10(18): 20582066.DOIDaniel A, Bone A, Gallano P. Prospective risk in recipro-cal translocation heterozygotes at amniocentesis as deter- mined by potential chromosome imbalance sizes. Data of the European Collaborative Prenatal Diagnosis Centres. Prenal Diagn, 1986, 6(5): 315350.DOIEscudero T, Lee M, Carrel D, Blanco J, Munne S. 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Younsei Medical J, 2001,42(3): 345348.17), 对其进行家系调查, 其母核型正常, 有流产史,其父核型异常与先证者同型。常染色体结构异常往 往导致女性习惯性流产, 导致不育的报道不多。可 能是由于男性产生的精子数量多, 因此能满足受精 过程中对精子质量淘劣留优的自然选择要求, 而女 性每月排出的卵子通常只有一个, 没有选择的余 地。这种患者精子数少或畸形率高, 由于不涉及性 染色体异常, 一般第二性征发育良好。虽然平衡易 位没有遗传物质丢失, 但可能造成基因断裂, 从而 导致不育。上述异常核型产生的原因可能在第一次减数分 裂中期形成相互易位型的四射体, 按照遗传学理论, 可形成 18 种类型的配子, 这 18 种配子与正常的配 子结合, 将形成 18 种类型的合子, 其中仅一种正常, 一种为表型正常的易位携带者, 其余 16 种均为染色 体不平衡易位的合子79。但如果是以易位不平衡的 形式存在,可随机引起整条染色体失活，或者是易位 染色体特殊片段的失活。就会造成流产, 胎儿停止 发育, 或发育成为一个严重的智力障碍, 伴有先天 性畸形的部分三体, 部分单体综合征的个体。当然，除父母染色体畸变下传外也有可能是 新突变发生在卵子或精子中 。患者的染色体复杂易 位, 导致异常卵子更多, 因此在早期胚胎细胞分裂 就不正常, 可能导致葡萄胎及流产的重要因素10。 因此在孕早、中期对染色体畸变有适应症的孕妇必 须做产前筛查和产前诊断。综上所述, 通过对 5 574 例临床生育不良者的 染色体核型分析, 表明染色体异常是影响生育的重 要因素之一, 其中新发现的 32 例异常核型也证明了 这一点。因此, 在临床生育不良人群中继续完善和 开展染色体分析具有重要的意义。第 31 卷HEREDITAS (Beijing) 2009146