木聚糖酶活力测定(共2页).docx

精选优质文档-倾情为你奉上木聚糖酶活力测定原理：木聚糖是植物半纤维素的主要成分，为自然界中广泛存在、含量仅次于纤维素的可再生多糖资源，占细胞干重的7一35。木聚糖酶是一类可将木聚糖降解成低聚糖和木糖的复合酶系。它以内切方式降解木聚糖主链架的-l，4-木糖苷键，其水解产物主要是木二糖和木寡糖，少量的木糖和阿拉伯糖。木聚糖酶水解木聚糖底物生成的还原性糖，可在煮沸条件下与DNS显色剂生成棕红色的氨基化合物。在一定范围内，还原糖的生成量与反应液的颜色强度成正比。因此可通过测定棕红色的氨基化合物540nm波长下吸光度来测定木聚糖酶活力。试剂：DNS溶液：酒石酸钾钠182 g，溶于500mL蒸馏水中，加热，于热溶液中依次加入3，5-二硝基水杨酸6.3 g，NaOH 21g，苯酚5 g，搅拌至全溶，冷却后用蒸馏水定容至1000 mL，贮于棕色瓶中，室温保存.1mg/mL木糖标准溶液：无水木糖于80 °C烘至恒重，称取0.1 g于烧杯中，加适量蒸馏水溶解,转入容量瓶中并定容至100 mL。方法：标准曲线的绘制：取6支20mL的试管按下表顺序依次加入各试剂试剂(单位：mL)试管号 1234561mg/mL木糖标准溶液00.20.40.60.81.0蒸馏水21.81.61.41.21.0DNS1.51.51.51.51.51.5沸水中煮沸5min,流水冷却2min,各管中加16.5 mL蒸馏水，定容到20mL，摇匀，放置20min后，测定540nm处吸光度。待测液木聚糖酶活力的测定待测样品空白对照1.加底物1%的木聚糖溶液4 mL1. 加酶液1 mL2.50 °C预热3 min2. 沸水煮沸10 min3.加酶液1 mL3. 加底物1%的木聚糖溶液4 mL4.混合4. 混合5.50 °C水解10 min5. 50 °C水解10 min6.加DNS试剂2 mL6. 加DNS试剂2 mL7.混合7.混合8.沸水浴中10 min8.沸水浴中10 min9.冷却定容至20 mL 9.冷却定容至20 mL10.样品540 nm下测定10.样品540 nm下测定专心-专注-专业