黄芩苷的提取和分离纯化(共9页).doc
精选优质文档-倾情为你奉上姓名：黄 冰 专业：药 化 学号：黄芩中黄芩苷的提取和精制一、 实验目的1掌握从黄芩中提取、精制黄芩苷的原理、方法及操作要点。2掌握黄芩苷的结构鉴定原理及方法。二、 实验原理 黄芩苷为一连有葡萄糖醛酸结构的黄酮化合物, 具有一定的脂溶性, 所以在提取时可以选择一定浓度的乙醇溶液作为提取液。黄芩苷为葡萄糖醛酸苷, 具有弱酸性, 其可在碱性溶液中溶解, 形成钠盐,在提取液中加酸酸化，使黄芩苷游离析出。利用黄芩苷能溶于碱，不溶于酸的性质使之与酸性杂质分离，进行精制。本实验选用了60%乙醇回流提取，酸沉、碱溶、酸沉的方法进行精制，并对精制品进行了简单的定性鉴别，没有对照品，所以没做定量实验。三、实验材料与仪器 材料：黄芩干燥根，硅胶G薄层层析板 仪器：UV2550紫外可见分光光度计（日本岛津），Spectrum 100傅立叶红外光谱仪，旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），LXJ-离心沉淀机（上海医用分析仪器厂），200g摇摆式高速中药粉碎机，电子天平，循环水式真空泵，抽滤装置，圆底烧瓶（500ml），水浴锅，冷凝管，索氏提取器，层析缸 试剂：2mol/L盐酸，60%乙醇，10%氢氧化钠，乙酸乙酯，甲醇，甲酸四、 实验步骤1 黄芩苷的提取将黄芩干燥根粉碎，称取粗粉100g，装入1L的圆底烧瓶，加入4倍量即400ml的60%乙醇，搅拌均匀，90回流提取1h。提取完进行抽滤，将滤渣倒入圆底烧瓶中，加300ml 60%乙醇继续回流30min，重复上一步再回流30min。合并3次滤液，65减压浓缩至无醇味，将水液水浴加热到80，用2mol/L的盐酸调PH至12，保温30min，室温静置12h，沉淀，2000r/min离心2min，弃上清，向沉淀中加10倍水量即700ml，搅拌均匀，加10%氢氧化钠调PH至7，静置1h，2000r/min离心2min，弃沉淀，将上清液加热至40，搅拌均匀，加入等体积即700ml的60%乙醇，静置1h，2000r/min离心2min，弃沉淀，将上清液水浴加热至80，用2mol/L的盐酸调PH至12，保温30min，室温静置1h，沉淀，离心，弃上清液，得粗黄芩苷湿重43g。2 黄芩苷的精制 向粗黄芩苷中加入7倍水量即300ml，水浴加热至70，10%氢氧化钠调PH至7，完全溶解后，用2mol/L的盐酸调PH至6，加乙醇至含醇量70%，未出现明显沉淀，所以没过滤，用2mol/L的盐酸调PH至12，70保温20min，静置过夜。次日，沉淀很少，又80保温30min，离心，弃上清，得精制品，向圆底烧瓶中加入约60倍量甲醇，将精制品装入索氏提取器的滤纸中，加热回流至提取液颜色很浅，趁热抽滤，滤液减压浓缩一半，冷却，静置，结晶析出，静置30min，过滤，甲醇洗涤，得黄芩苷再精制品。用40倍量甲醇加热回流溶解，重复上述步骤可得黄芩苷重结晶。3 黄芩苷的薄层层析 吸附剂：硅胶G薄层层析板，厚0.250.3mm 展开剂：乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（7：2：0.5：0.5 v/v/v） 样品配成合适浓度的甲醇液，用点样毛细管点样，每点一次要等到干了才能点下次，点样斑点直径不大于2mm。层析缸用展开剂饱和20min后，将点样板垂直放入层析缸，上行展开，展层完毕后，取出，晾干，放在254nm紫外灯下观察。4 黄芩苷的紫外吸收图谱 取少量黄芩苷重结晶样品于50ml容量瓶中，加甲醇溶解至颜色微黄，用紫外分光光度计在200-400nm进行紫外扫描。5黄芩苷的红外吸收图谱 精确称取0.100g的溴化钾，压片测红外作为背景，再精确称取0.100g的溴化钾，加入极少量样品一起研成细粉，压片，测红外吸收图谱。五、 实验结果1 黄芩苷得率()=MM0 x 100 式中：M一所得黄芩苷精品重量 M0一提取时用黄芩的重量本实验中M为0.132g，M0为100g，所以收率为0.132%。2薄层层析3 紫外光谱 由下图可知在200-400nm内最大吸收波长为278nm，与文献中（上图）的标准品的最大吸收波长一致。4 红外光谱 黄芩苷红外图谱3339 cm-1，宽峰： -OH伸缩振动3030 cm-1左右：苯环=CH伸缩振动2900 cm-1： C-H伸缩振动1611、1575、1478、1450cm-1 :苯环骨架振动1736 cm-1 ：C=O伸缩振动（葡萄糖醛酸）1667cm-1： C=O伸缩振动（吡喃酮环）1363 cm-1 ：C-O伸缩振动1078 cm-1: C-O-C的对称和不对称伸缩振动900690 cm-1多个吸收峰：苯环取代六、 讨论1由薄层板上的斑点可以看出虽然得到了一个比较明显的斑点，结合紫外图谱应该是黄芩苷，但是斑点上方有小淡斑存在，证明得到的结晶不是很纯。2 红外图谱与文献中标准品的图谱大部分吻合，不一致的原因可能是：黄芩产地不一样；本实验中得到的黄芩苷纯度不高。3 本实验中产率不高，原因可能有：粗粉未浸泡；静置时间短；调PH时温度控制不好。4黄芩苷在一定温度和湿度下能酶水解成黄芩素及葡萄糖醛酸。黄芩素分子中具有临三酚羟基，性质不稳定，在空气中易氧化成醌式结构显绿色。所以在储藏及提取过程中应注意防止黄芩苷的酶解、氧化，以减少有效成分的破坏。5 在用酸、碱进行提取纯化黄酮类化合物时，应当注意温度和碱度都不宜过高，以免破坏黄酮类化合物的母核。酸化时，酸度也不宜过高，否则酸会与黄酮类化合物生成盐而溶解。6黄芩苷在黄芩中以羧酸盐存在, 可以被溶剂溶出, 传统的提取方法以水做提取溶剂, 但是黄芩苷只能微溶于热水, 而且, 在水煎煮的过程中, 引入了大量的水溶性杂质。黄芩苷为一连有葡萄糖醛酸结构的黄酮化合物, 具有一定的脂溶性, 所以在提取时可以选择一定浓度的乙醇溶液作为提取液, 不仅大大增加它的溶出率, 并且可以抑制象鞣质、蛋白、粘液等高分子杂质的溶出, 便于过滤纯化。文献指出中等浓度(50%70%) 的乙醇水溶液其极性与黄芩苷的极性相近, 便于其溶出, 而低浓度(40%及以下) 的乙醇极性较大, 杂质的溶出量大大增加, 高浓度(90%及以上) 的乙醇溶液极性较小, 主要用于药材中的挥发油、叶绿素、树脂等的溶出。因此, 本实验采用了60%的乙醇溶液作为提取溶剂。专心-专注-专业
