发育生物学的研究手段.ppt

模式动物斑马鱼,邵明生命科学学院发育生物学研究所,【0hpf24hpf】,斑马鱼发育时期的计算公式：HT = h / (0.055T- 0.57) HT = 在温度T条件下所发育的小时数； h = 在28.5 的标准条件下所发育到的小时数。,斑马鱼的早期发育（从受精到原肠作用结束）,斑马鱼作为模式动物的优势,世代周期短（约1.53个月），发育迅速胚胎透明，易于观察斑马鱼饲养管理较为简单，产卵量大是目前唯一可以进行大规模遗传突变筛选的脊椎动物，已成为目前最好的脊椎动物发育遗传学研究体系之一,斑马鱼发育生物学的研究手段,解剖学手段 Developmental anatomy试验手段 Experimenta approach遗传手段 Developmental Genetics,解剖学手段,1. 某一部位的细胞将来发育成什么组织2. 胚胎某部分的细胞在形态发生过程中的行为,细胞标记,荧光标记By photoconversion,Caged dyes,Kaede,UV,Caged dye,DMNB caged fluorescein,试验手段（Experimental approach）,试验手段：通过扰乱和破坏来观察胚胎的反应，目的是研究胚胎发育某个过程的机理,显微注射显微移植术缺损实验重组实验,显微操作,显微注射和移植,发育生物学的遗传学手段,Developmental Genetics,非同位素的标记：地高辛（Digoxigenin）标记探针的原位杂交,goosecoid的时空表达模式,研究基因功能的方法,loss of function正向：诱变，转基因引起的插入突变反向：基因敲除技术，基因敲低技术-gain of function基因瞬时高表达持续过量表达错误表达,基因突变正向筛选技术,斑马鱼的正向遗传学筛选（ENU，virus，transposon）,Ekker et. al. 2011,基于转座子的转基因技术,TALENs介导的基因打靶技术,Recent work on the DNA-binding properties of transcription activator-like effector (TALE) proteins has shown that their specificity also relies on only a few key residues with a predictable code that can be used to design new DNA-binding proteins.,Non-homologous end joining (NHEJ),dscr3 MZ mutant 的构建,Cas9系统,我们实验室参加了全国斑马鱼一号染色体敲除联盟，一号染色体约1500个基因，我们负责60个。,Morpholino: 一种RNA的类似物,Morpholino介导的基因敲低（Knock down）技术,Morpholino 介导的特异的 knockdown,构建某个基因的显性抑制形式（Dominant Negative）和组成活性形式（Constitutively-Active）,GSK3S9A constitutively active formKinase dead GSK-3, dominant negative,DNKnockdownCAoverexpression,谢谢大家！,