细胞及遗传学实验(共28页).doc

精选优质文档-倾情为你奉上细胞及遗传学实验目 录实验一 细胞膜的渗透性1实验二 细胞凝集反应.2实验三 巨噬细胞吞噬现象的观察3实验四 线粒体和液泡系的超活染色与观察6实验五 DNA的Feulgen染色法.10实验六 动物染色体标本的制备与观察12实验七 植物染色体标本的制备与观察15实验八 联会复合体的染色与观察.17实验九 果蝇的形态和生活史观察.18实验十 果蝇唾腺染色体标本的制备与观察.21实验十一 人体X染色质（巴尔小体）的观察.22实验十二 人体外周血细胞培养及染色体制备和观察.24 实验一 细胞膜的渗透性 实 验 目 的了解细胞膜的渗透性及各种物质进入细胞的速度。实 验 原 理将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的溶质不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以促使水分进入细胞，引起溶血。由于溶质透入速度互不相同。 实 验 用 品一、器材50ml小烧杯，10ml移液管，试管（110ml）,试管架。二、氯化试剂0.17mol/L 氯化钠、0.17mol/L氯化铵、0.17mol/L醋酸胺、0.17mol/L硝酸钠、0.12mol/L草酸铵、0.12mol/L硫酸钠、0.32mol/L葡萄糖、0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇、0.32mol/L丙酮。三、材料兔血。实 验 方 法一、兔血细胞悬液取50ml小烧杯一只，加1份兔血和10份0.17mol/L 氯化钠溶液，形成一种不透明的红色液体，此即稀释的兔血。二、低渗溶液取试管一支，加入10ml蒸馏水，再加入1ml稀释的兔血，注意观察溶液颜色的变化，由不透明的红色逐渐澄清，说明红细胞发生破裂造成100%红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液。三、兔红细胞的渗透性1取试管一支，加入0.17mol/L 氯化钠溶液10ml，再加入1ml稀释的兔血，轻轻摇动，注意颜色有无变化？有无溶血现象？为什么？2取试管一支，加入0.17mol/L氯化铵溶液10ml，再加入1ml稀释的兔血，轻轻摇动，注意颜色有无变化？有无溶血现象？若发生溶血，记下时间（自加入稀释兔血到溶液变成红色透明澄清所需时间）。3分别在另外8种等渗溶液中进行同样实验。步骤同2。 实 验 结 果将观察到的现象列入表6-1，对实验结果进行比较和分析。 表6-1 不同低渗溶液下的溶血现象 试管编号 是否溶血时间 结果分析 110ml氯化钠+1ml稀释兔血210ml氯化铵+1ml稀释兔血 310ml醋酸胺+1ml稀释兔血410ml硝酸钠+1ml稀释兔血510ml草酸铵+1ml稀释兔血610ml硫酸钠+1ml稀释兔血710ml葡萄糖+1ml稀释兔血810ml甘油+1ml稀释兔血910ml乙醇+1ml稀释兔血1010ml丙酮+1ml稀释兔血实验二 细胞凝集反应实验原理细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分支状糖外被。目前认为：细胞间的联系，细胞的生长和分化 ，免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分支状糖分子有关。凝集素（lectin）是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。实验用品1. 土豆块茎。2. 显微镜、粗天平、载玻片、滴管2支、离心管2支。3.PBS缓冲液 称取NaCl 7.2g、Na2HPO4 0.43g、加蒸馏水，定容至1000ml,调PH值到7.2.4.2的红细胞以无菌方法抽取兔子静脉血液（加抗凝剂），用生理盐水洗5次，每次2000r/min，离心5min，最后按压积红细胞体积用生理盐水配成2红细胞液。实验方法1. 称取土豆去皮块茎2g，加10mlPBS缓冲液，浸泡2h，浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素。2. 用滴管吸取土豆凝集素和2红细胞液各一滴，置载玻片上，充分混匀，精致20min后于低倍显微镜下观察血球凝集现象。3. 以PBS液加2血细胞液作对照试验。作业简图表示血细胞凝集原理实验三 巨噬细胞吞噬现象的观察实 验 目 的一、观察巨噬细胞吞噬全过程和意义。二、掌握小鼠腹腔注射给药和颈椎脱臼处死方法。实 验 原 理 细胞吞噬作用原来是单体细胞动物摄取营养物质的方式，也是原始防御作用。随着动物界的进化，在高等动物中，则发展生成大小两类吞噬细胞（即巨噬细胞和嗜中性粒细胞），专司吞噬作用，成为非特异免疫功能的重要组成部分。 巨噬细胞由骨髓干细胞分化生成，然后进入血液到达各组织内，并进一步分化为各种巨噬细胞。当病原微生物或其他异物侵入机体时，能招引巨噬细胞，而巨噬细胞又有趋化性，能响应招引因子的招引，产生活跃的变形运动，主动向病原体或异物移行，在接触到病原体或异物时，即伸出伪足将之包围并内吞入细胞，形成吞嗜体，继而细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡发生融合形成吞噬性溶酶体，通过其中水解酶作用下，将病原体杀死，消化分解，最后将不能消化的残渣排除细胞外。实 验 用 品一、器材显微镜，解剖盘，剪刀，镊子，载玻片，盖玻片，注射器，吸管，吸水纸二、试剂1、0.85%生理盐水（0.85g氯化钠溶于100ml蒸馏水中）2、alsever溶液葡萄糖 2.05g柠檬酸钠 0.89g柠檬酸 0.05g氯化钠 0.42g蒸馏水 100ml调ph至7.2，过滤灭菌或高压灭菌10分钟，置4摄氏度冰箱保存0.4%台盼蓝染液（台盼蓝染粉 0.4g，0.85%生理盐水）4.0%淀粉肉汤（含台盼蓝染液）牛肉膏 0.3g蛋白胨 1.0g氯化钠 0.5g蒸馏水 100ml加热后加入可溶性淀粉6.0g，促使溶解，再煮沸灭菌，置4摄氏度冰箱保存。用时水浴融化，加入适量台盼蓝染液混匀，使呈蓝色。三、 材料1、 小白鼠2、 1%鸡红细胞悬液。自健康鸡翼静脉采学1ml，放入盛有4ml alsever溶液瓶中，混匀置4摄氏度冰箱保存备用。使用前加入0.85%生理盐水离心（1500r/min 10min）洗涤两次，再用生理盐水配成1%浓度悬液。实 验 方 法一、在实验前一天，给小白鼠腹腔注射6%淀粉肉汤（含台盼蓝）1ml。注射时，先用右手抓住鼠尾提起，放在实验台上，用左手的拇指食指抓住小鼠两耳和头颈皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，用左手的无名指和小指按住尾与后肢，前肢可用中指固定，即可在腹部后1/2处的一侧注射，进针勿过深，否则易损害肝及血管等，造成出血致死。二、实验时，每组去一只注射过淀粉肉汤的小白鼠，腹腔注射1%鸡红细胞悬液1ml，轻按小白鼠腹部，使悬液分散。三、20min后，用颈椎脱臼法处死小鼠（右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指与食指同时向下按住鼠头，使脊髓与脑髓间断开致使鼠死亡）四、将小鼠置于解剖盘中，剪开腹部，把内脏推向一侧，用不装针头的注射器或吸管吸取腹腔液。五、每人取一张干净载玻片，滴一滴腹腔液，盖上盖玻片，置显微镜下观察。实 验 结 果调节集光气使显微镜视野中光线稍暗些。在高倍镜下，先分辨清鸡红细胞和巨噬细胞。鸡红细胞是一些淡黄色、椭圆形有核的细胞；而数量较多，较大的圆形形或不规则的细胞，其表面具有许多似刺毛状的小突起（伪足），胞质中含有数量不等的蓝色颗粒（为吞入的含台盼蓝的淀粉肉汤形成的巨噬体），即为巨噬细胞。慢慢移动玻片标本，仔细观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程。可见的鸡红细胞（1多个）紧缚于巨噬细胞表面；有的巨噬细胞已经将1数个红细胞部分吞入；有的巨噬细胞已吞入1个或几个红细胞在胞质中刚形成椭圆形的吞噬体；有的巨噬细胞内的吞噬泡体积缩小，并呈圆形，这是已经与初级溶酶体发生融合，泡内物正在被消化分解，将直接所观察到的处在不同吞噬阶段的巨噬细胞形态，动态的连贯起来，想一想吞噬作用的全过程。作 业在高倍镜下绘出在不同吞噬阶段的巨噬细胞图各一个（如鸡红细胞附于巨噬细胞表面、部分吞入红细胞、吞入后形成吞噬体和吞噬体已开始被消化分解等），示吞噬作用的过程。思考题一、 实验前一天，给小白鼠腹腔注射含台盼蓝淀粉肉汤的目的是什么？二、 巨噬细胞内有哪几种结构对执行复杂的吞噬功能最为重要？实验四 线粒体和液泡系的超活染色与观察实验目的一、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。二、学习一些细胞器的超活染色技术。实验原理 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子的，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。詹纳斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。实验用品一、器材：显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸（或卫生纸）等。二、试剂：1、 Ringer溶液（装入滴瓶）：氯化钠 0·85g（变温动物用0·65g）、氯化钾 0·25g、氯化钙 0·03g、蒸馏水 100ml。2、 1%、1/3000中性红溶液（装入棕色滴瓶）：称取0·5g中性红溶于50ml Ringer液，稍加热（30-40）使之很快溶解，用滤纸过滤，装于棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。临用前，取已配制的1%中性红溶液1ml，加入29ml Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。3、 1%、1/5000詹纳斯绿B溶液（装入棕色滴瓶）： 称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加热（30-40），使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。取1%原液1ml加入49ml Ringer溶液，即成1/5000工作液，装入瓶中备用。最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。三、材料：1、人口腔上皮细胞。2、小白鼠肝细胞。3、洋葱鳞茎内表皮细胞。4、小麦或黄豆幼根根尖。5、蟾蜍胸骨剑突软骨细胞。实验方法一、线粒体的超活染色与观察：线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。（一）、人口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色观察1、取清洁载玻片放在37恒温水浴锅的金属板上，滴两滴1/5000詹纳斯绿B染液。2、实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色1015分钟（注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。3、在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜或油镜进行观察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒体。（二）、小白鼠肝细胞线粒体的超活染色观察1 、用脊椎脱臼法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝边缘较薄的肝组织块，放入表面皿内。用吸管吸取Ringer 液，反复浸泡冲洗肝脏，洗去血液。2、 在干净的凹面载玻片的凹穴中, 滴加1/5000詹纳斯绿B溶液，再将肝组织块移入染液，注意不可将组织块完全淹没，要使组织块上面部分半露在染液外，这样细胞内的线粒体酶系可充分得到氧化，易被染色。当组织块边缘被染成蓝绿色即成(般需染2030min)。3、 吸去染液，滴加Ringer 溶液，用眼科剪将组织块着色部分剪碎，使细胞或细胞群散出。然后，用吸管吸取分离出的细胞悬液，滴一滴子载玻片上，盖上盖玻片进行观察。4、 在低倍镜下选择不重叠的肝细胞，在高倍镜或油镜下观察，可见具有l2 个核的肝细胞质中，有许多被染成蓝绿色的线粒体，注意其形态和分布状况。（三）、洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的超活染色观察1、用吸管吸取1/5000詹纳斯绿B染液，滴一滴于干净的载玻片上，然后，撕取一小片洋葱鳞茎内表皮，置于染液中，染色1015分钟。2、用吸管吸去染液，加一滴Ringer液，注意使内表皮组织展平，盖上盖玻片进行观察。3、高倍镜下，可见洋葱表皮细胞中央被一大液泡所占据，细胞核被挤至一侧贴细胞壁处。仔细观察细胞质中线粒体的形态与分布。二、液泡系的超活染色与观察中性红为弱减性染料，对液泡系的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能与液泡中某些蛋白质有关。（一）、蟾蜍胸骨剑突软骨细胞的液泡系中性红染色观察软骨细胞能分泌软骨粘蛋白和胶原纤维等，因而粗面内质网和高尔基体都发达，用中性红超活染色后，可明显的显示出液泡系。1、将蟾蜍处死，剪取胸骨剑突最薄的部分一小块，放入载玻片上的1/3000中性红染液滴中，染色510min。2、用吸管吸去染液，滴加Ringer液，盖上盖玻片进行观察。3、在高倍镜下，可见软骨细胞为椭圆形，细胞核及核仁清楚易见，在细胞核的上方胞质中，有许多被染成玫瑰红色大小不一的泡状体，这一特定区域叫“高尔基区”，即液泡系。（二）、小麦或黄豆根尖细胞液泡系的中性红染色与观察1、实验前，将小麦或黄豆种子培养在培养皿内潮湿的滤纸上，使其发芽，胚根伸长到1cm以上。2、取初生的小麦或黄豆幼苗根尖（约12cm长）,置于载波片上,滴一滴Ringer液，用镊子或刀片小心将根尖压成一薄片，吸去Ringer液，在材料上滴一滴1/3000中性红染液，染色510分钟。3、吸去染液，滴一滴Ringer液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察。4、在高倍镜下，先观察根尖部分的生长点的细胞，可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡，这是初生的幼小液泡。然后，由生长点向延长区观察，在一些已分化长大的细胞内，液泡的染色较浅，体积增大，数目变少。在成熟区细胞中，一般只有一个淡红色的巨大液泡，占据细胞的绝大部分，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处。从以上的观察结果，想想植物细胞液泡系的形态演进情况。注意事项1、在对口腔上皮细胞进行染色时不可使染液干燥，可适当补加染液。2、在对植物进行观察时一定要让材料尽量展开。作业1、绘口腔上皮细胞示线粒体形态与分布2、绘蟾蜍胸骨剑突软骨细胞示液泡系形态与分布思考题1、 用一种活体染色剂对细胞进行超活染色，为什么不能同时观察到线粒体、液泡系等多种细胞器？2、 小麦或黄豆根尖经中性红超活染色，为什么看到生长点的细胞中液泡多，而且染色深，延长区细胞中液泡数量变少，染色浅？实验五 DNA的Feulgen染色法实验目的学习DNA的Feulgen染色法，观察染色结果，了解反应原理。实验原理DNA经弱酸（1mol/L HCl）水解，其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开，使脱氧核糖的一端形成游离的醛基，这些醛基在原位与Schiff试剂（无色品红亚硫酸溶液）反应，形成紫红色的化合醌基，醌基是一个发色基团，所以具有颜色。对照组预先用热三氯醋酸或DNA酶处理，抽提去细胞中的DNA而得到阴性反应，从而证明了Feulegn反应的专一性。实验用品一、 材料1. Carnoy液固定的鼠肝石蜡切片2. Carnoy液固定的洋葱根尖或蚕豆根尖切片二、试剂1. Carnoy固定液 3份95%酒精加入一份冰醋酸。2.1mol/L HCl取比重1.18的浓HCl82.5ml，加水100ml。3. Schiff 试剂先将200ml蒸馏水煮沸，由火上取下，加入碱性品红1克，充分搅拌，有助于溶解。待溶液冷到50oC时，过滤到磨口棕色试剂瓶中。加入1mol/L HCl 20ml，冷却到25oC时加入1g偏亚硫酸钾(K2S2O5)或偏亚硫酸钠（Na2S2O5）充分振荡后盖紧瓶塞，放于暗处过夜。次日取出，呈淡黄色或近于无色，加中性活性炭一匙，约0.5克，剧烈振荡1min，过滤后既得无色品红。无色品红配成后塞紧瓶塞。外包黑布或黑纸，贮藏在冰箱或黑暗低温处。4. 亚硫酸水溶液（漂白液）10%偏重偏亚硫酸钠水溶液5ml，蒸馏水100 ml，1mol/L HCl 5ml，摇匀，塞紧瓶塞。此溶液在使用前配制，否则会因SO2逸出而失效。5. 5%三氯醋酸6. 0.5%固绿酒精溶液(95%酒精溶液)实验方法石蜡切片 溶蜡二甲苯 （35min） 溶蜡二甲苯 （35min） 1/2纯酒精加1/2二甲苯 （35min） 纯酒精 （23min） 纯酒精 （23min） 95%酒精 （23min）83%酒精 （23min） 70%酒精 （23min） 对照组蒸馏水 5%三氯醋酸，90oC，15min实 验 70%酒精（23min）组 1mol/L HCl 蒸馏水（过一下） 1mol/L HCl 60oC, 815min(水浴或温箱中) Schiff 试剂, （6090min） 亚硫酸水() (各1min) 流水冲洗 （515min）蒸馏水 0.5%固绿酒精溶液（复染） (1min) (此步要快，以免过染) 蒸馏水 70%酒精 83%酒精 95%酒精 纯酒精 纯酒精 透明二甲苯 透明二甲苯 封片 （贴上标签，注明材料，反应名称，作者姓名及日期）显微镜下检查实验六 动物染色体标本的制备与观察实验目的1. 初步掌握动物骨髓染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理。2. 了解常用实验动物染色体的数目及特点。实验原理凡细胞处于活跃增殖状态，或者经过各种处理后，细胞就可进入分裂的任何动物组织，均可用于染色体分析。在正常动物体内，骨髓是处于不断分裂的组织之一。给动物注射一定剂量的秋水仙碱即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。所以，骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。实验用品一、 材料小白鼠、无尾两栖类蛙属或蟾蜍属动物。二、 器材水平离心机、显微镜、刻度离心管（10ml）、注射器（1ml）、载玻片、烧杯（400ml）、量筒（100ml）、试管架、镊子、剪刀、解剖刀、吸管。三、 试剂1. 2%柠檬酸钠溶液：称取2g柠檬酸钠（柠檬酸三钠，Tri-sodium citrate, AR）溶解于100ml蒸馏水中。2. 1%柠檬酸钠溶液。3. 500m/ml、100mg/ml秋水仙素溶液。4. Giemsa（姬姆萨）原液（pH6.8） Giemsa染粉 1g 甘油（丙三醇，glycerine, AR） 33ml 甲醇（methyl alcoholA, AR） 45ml将染粉倾入乳钵，加几滴甘油，在乳钵内研磨直到无颗粒为止，此时再将全部剩余甘油倒入，放入6065保温箱中保温2h后，加入甲醇搅拌均匀，保存于棕色瓶中备用。5. 0.067mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.8） Na2HPO4·12H2O 11.81g (或Na2HPO4·2H2O 5.92g) KH2PO4 4.5g 溶解于蒸馏水中至1000ml6. 1:10 Giemsa 磷酸缓冲液染液（pH6.8）7. 甲醇（AR）8. 冰醋酸9. 0.4%KCl溶液.小白鼠骨髓细胞染色体的制备方法实验方法1. 动物按4g/g体重的剂量经腹腔注射秋水仙素，34h后杀死动物。2. 取出动物后肢的胫骨和股骨。剪去两端。3. 将0.61ml 2%柠檬酸钠用1ml注射器接上5#针头注入骨髓腔，将骨髓细胞先冲入小碟取下注射器针头，反复吸打骨髓细胞，使细胞团块分散，转入10ml离心管。4. 视骨髓量之多寡加入0.4%KCl溶液810ml，随即将离心管置37±0.5水浴中低渗1520min5. 以1000r/min离心8min6. 弃上清液，沿离心管壁缓慢加入新配制的甲醇:冰醋酸（3:1）固定液5ml，加固定液时注意不要冲动细胞团块。7. 加完固定液后，立即用吸管将细胞轻轻吸打均匀，静置固定20min。如此反复固定23次，每次20min。8. 固定的细胞经离心后，吸取上层固定液，视管底的细胞多寡加入少量新配制的固定液，将细胞团块轻轻吸打成悬液。9. 在干净、湿、冷的载玻片上滴23滴上层细胞悬液，在酒精灯上文火烘干（在空气干燥的地方可不用）。10. 将玻片标本平放于支架上，细胞面朝上，每片滴加1:100 Giemsa磷酸盐缓冲液34ml，染色10min。11. 在自来水管下细流冲洗数秒，去掉Giemsa磷酸盐缓冲液，用小块纱布擦干玻片标本底面和四周，显微镜观察和分析。实验结果在显微镜下可观察到染色体被Giemsa磷酸盐缓冲液染为紫红色思考题1. 记录所观察小白鼠骨髓细胞染色体的数目和形态。2. 绘制染色体图。3.你制备的小白鼠染色体标本，分裂相是否多，染色体分散程度如何？有什么不足处，原因何在？4.如果在实验前不给小白鼠腹腔注射秋水仙素，所制备的染色体制片会出现怎样的情况？. 黑斑蛙或蟾蜍骨髓细胞染色体标本的制备1. 动物按30g/g体重的剂量经腹腔注射秋水仙素，78h后杀死动物，取后肢股骨和胫骨，用纱布剥掉全部肌肉，剪去股骨和胫骨两端。2. 将1ml 1%柠檬酸钠溶液用1ml注射器接上5#针头注入骨髓腔，细胞冲入小碟内。3. 摘掉针头，用注射器筒轻轻反复吸打，使分散成单个细胞。4. 将骨髓细胞转入离心管，视骨髓细胞量之多寡加入事先预热至26±0.5的0.4%KCl溶液8ml，置26±0.5水浴低渗30min。5. 以后的固定、滴片、染色、观察、分析同“小白鼠骨髓细胞染色体的制备”。实验结果在显微镜下可清楚的观察到染色体被Giemsa磷酸盐缓冲液染为紫红色。作业1. 记录所观察的黑斑蛙或蟾蜍染色体的形态和数目。2. 绘制染色体图思考题1. 简述黑斑蛙或蟾蜍染色体的特点？2. 为什么制备小白鼠染色体标本时秋水仙素只注射4g/g体重，而蛙类需注射30g/g体重？3. 收集小白鼠骨髓细胞用2%柠檬酸钠溶液，而收集蛙类骨髓细胞用1%柠檬酸钠溶液，为什么？ 实验七 植物染色体标本的制备与观察实验目的学习植物染色体标本的制备技术，掌握染色体的技术方法，了解染色体的生物学意义。实验用品一、 材料大麦、黑麦或小麦种子。二、 试剂1. Carnoy固定液2. 0.1%秋水仙素溶液3. 1mol/L HCl 4. Schiff试剂5. 亚硫酸水溶液（漂洗液）6. 混合酶液（纤维素酶、果胶酶各1%2%）7. Carbor fuchsin （卡宝品红）染液配方1原液A：称取3g碱性品红，溶于100ml 70%酒精中（此液可无限期保存）。原液B：取10ml 原液A，加入90ml 15%石炭酸（苯酚）水溶液（两周内使用）。染色液：55ml 原液B加6 ml冰醋酸和6 ml 37%甲醛（此液适用于植物原生质体培养中细胞核和核分裂的染色）。配方2取配方1中的染色液210 ml，加9098ml 45%醋酸和1.8g山梨醇（此液适用于核和染色体的一般形态观察，具有广泛的适用性）。实验方法1. 取材：将大麦、黑麦或小麦种子培养在培养皿内的湿滤纸上，室温或28°C下发芽，待胚根长达12cm时，切取0.5cm长的根尖部分。2. 预处理：将切下的根尖浸入0.1%秋水仙素液中，室温下处理34h。也可把根尖侵入小烧杯内的自来水中，杯内加冰两小块，置04°C冰箱内低温处理24h左右。3. 固定：取出根尖，投入Carnoy液中固定224h，换入70%酒精，暂时保存。4. 水解：把根尖投入预热的5860°C 1mol/L热HCl中，恒温条件下水解1415min。5. 染色：倒去热HCl,滴加Schiff试剂（无色品红）少许，染色0.51h（也可在冰箱内染色1224h）6. 漂洗：吸去Schiff试剂，用漂洗液换洗23次，每次12min。7. 酶解：在载玻片上切取根尖着色深的部分，侵入小烧杯内12滴混合酶液中，室温下酶解40 min左右，或在28°C温箱中酶解20min左右。8. 洗涤：吸去酶液，加蒸馏水，用吸管换洗几次，除去残留酶液后加45%醋酸。9. 压片：用吸管从醋酸中吸取材料，置干净载玻片上，材料周围保留半滴45%醋酸，盖上盖玻片，其上放一片吸水纸。左手指压住吸水纸的左边，右手指从吸水纸的左端向右方轻轻抹去，再用铅笔擦头从盖玻片上轻轻敲打，使细胞均用散开。10. 镜检：把压好的片子放在显微镜下，先观察细胞分散状况和中期分裂相的多少，再检查分裂中期细胞中染色体是否完全散开。如若染色体分散不好而难以分辨和计数，可取下片子，平放桌面上，用手指隔着吸水纸在盖玻片上稍施压力，如果操作细心，用力适度，便可很容易得到染色体分散良好的压片标本，供观察，计数和照相用。11. 封存：压好的片子如果来不及观察或照相，必须进行暂时封存。封存时先在盖玻片四周各放麦粒大石蜡一块，然后用烧热的解剖针迅速融化石蜡，使盖片四周严密封闭。封好的片子可放培养皿内湿滤纸上的火柴棒支架上，盖上培养皿，可放冰箱内保存23天。 Schiff试剂染色效果不够理想的材料，可于水解后改用Carbor fuchsin染色（510min）。由于Carbor fuchsin具有染色快、着色深以及适用性广等特点，因此多数植物的根尖、幼芽、花药以及培养的细胞或愈伤组织，经Carbor fuchsin染色，都能得到良好的结果。作业验交压片标本12张，要求细胞分散均匀，形态完整，中期分裂相中染色体数目齐全，互不重叠，能够进行准确技术和照相。 实验八 联会复合体的染色与观察 联会复合体(synaptonemal complex, S.C)最早由Mose(1956)在研究精喇姑精母细胞减数分裂前期的超微结构时发现，1977年他又证明使用光学显微镜可以检查联会复合体。其后发展了许多适用于光学显微镜检查用的S.C染色法。依靠光学显微镜显示联会复合体的技术，不仅对于联会复合体的结构和功能的研究有用，而且在临床细胞遗传学中对染色体异常、遗传性疾病的病因和病理研究，以及环境诱变剂的检测等均不失为一种新的有效研究手段。 实 验 目 的学习光学显微镜下显示联会复合体的实验技术、观察光镜下联会复合体的形态结构 实 验 原 理     S.C是减数分裂前期同源染色体配对形成的非永久性核内特殊结构，典型的联会复合体由三股平行的线状结构组成，即两条平行侧线和一条纤细的中央轴组成。一般开始于偶线期，成熟于粗线期，消失于双线期。它与减数分裂三个重要环节同源染色体联会、交换以及分离有着密切关系。大量工作表明，联会复合体在真核生物的减数分裂过程中是普遍存在的。实 验 用 品一、材料 小白鼠（Mus musculus Linnaeus）,雄性。 二、器材    离心机、显微镜、水浴、培养皿、镊子、剪刀、吸管、烧杯、量筒、离心管(10ml)、酒精灯。 三、试剂 1、 0.7%柠檬酸钠(柠檬酸三钠)溶液。 2、3%中性福尔马林(甲醛溶液):甲醛8.3ml，醋酸钠() 1.1g，加蒸馏水91.7ml。 3、50%硝酸银溶液 4、明胶显影液: 称取2g明胶(gelatin)粉末溶解于99ml蒸馏水中，加1ml甲酸。 5、甲醇-冰醋酸 实 验 方 法1.脱颈处死动物，取出睾丸，放2ml 0.7%柠檬酸钠培养皿中 2.剪开白膜，用解剖针和小弯镊挟出曲细精管并剪碎，用吸管轻轻吹打，使曲细精管内容物 释放出。是细胞悬液总体积为1ml.3.移至刻度离心管中，加8ml 0.7%柠檬酸钠溶液制成细胞悬液，室温下低渗4560min 4.在低渗终止前10min，加3%中性甲醛溶液0.3ml，至最终浓度为0.1%，混匀。 5.常规离心(1000r/min)弃上清液。6.甲醇和冰醋酸(3:1)混合液固定，空气干燥法制片。制片的关键是长时间的低渗液处理和添加福尔马林溶液） 7.银染  (1)在培养皿底部放一用少量蒸馏水润湿的滤纸，上放2根小玻棒(或竹杆)，置水浴内保 温(80)。（此过程可不放在水浴内，直接将标本放在热至80。C的电热板上亦可）。(2)玻片标本细胞面朝上平放其上，加4滴50%硝酸银溶液和2滴明胶显影液，复以盖玻片(或擦镜纸)，直到玻片标本呈金褐色为止，一般为3-4min。(3)移除盖片，并用蒸馏水快速漂洗，晾干。(4)观察或摄影，分析。 实 验 结 果1.银染后的联会复合体呈金黄或黄褐色，两条同源染色体联会较紧，但端部仍可见S.C结构的双股性(图19-1)2.可见Y染色体的大部分和X染色体的一部分局部配对，形成短而清晰的联会复合体。 作 业绘图表示光镜下联会复合体的形态 思 考 题1.联会复合体的生物学意义？2.联会复合体的应用价值？ 实验九 果蝇的形态和生活史观察实验目的了解果蝇生活史、生活习性，掌握实验果蝇的一般饲养管理；观察果蝇的形态特征，常见突变类型的性状表现；学习识别区分雌性果蝇；掌握收集野生果蝇的方法。实验原理果蝇是双翅目昆虫，成蝇体长约0.5cm，广泛用于遗传学研究的果蝇为黑腹果蝇，属于果蝇科，果蝇属，它体型小，生长迅速，繁殖力强，易于培养，且突变性状多。实验材料 普通野生型果蝇和几种常见的突变型果蝇