微生物检验SOP(共9页).doc

精选优质文档-倾情为你奉上文件名微生物检验SOP 文件编号C05主办部门研发品管部版本别D页 次1/9微生物检验SOP核准：审核：制作：日期：日期：日期：2018.09.15文件名微生物检验SOP文件编号C05主办部门研发品管部版本别D页 次2/9异动日期修 订 者版本文件异动记录2008.12.19A新制定2009.2.18B修改2009.3.10C修改2009.7.02D修改文件名微生物检验SOP文件编号C05主办部门研发品管部版本别D页 次3/91.目的： 为无菌操作及无菌室的环境保护，提供一个标准化规程防止微生物污染，使微生物检验能达到相关要求，并规范微生物检验流程。2.适用范围： 适用于公司所有原材料、半成品、成品、环境卫生等微生物的检测。3.权责：3.1主管：督导检验之正常运作，检测标准及卫生标准的建立，整理归纳检验数据等。3.2检验员：依各类产品标准执行检验、标示与报表的整理，环境卫生的管控与相关事项的沟通与处理。4.参考文件：4.1 、双料操作方法、微生物实验室标准。4.2 GB 15979一次性使用卫生用品卫生标准5.定义：无6.作业内容（如下）6.1准备工作：6.1.1根据当天生产安排单、原料、研发样品结合实际工作量等预估当天检样量。6.1.2根据待检样数量配制试剂，领取整瓶试剂时填写试剂台账本。6.1.3准备试验工具：剪刀、勺子、涂抹用的标尺、酒精灯、打火机、果汁机、刻度吸管、电子秤、乳胶帽、吸尔球、试管架、记号笔、75%酒精等。6.1.4配制生理盐水和培养基：生理盐水浓度为0.85%；培养基的配制根据培养基标签上的说明配制。6.1.5分装：生理盐水为每锥形瓶135ml；大肠菌群培养基单料吸取10ml放入有小导管的小试管中，大肠菌群培养基双料吸取10ml放入有小导管的大试管中。双料及单料管操作说明见附表1。6.1.6培养基及用具杀菌：先将杀菌锅中注入软化水；再把分装好的生理盐水、大肠菌群培养基、菌落总数培养基、霉菌及酵母菌培养基、刻度吸管、取样用的锥形瓶或专用塑料瓶、平皿、剪刀、使用的窗体使用的工器具发布 试剂台账本核准：审核：制作：日期：日期：日期：2018.09.15文件名微生物检验SOP文件编号C05主办部门研发品管部版本别D页 次4/9取样勺等放入灭菌锅进行湿热灭菌：121、20min或115、15-20min。6.1.7将杀菌好的生理盐水、刻度吸管、平皿、剪刀、取样勺等摆放在无菌操作台上，并将杀菌好的培养基放在水浴锅中保温，防止培养基凝固。6.2取样6.2.1准备取样工具（75%酒精喷壶、酒精灯、打火机、镊子、无菌水、无菌取样瓶等）。6.2.2进车间前穿好工作服及鞋套，戴好口罩及工作帽。6.2.3取样时一切保持无菌操作，取样完毕后将待测样品进行编号，从1开始编号，同时记录在微生物记录本上依次登记。登记时注意将品名、生产日期等信息详细记录。6.3无菌室杀菌6.3.1工作服、帽子、口罩、鞋套按规定放在缓冲间；把实验所需工具摆放在工作台上；配制100ppm以上的消毒水放于更衣室缓冲间。6.3.2打开紫外灯杀菌，杀菌时间30min。6.3.3人员在关闭紫外灯至少30min后方可入内工作。6.4进入无菌室操作流程6.4.1工作人员进入无菌室缓冲间先将手部用消毒水浸泡30-60秒，再更换消毒过的工作服、帽子、口罩，穿上鞋套方可进入无菌室进行操作。6.4.2以无菌操作称取检样15ml（g）,注入135ml（g）灭菌生理盐水的锥形瓶中，振摇均匀，即为1：10样液。用刻度吸管吸取1ml样液注入无菌的平皿中，同时用记号笔在平皿侧面写上当天日期及样液的编号；用刻度吸管分别吸取1ml样液注入无菌的单料和双料试管中，并在试管架上做标记。6.4.3取样时每次使用前后须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后方可接样。培养皿中培养基冷却后倒置于培养箱中（大肠菌群36±1，24±2h；菌落总数36±1，48±2h；霉菌酵母菌为25-28，第三天开始观察，共观察五天）。使用的窗体使用的工器具发布微生物实验室仪器设备使用记录表核准：审核：制作：日期：日期：日期：2018.09.15文件名微生物检验SOP文件编号C05主办部门研发品管部版本别D页 次5/96.5读数6.5.1菌落总数的读数6.5.1.2平板菌落数的选择：选取菌落数在30300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。6.5.1.2稀释度的选择：应选择平均菌落数在30300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字。若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。若所有稀释度的平均菌落均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。若所有稀释度的平均菌落数均不在30300之间，其中一部分大于或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。6.5.1.3菌落数的报告：菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，可采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示。稀释度选择及菌落数报告方式具体见附表2。6.5.2霉菌及酵母菌的读数及注意事项6.5.2.1基本要求：霉菌培养应用专用培养箱，培养温度在2530之间对结果影响不大。为尽快得到结果，我们以27为培养温度。菌落计数应于培养后的72小时进行第一次观察。这时主要是观察那些密集生长的平皿，以免到第五天之后，菌落生长成片而难以计数。使用的窗体使用的工器具发布微生物实验室仪器设备使用记录表核准：审核：制作：日期：日期：日期：2018.09.15文件名微生物检验SOP文件编号C05主办部门研发品管部版本别D页 次6/96.5.2.2实验时手脚要快，动作宜轻，培养过程中观察平板时，动作稍重，生长快速的霉菌孢子就会在培养基内扩散，导致二次污染，结果读数异常。特别是翻转平板进行培养，观察时再转过来，特别容易导致孢子飞散。一般以第五天的读数为最终计数。但观察应持续七天。6.5.2.3由于霉菌和酵母菌落较大，光线正常时可以方便地计数。选择那些霉菌数为10100个之间的平皿计数，而不是象细菌的30300个。有时1050个菌落的平皿也是受肯定的。6.5.2.4霉菌和酵母培养时间较长，用于倾注的培养基量应稍多于细菌计数，约为1520 mL，以保证培养时不至于造成培养基过分干燥。培养箱内温湿度调节不当，会造成霉菌蔓延生长或培养基失水。尤其是当湿度过高时，常导致嗜湿的根霉、木霉、毛霉、链孢霉等的强烈污染。当然，每批实验时空白对照都是要做的。6.6具体方法见大肠菌群检测SOP、菌落总数检测SOP、霉菌和酵母检测SOP。6.7设备性能验证6.7.1无菌室或洁净室要求使用诸如沉降平板、棉拭子等方法监测空气和表面微生物污染。频率：每两周一次。6.7.2超净工作台要求使用无菌琼脂平板检测。频率：每两周一次。6.7.3高压灭菌锅要求对压力容器的安全进行检查。频率：每年校正一次。6.7.4实验室要求清洁和消毒其他表面。频率：每三个月一次。（分别为3月、6月、9月、12月）。6.8报表的填写6.8.1原辅材料微生物结果由进料检验人员填写*报告单。6.8.2环境（含加工用水、空白试验等）等微生物结果由成品组人员填写菌落总数、大肠菌群检测报告。6.8.3成品微生物结果由成品组人员填写*记录单。使用的窗体使用的工器具发布微生物实验室仪器设备使用记录表菌落总数、大肠菌群检测报告*记录单核准：审核：/制作：日期：日期：/日期：2018.09.15文件名微生物检验SOP文件编号C05主办部门研发品管部版本别D页 次7/96.7微生物验收标准见附表3。6.8微生物检测取样计划具体见下表： 取样计划检验项目周一周二周三周四周五备注成品所有无防产品、果粉、水晶、Q果、黑森林果粒产品；其它产品随机抽样包装人员手部、桌面、灌装机每月20-28号、10-16号各抽检一次工作服每月8-16号抽检一次车间环境每月8-16号、20-28号各检测一次培养基空白试验超净工作台每月8-16号、20-28号各检测一次无菌室或洁净室每月8-16号、20-28号各检测一次加工用水每月1-20号抽检一次加工水的微生物原材料到货固体饮料中所用到的粉体大宗料等。6.8.1备注：以上均需按取样计划进行，其中成品、原材料可根据每天检验工作量做适当调整；出现异常情况，要根据实际情况进行连续取样检测。使用的窗体使用的工器具发布核准：审核：制作：日期：日期：日期：2018.09.15文件名微生物检验SOP文件编号C05主办部门研发品管部版本别D页 次8/96.9附表1：双料及单料管操作说明6.9.1取样量（稀释后）大于ml的用双料，小于ml（包括ml）的用单料6.9.2具体取单料还是双料我一般是根据产品标准要求定的，主要包括3类情况：6.9.2.1产品大肠菌群测定结果要求小于等于300/100ml(g)的时候，稀释10倍的做3管（每管取样1ml）；稀释100倍的做3管（每管取样1ml）；稀释1000倍的做3管（每管取样1ml）6.9.2.2产品大肠菌群测定结果要求小于等于30/100ml(g)的时候，稀释10倍的做6管，包括3管双料（每管取样10ml）、3管单料（每管取样1ml）；稀释100倍的做3管（每管取样1ml）6.9.2.3产品大肠菌群测定结果要求小于等于3/100ml(g)的时候，原液做6管，包括3管双料（每管取样10ml）、3管单料（每管取样1ml）；稀释10倍的做3管（每管取样1ml）6.9.3实际上，用乳糖胆盐发酵管时，只要“加到培养基里的菌悬液的量”大于1ML，就用双料，其余的（1和1以下）用单料。这里的菌悬液的量不是指其中原样品的量，而是实际吸取的液体。6.9.4之所以要用双料和单料是因为从理论上说，加到培养基里的样品的量多，它含大肠菌群的量就多，它们生长发育新陈代谢所需要的营养就多，所以要用双料，否则 它们会因为营养不良而表现不出他们应该反映的现象。6.10附表2：稀释度选择及菌落数报告方式例次稀释液及菌落数两稀释液之比菌落总数报告方式1×10-11×10-21×10-3个/g或mL个/g或mL1多不可计164201640016000或1.6×1042多为可计295461.63775038000或3.8×1043多不可计271602.22710027000或2.7×1044多为可计多为可计313或3.1×105527115270270或2.7×1026000<1×10<107多为可计305123050031000或3.1×104核准：审核：制作：日期：日期：日期：2018.09.15文件名微生物检验SOP文件编号C05主办部门研发品管部版本别D页 次9/96.11附表3：微生物判定标准名称细菌总数cfu/g大肠菌群MPN/100g 霉菌cfu/g(ml)酵母菌cfu/g(ml)水 GB5749100cfu/ml不得检出标准中未规定标准中未规定灌装车间环境(质量书册)30cfu/皿/30cfu/皿30cfu/皿生产车间环境(质量手册)50cfu/皿/ 50cfu/皿50cfu/皿员工手100cfu/每只手30标准中未规定标准中未规定微生物室环境<10cfu/皿/<10cfu/皿<10cfu/皿无菌台0/00水果饮料浓浆（企标）1000cfu/ml3020cfu/ml20cfu/ml果粒果蔬汁饮料（企标）1000302020固体饮料(普通型)（企标）10004050标准中未规定固体饮料(蛋白型)（企标）300009050标准中未规定魔芋、Q果、水晶（企标）1000305050脱脂奶粉GB5411 一级30000， 一级90， 标准中未规定标准中未规定可可粉SB/T10209200009020050咖啡粉（参考普通型）10004050标准中未规定麦芽糊精（QB/T2320）300030标准中未规定标准中未规定奶精(Q/KBK)150009050标准中未规定备注：1、蛋白型固体饮料指的是蛋白质含量4% ； 2、未列出的粉体原料的微生物标准根据蛋白质含量参考固体饮料(普通型)企标或固体饮料(蛋白型)企标。核准：审核：制作：日期：日期：日期：2018.09.15专心-专注-专业