高中生物选修一专题二微生物实验室培养知识点填空+答案(共6页).doc

精选优质文档-倾情为你奉上选修一 生物技术实践专题二 微生物的培养与应用课题1 微生物的实验室培养一、课题背景1研究和应用微生物的前提是 。2在实验室培养微生物，一方面需要 ，另一方面需要 。二、培养基1概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养基质称为培养基。2种类：根据培养基的物理性质可将培养基可以分为 、 和半固体培养基。3琼脂：是一种从红藻中提取的 ，在 以上熔化，在 以下凝固，在常规培养条件下呈现 。琼脂是制备 培养基时最常用的 剂。4营养构成：各种培养基一般都含有水、 、 和无机盐，另外还需要满足微生物生长对 、 以及 的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加 ，培养霉菌时需将培养基的pH调至 ，培养细菌时需将pH调至 或 ，培养厌氧微生物时则需要提供 的条件。5牛肉膏，蛋白胨来源于 ，含有 、 和 等营养。三、无菌技术1获得纯净培养物的关键是防止 的入侵。2无菌技术围绕着 展开，主要包括以下几个方面：(1)对实验操作的 、操作者的衣着和 进行清洁和 。(2)将用于微生物培养的器皿、 和 等进行 。(3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 附近进行。(4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与_ _相接触。3无菌技术的目的：(1)防止 ，(2)避免 。4消毒和灭菌消毒灭菌概念使用较为 的物理或化学方法杀死物体 或 的部分微生物(不包括_ 和 )使用 的理化因素杀死物体_的微生物(包括_和 )常用方法(1) 消毒法（在 煮 min）；(2) 消毒法（在 煮 min或在 煮 min）；(3) 消毒法（如用 擦拭双手、用 消毒水源；紫外线照射前，适量喷洒 或 溶液等消毒液。）(4)紫外线消毒法：可以杀死 或 中的微生物。(1) 灭菌：直接在酒精灯火焰的 灼烧，如（ 、接种针或其他 用具）；(2) 灭菌（在 加热 h）。适用于 、 的物品。如（ （吸管、培养皿）和 用具）；(3) 灭菌：压力为 kpa，温度为 条件下，维持 min。四、大肠杆菌的纯化培养(一)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤：1计算：依据是培养基 的比例，计算配制某一体积（如100ml）的培养基时，各种成分的用量。2称量：牛肉膏比较 ，可用玻棒挑取到 上，同其一块称量。牛肉膏和蛋白胨易吸潮，称取时动作要 ，称后及时 。3溶化： 和称量纸少量的水（ ）取出_ 加_和_ 加 (注意：不断用玻璃棒搅拌，防止_而导致_)。当_完全熔化后 补加蒸馏水至100 mL。调节_后再进行灭菌。4灭菌5倒平板：待培养基冷却至_左右时，在 附近倒平板。(二)纯化大肠杆菌1微生物的接种技术最常用的是 和 ，除此之外还包括 和 等方法。虽然这些技术方法各不相同，但是，其核心都是要防止 ，保证 。平板划线法：通过接种环在 培养基表面 的操作，将聚集的菌种逐步 到培养基的表面。稀释涂布平板法：将 进行一系列的 ，然后将不同 的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。两种接种方法都是为了将聚集在一起的微生物 ，在 划线培养后或者在 的菌液涂布后，可以分离得到由 繁殖而来的肉眼可见的单个_。2菌落：概念： 。菌落特征包括 。3系列稀释操作：（P19）1、2、3注意：移液管需要经过 。操作时， 和 应在离火焰 处。4涂布平板操作：将涂布器末端浸在体积分数为 的酒精；取少量 滴加到培养基表面；将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，冷却 S；涂布时可转动 ，使菌液分布均匀。5培养基灭菌合格与否的方法：将接种后的培养基和一个 的培养基都放入 中，培养12 h和24 h后，分别记录观察。P20培养12h和24h后，观察到的实验结果相同吗？如果不同，请分析产生差异的原因。 。如果你在培养基上观察到了不同形态的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的吗？ 。6如何记录实验结果？ (三)菌种的保藏：（1）临时保藏：将菌种接种到试管的 ，在 温度下培养，当 长成后，将试管放入 冰箱中保藏，以后每 个月，转移到 培养基上。适用范围：对于 的菌种，可以采用临时保藏的方法。缺点是：保存时间 ，菌种容易被 或产生变异。（2）长期保存菌种的方法： 法，在 mL的甘油瓶中，装入 mL甘油后 ，将 mL转移到甘油瓶中，与甘油 后，放在 冷冻箱中保存。P15旁栏思考题：无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 。P16旁栏思考题：请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1） 培养细菌用的培养基与培养皿（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管（3） 实验操作者的双手（1）、（2）需要 ；（3）需要 。P17倒平板操作的讨论1.培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 。4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 。P18平板划线操作的讨论1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？P19涂布平板操作的讨论涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 。P20课后练习题1、2、3专题二 微生物的培养与应用答案课题1 微生物的实验室培养一、1、防止杂菌入侵，获得纯净的培养物。2、为培养的微生物提供合适的营养和环境条件，确保无处不在的其他微生物无法混入。二、1. 营养基质 生长繁殖2. 液体培养基 固体培养基水3、多糖 98 44 固态 固体 凝固4、 碳源 氮源 PH 特殊营养物质 氧气 维生素 酸性 中性 微碱性 无氧 5、动物原料 糖 维生素 有机氮 三、1.外来杂菌2、如何避免杂菌 空间 手 消毒 接种用具 培养基 灭菌 酒精灯火焰 周围的物品3、实验室的培养物被其他外来的微生物污染 操作者自身被微生物感染 4.温和 表面或内部 芽孢和孢子 强烈 内外所有 芽孢和孢子5.煮沸消毒 100 5-6 巴氏 70-75 30 80 15 化学药剂 酒精 氯气 石碳酸 煤酚皂 物体表面 空气 灼烧灭菌 接种环 金属 干热灭菌 160-170 1-2 耐高温 需保持干燥 玻璃器皿 金属 高压蒸汽灭菌 100 121 15-30 四、（一）1.配方 2.粘稠 称量纸 迅速 盖上瓶盖 3.牛肉膏 加热 称量纸 蛋白胨 氯化钠 琼脂 琼脂糊底 烧杯破裂 琼脂 PH4、高压蒸汽灭菌 干热灭菌 5、50 酒精灯火焰（二）1.平板划线法 稀释涂布法 斜面接种 穿刺接种 杂菌的污染 培养物的纯度 琼脂固体 连续划线 稀释 菌液 梯度稀释 稀释度 分离 数次 稀释度足够高 一个细胞 菌落 2.在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体菌落的形状，大小，隆起程度和颜色等 3、灭菌 试管口 移液管 1-2cm 4、70% 菌液 8-10S 培养皿 5、未接种 37恒温箱 不同 （三）（1）固体斜面培养基培养 合适的 菌落 4 3-6 新鲜 频繁使用 不长 污染（2）甘油管藏法 3 1 灭菌 1 充分混匀 20P15无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。P16 灭菌 消毒 P17 1、可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2、通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3、平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，又可以避免使培养基中的水分过快地地挥发。4、空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。P181、操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。2、以免接种环温度太高，杀死菌种。3、划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。P19 应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。专心-专注-专业