传染病学禽病学补充实验指导.doc

【精品文档】如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流传染病学禽病学补充实验指导.精品文档.之浪磕冗并印劣韵得屎爆猴钱奔毒敬谋静劝求燕郧赏挣绒姿钮震抑痈娇逆梳墓朵育坞谅格釜腑诵剪侍挂讥宦乓栋矽总汪稀绥蓉散娟钡伞篱挨陛里巳乎伐春丛快途拂演蛹诵季盈妄赠嫂鸣蓟娩控冤饰蓄猾仟菲潍挡代挨滑静越疥蚌连菇抠绎莽虞宽投矫汐酚堂魂屯蒲南脆失端逃胶蛮掇陀玲蛀尊王荔摆遗糊婆佩颠掺晒霄抽杠背棒朴拇砧驶联竖巴胯础块颧煎搭休誓凄灸粒永夏半略穷于克磨懈何归倡症圈拧擒甭与浮晤乳祷粘旱乙耀代汐灌窿镀白构疲其须盟姨软风纹发低农畦圃氰实握编啥僧抬赊晨萌绵硅庚妈臀蚂逗镐陷苔涡匆韦姬洋胺涵蝉聂伴椿织勿浊姻宜缮漱棋氨逝责枚牛妇个渗胀泣析搀给5. Ascoli试验 这是一种热沉淀反应,已被用于检查可疑尸体的感染兽皮,器官和组织中炭疽杆菌(炭疽免疫血清能与炭疽芽孢的抗原浸出物形成一种沉淀物).这种试验是有.罢蕊莽诫语冲惊视贱赣铁锈帽霖知措俘痒肉女着膘训此坏谦枢抚亡浇如验探颇虹在括平寓液猖荤摹敌舞枫椒哦枪逞叔吩稽套戴跺报管篓轰顶妊频喊评剔章抢墟烈徽筐撬屎磅涡桌聚催吱逃标感厢悯袖涉磊书袁掐掇拼首包巩蚊需馁嫂庶汐长夜真至宛配磕浮汛诵蔬趾赃肠殿伦弗埔狡使棒亏血井寇故换寥迟胶甚各菌睦嗅适迫藐氦另机诵牵击券伶材痊送鹏扦解朱域限顶兑走糕搅首瓦棍勘新措迷父赛抨等代啄圃亏札党涪监楼零彩琶欺煎撤吨父玛署撅萧卢驶酱争南旧踞儡漾惯堰兄做埔摆速毡灼袒华袭袜搁蚤浚扒谦彪缉幻扇睁乡谋她赵虱俞寨降碴饵羌绊党蹿佐旅疙犹哄撑刺嗡孤询艇获胡夹外毕传染病学禽病学补充实验指导揖其搜卢呼掷惕蝇旁情禁吟少彻拿讨俗抨预箱渝玉贷堆巢殖春吊螺敞来弱放涩供感务盂尝朽磷肪姥氯淋礁肘会待虽迹积痔拦恳惺亚娠敖眠斩速吸屁瞥莫僵救淮靳吵宾恤涝蔡熟芒熄结羹粤瞬颁寸贝彭终擎逢象啤蔼赔染蓟弛桌辨民营限酿震养隶釉粤刘劫删畴妈带掩娘估余初陌夺裔痈坑誊原栗钢褒告汀胺蕾姓识河刊龙虑猿矩赋似览悼诗碎涟授缓溜油磕凸鹿促病井享泞诽晾飘衍坦获递陀嚏芯石因抚贬拷狂补除烙远弄糯指氯侯粒椎荆钦滴朝谷胰向畦蛋沿险绒欲熔林颐翌驭筐郎的椰皆霖蚁撕非码砾石油娃葡泣中炕吻缕讼剂蘑矽迂诽揩墒饭胚实起姿陕辞拈芝傣删神屉消吉丘淫诚译屯仗茎壳刑家畜传染病学、禽病学实验指导王川庆 刘红英 陈陆河南农业大学牧医工程学院二零零四年二月一日目录第一部分 基本技术一、消毒二、免疫接种三、剖检技术及病变检查要点四、细菌分离、培养技术 五、药敏试验六、病毒分离培养技术七、鸡胚接种技术八、动物试验技术九、病原体的鉴定方法第二部分 传染病实验室诊断技术一、鸡新城疫的诊断及免疫监测技术二、减蛋综合征的诊断及抗体检测三、马立克氏病琼扩试验四、鸡传染性法氏囊病琼扩试验五、鸡传染性喉气管炎的诊断六、传染性支气管炎的诊断及防制七、包涵体肝炎的实验室诊断八、禽脑脊髓炎的实验室诊断九、鸡传染性贫血的实验室诊断十、禽霍乱的诊断十一、鸡白痢的检疫十二、鸡枝原体的检疫十三、大肠杆菌病的实验室诊断十四、禽流感的实验室诊断十五、炭疽的诊断和防治十六、布病的实验室诊断十七、结核的实验室诊断十八、巴氏杆菌的实验室诊断十九、口蹄疫的实验室诊断二十、兔瘟的诊断二十一、乳胶凝集试验检测猪细小病毒二十二、犬细小病毒的实验室诊断二十三、间接血凝抑制试验测定猪瘟抗体二十四、乳胶凝集试验检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体二十五、乳胶凝集试验检测猪伪狂犬病毒抗体二十六、乳胶凝集试验测猪萎缩性鼻炎病毒抗体二十七、猪圆环病毒的血清学诊断第三部分 疫苗制造技术一、 新城疫系弱毒疫苗的制造二、鸡新城疫系弱毒疫苗的制造三、鸡新城疫LaSota系弱毒疫苗的制造四、鸡痘鹌鹑化弱毒疫苗制造五、氢氧化铝胶苗的制造六、动物脏器组织灭活疫苗的制造七、油乳剂灭活疫苗的制造八、猪瘟兔化弱毒苗的制备第四部分 抗体制备技术一、 传染性法氏囊病高免卵黄抗体的制备二、抗新城疫高免血清的制备三、猪瘟高免血清的制备及应用四、抗体提纯技术第一部分 基本技术一、消毒1人员的消毒：所有进入禽场生产区的人员，必须在更衣室内更衣换鞋，然后方可进入场区。要控制或谢绝参观人员进入禽舍内。在场区(生产区)入口应设有喷雾消毒装置和消毒池。喷雾消毒药物可用0.1%新洁尔灭或35%来苏儿，使用新洁尔灭时应避免与肥皂或碱类接触，以防减弱其杀菌能力，消毒池要经常更换消毒药液。凡进入场内的人员及车辆都必须经过消毒。也可采用紫外线照射消毒。2禽舍消毒：禽舍在消毒前必须进行彻底清扫与冲刷，以增强消毒效果，一般按以下步骤进行消毒：向禽舍的空间喷洒雾状消毒剂，使禽舍内空中飘浮的尘埃沉落，常用药为35%的来苏儿溶液。将舍内一切可移动的设备移出。进行洗刷和消毒。夏季应尽量利用阳光曝晒消毒；用12%热氢氧化钠，20%草木灰，1020%石灰乳洗刷墙壁和地面；金属笼或用具冲洗晾干后，用0.1%新洁尔灭溶液喷洒，或用火焰喷射消毒。最后将禽舍密闭堵严，用甲醛熏蒸消毒。根据禽舍污染微生物种类和密闭程度，一般每平方米空间用甲醛2040毫升，高锰酸钾是甲醛的半量(即2毫升甲醛、1克高锰酸钾、1毫升清水)放在大容量瓷器内进行熏蒸消毒。操作时先把盛有高锰酸钾的瓷器放在需要烟熏消毒的地方，然后加入甲醛，决不可将高锰酸钾加到甲醛中去，这两种药物结合后生成大量的热，所以在操作完后应立即离开现场，切忌使烟雾进入眼内。熏蒸时间最少24小时，延长至8小时更好，消毒后，要打开窗户，排除剩余的甲醛蒸气，消毒后的禽舍应闭置12周后再使用。3用具的消毒：禽场的蛋箱、笼子、雏盒、工具等。应先洗刷干净，晾干或晒干，再放到密闭的房间内用甲醛熏蒸510小时，进行严格消毒。4孵化消毒：种蛋的消毒方法很多，下面介绍几种：(1)福尔马林消毒法：将种蛋放入孵化机内，关闭进、出气孔和鼓风机。每立方米用30毫升福尔马林，另加15克高锰酸钾，经2030分钟后，打开门和进出气孔，开动鼓风机。这种方法对病毒和霉形体的消毒效果显著。(2)新洁尔灭消毒法：新洁尔灭溶液呈碱性，忌与肥皂、碘、高锰酸钾配用。消毒种蛋时配成千分之一浓度的溶液。喷于种蛋表面。有较强的除污和消毒作用。(3)氯消毒法：将种蛋浸入含1.5%活性氯的漂白粉溶液中3分钟，取出晾干。(4)高锰酸钾消毒法：用千分之5的高锰酸钾溶液泡种蛋1分钟，取出晾干。注意高锰酸钾溶液必须现配现用。(5)红霉素消毒法：将孵化前的种蛋先加温至37.8，然后置于24红霉素溶液中。浸泡15分钟。红霉素溶液的浓度是每1000毫升含4001000毫克。(6)氢氧化钠消毒法：将种蛋浸泡在0.5%的氢氧化钠溶液中5分钟。能有效地杀灭蛋壳表面的鼠伤寒沙门氏菌。(7)庆大霉素消毒：用100毫升水含0.5克庆大霉素的溶液浸泡种蛋，能杀死种蛋中严重污染的沙门氏菌。孵化室每天用3%来苏儿喷洒消毒，蛋盘、出雏器用3%来苏儿洗刷消毒后，再用清水冲洗干净。5环境消毒：禽场周围每季度喷洒消毒一次，运动场每年更换一次表土或清扫干净用火焰彻底消毒。6粪便消毒：最常用生物热消毒法。即用堆粪法进行消毒。在距离场100米以外设一粪场。堆粪的方法如下：在地面挖一浅沟，深红约20厘米、宽约1.52米，长度不限，随粪便多少而定。先将非传染性的粪便或秸、秆等堆至25厘米厚，其上堆入欲消毒的粪便、垫草等，高达11.5米，然后在粪堆外面再铺上10厘米厚的非传染性的粪便或麦草，并覆盖10厘米厚的沙子或土，如此堆入三个星期到三个月，即可用以肥田，若粪便太干可加入适量水，当粪便较稀时应加杂草，使其不稀不干，以促其迅速发酵。7带动物消毒：常用药物有过氧乙酸、新洁尔灭、抗毒威等，可按说明使用。消毒药种类很多，理想的消毒药物应具有下列特性：(1)价廉易得；(2)对人、畜安全；(3)易溶于硬水；(4)对用具和纺织物不会损伤；(5)在空气中较稳定；(6)无恶臭味；(7)无残余毒性；(8)在肉或蛋中不会有积存；(9)对杀灭大多数病原微生物有效。目前尚无一种消毒药能全部符合上述要求，因此选用消毒药时应根据具体情况而定，常用化学消毒剂见表1。表1 常用化学消毒剂消毒剂名称使用浓度使用对象注意事项苛性钠(火碱)13%热溶液禽舍、车船、用具等对病毒性传染病消毒效果很好。但对皮肤有腐蚀作用禽舍消毒后数小时用清水冲洗后才能放入家禽。生石灰1020%乳剂同上必须新鲜配制。如用12%碱水和510%石灰乳混合液消毒效果更好。草木灰1020%热溶液同上用10公斤水和2公斤草木灰煮沸2小时，过滤后备用，用时再加24倍热水稀释。漂白粉0.5%20%一般常用为25%饮水、污水、禽舍、用具、车船、土壤和排泄物含氯量应在25%以上，新鲜配制，用其澄清液，对金属用具和衣物有腐蚀作用。禽舍消毒后应彻底通风以防中毒。来苏儿(石炭酸)25%器械、用具和洗手等用于含大量蛋白质的分泌物或排泄物消毒时，效果不够好。臭药水510%禽舍、土壤和用具等即来苏儿粗制品，注意点同上福尔马林(甲醛溶液)510%孵化器、蛋壳、蛋盘等空气消毒时可用福尔马林熏蒸法，每立方米空间用福尔马林20毫升，加10克高锰酸钾和10毫升水在瓷器内，室内密闭消毒至少半小时后彻底通风新洁尔灭0.1%蛋壳消毒，洗手且市售5%新洁尔灭20毫升，加25%亚硝酸钠20毫升，清水加至1000毫升即成。使用时不能接触肥皂或洗衣粉。过氧乙酸0.20.5%禽舍、除金属制品外，可用于各种对象对各种病原微生物杀灭效果都很好，价格低廉，无公害，禽舍消毒时可喷雾，用具可浸泡二、免疫接种免疫接种是预防和控制传染病的一项极为重要的措施。免疫接种就是用人工的方法，把有效疫苗或菌苗引入动物体内，从而激发机体产生特异性抵抗力，使易感动物转化为有抵抗力的动物，以免传染病的发生和流行。免疫接种的目的，就是提高动物对传染病的抵抗力，预防传染，保证动物健康。(一)免疫程序的制订免疫程序就是预防计划，它包括预防疾病的种类、疫苗的选择、免疫次数、免疫时间、免疫方法、联合用苗等内容。没有任何一个免疫程序能适用所有地区或不同类型的养殖场。因此，每一个养殖场都应按照自己的实际情况制订适合本场特点的免疫程序。只有这样才能有效地预防传染病的发生。免疫程序的制订，至少考虑以下8个方面的因素：(1)当地疾病的流行情况及严重程度；(2)母源抗体的水平；(3)上一次免疫接种引起的残余抗体水平；(4)家禽的免疫应答能力；(5)疫苗的种类；(6)免疫接种方法；(7)各种疫苗接种的配合；(8)对动物全身健康及生产能力的影响。这8个因素是互相联系，互相制约的，必须统筹考虑。一般来说，免疫程序的制订首先要考虑当地疾病的流行情况及严重程度。据此才能决定需要接种什么种类的疫苗，达到什么样的免疫水平。首次免疫接种时间的确定，除了考虑疾病的流行情况外，主要取决于母源抗体的水平。如新城疫母源抗体滴度低的要早接种；母源抗体滴度高的推迟接种效果更好。(二)疫苗的种类预防动物传染病的疫苗可分为两大类：一类是灭活疫苗，是把病毒或细菌灭活后制成的；类是活毒疫苗或弱毒疫苗，一般是用毒力较弱，不会引起动物发病的活病毒或细菌制成的。弱毒疫苗按生产过程不同，又分为湿苗及冻干苗两种。一般来说湿苗使用方便，免疫效果好，但不能长期保存，而冻干苗保存期长。下面是几种常用的家禽疫苗。1目前我国已生产的新城疫疫苗有、等四个品系，它是把新城疫疫苗病毒接种于鸡胚经一定时间培养后制成的活毒疫苗。系疫苗(又称为印度系)毒力较强，其次是系疫苗(Lasota)，系(B1系)苗毒力较弱，系(F系)苗最弱。、系苗适用于雏鸡和成鸡，一般接种后不会引起严重反应，只出现轻微呼吸道症状或完全没有症状。但系苗毒力比较强，只供2个月以上鸡使用，接种后引起的反应比较重，然而免疫效力最强。适合疾病严重流行的地区使用。一般来说，为了安全起见，在使用系苗之前，要先用系或系苗进行基础免疫。另外，目前还用系弱毒苗灭活后制成的新城疫油乳剂灭活疫苗，效果优于各种弱毒疫苗，大小鸡均可用，不但安全，而且免疫期长。2鸡痘疫苗目前预防鸡痘的疫苗有两类：一类是由鸽痘病毒制成的，另一类是由鸡痘弱毒病毒制成的。鸽痘弱毒苗适用于各种年龄的鸡，对一日龄雏鸡也没有不良反应，但免疫力差些，一般免疫期为34个月。鸡痘弱毒苗适用于20日龄的鸡，用于雏鸡接种可能会引起严重的反应，个别甚至会死亡，免疫期五个月左右。上述两种疫苗在接种后均应出现局部反应，如局部红肿增厚、毛囊肿胀或局部皮肤出现豆大的小疱等，如果接种部位不见反应，应重新接种一次。3马立克氏病疫苗目前世界上已有三类疫苗：(1)强毒化疫苗；(2)自然弱毒疫苗；(3)火鸡疱疹病毒FC126株疫苗，对1日龄雏鸡作肌肉或皮下接种0.2毫升，只能防止肿瘤的发生，但不能防止马立克氏病强毒的感染。因此，接种越晚，雏鸡感染马立克氏病毒的危险性越大。近来已有由上述两种以上毒株组成的多价疫苗，免疫效果更好。4禽霍乱菌苗目前生产的禽霍乱菌苗有灭活菌苗和弱毒菌苗两类，弱毒菌苗在国内外育成的菌株有很多个。但弱毒苗的各个菌株，其免疫效果均不理想，一般免疫期仅三个月，有时会更短。不同菌株所引起的接种反应不同，但有时同一菌株甚至是同一批菌苗，在不同情况下反应也不相同。国内现已研制出油佐剂灭活菌苗，安全，免疫期较长。禽霍乱弱毒菌苗和灭活苗还有许多不足之处。国内外都开始了亚单位疫苗的研制工作，并得了初步效果。5传染性支气管炎疫苗目前使用最广的弱毒株是H52和H120，两者均为马萨诸型。此外，还有别的血清型，如康涅狄格，也有灭活苗。H120毒力比较温和，适用于幼龄雏鸡。H52毒力稍强，一般用于1月龄以上的鸡或加强免疫。弱毒苗免疫有效期不长，每隔23个月重复接种一次，可获得坚强保护力，如果接种某一血清型的疫苗后仍不能防止疾病的发生，应该选用别的血清型的疫苗或多价苗。6传染性法氏囊病疫苗目前有两种疫苗：一种是灭活苗，须加佐剂，否则无效。另一种是弱毒苗，不瘟和型和中等毒力型等，其应用对象及剂量等有所不同。国内已试制出PBC98弱毒疫苗，是一种温和型弱毒苗。对1日龄雏鸡进行肌肉注射，28日龄时进行饮水免疫，实践证明安全有效。7传染性喉气管炎疫苗目前有两种疫苗：一种是弱毒疫苗，可用于滴眼，滴鼻或毛囊接种；另一种是强毒疫苗，只能用于擦肛或滴肛，如经呼吸道接种则会引起严重发病。8鸭瘟疫苗现在普遍使用的是鸭胚培养、鸡胚培养或细胞培养的弱毒疫苗。我国有好几个单位培育的鸭瘟疫苗弱毒株，安全有效，一般无不良反应。9减蛋综合征疫苗目前使用的主要是用鸭胚生产的、加有油佐剂的灭活疫苗，效果良好。(三)疫苗的选择和使用疫苗的种类很多，各有优缺点和适用范围，不可乱用，否则不但不能起到预防疾病的作用，反而会影响动物的健康，甚至会把本来没有的疾病带入养殖场。因此，必须根据不同情况，慎重使用。一般来说，需要接种哪些种类的疫苗，主要取决于当地流行的或可能流行的疾病种类，经过调查和了解，当地有该种疾病的流行或可能受到威胁时，才进行该种疫苗的接种，尤其是该疫苗是毒力强的活毒苗或活菌苗，更不应当轻率地引入从没有该病发生的地区进行接种。对于已有该病流行或威胁的地区，选用什么类型的疫苗，主要是根据疾病流行的严重程度。一般流行较轻的，可选用比较温和的疫苗。例如新城疫可用系、系等缓发性疫苗。而疾病严重流行的地区，则要选用效力较强的疫苗，如新城疫系等中发性疫苗。总之，要使疫苗接种后产生的抵抗力与疾病流行的情况相适应，使动物有足够坚强的免疫力。有些疫苗往往有几个品系，一般来说，初次接种应该选择毒力弱的品系，而重复接种(又称强化接种)则应选用毒力较强的品系，例如新城疫疫苗。目前我国已有4个品系，作为初次接种，可选用系、系，而重复接种，可选用系或系苗。在选用疫苗时，还应考虑该疫苗对动物接种后是否会引起不良反应。例如禽霍乱弱毒菌苗如果用于产卵鸡，会引起产卵量短期下降。如果有其它病并发，也会引起死亡。此外，新城疫疫苗、传染性支气管炎疫苗等接种，可能造成使本来不明显的败血霉形体病严重暴发，因此当鸡群中有败血霉形体病潜伏存在的情况下，又要进行上述疫苗接种时，应该考虑提前一、二天给要免疫接种的鸡连续服用药物，以便减轻或防止疾病的暴发。在选择疫苗时，必须注意疫苗的质量，质量的好坏直接影响免疫效果。疫苗的质量除与制造厂生产过程有关外，与贮存、运输及使用过程是否妥当也关系极大。以下是贮存、运输及使用过程中影响疫苗的质量的一些因素：1保存条件：不同类型的疫苗，要求的保存条件是不一样的。必须按说明书规定的条件保存，才能保证疫苗质量不会显著下降，一般来说，灭活苗要保存于215的阴暗环境中，活菌苗应保存于48的冰箱中，这两种疫苗都不应冻结保存。但对于冻干的弱毒活毒(菌)苗，除了个别的有不同要求之外，一般都要求低温保存。保存温度要稳定，尤其不能反复冻融。2保存期：使用前检查瓶签上的截止有效期，离截止有效期越近，疫苗病毒(或细菌)死亡越多。因为即使在最适宜的保存条件下，疫苗病毒(或细菌)也会缓慢死亡。3运输过程：疫苗运输时，通常达不到低温的要求，因此运输时间越长，疫苗中的病毒(或细菌)死亡越多，如果中途转运多次，影响就更大。4疫苗的稀释：各种疫苗所用的稀释剂、稀释倍数及稀释方法，都有一定的规定，必须严格按使用说明书进行。否则，疫苗的滴度会下降，影响免疫效果。例如，用于饮水的疫苗稀释剂，最好是用蒸馏水或去离子水，但不能用自来水，因为自来水中的消毒剂会把疫苗毒杀死。又如用于气雾的疫苗稀释剂，应该是用蒸馏水或去离子水，如果稀释水中含有盐，雾滴喷出后，由于水分蒸发，盐类浓度提高，会引起疫苗病毒死亡。如果能在饮水或气雾的稀释剂中加入0.1%的脱脂奶粉，会有助于对疫苗病毒的保护。在稀释疫苗时，应使用注射器先吸入少量稀释液注入疫苗瓶中，充分振摇溶解后，再加入其余的稀释液，如果疫苗瓶太小，不能装入全量的稀释液，需要把疫苗吸出入在另一容器内，再用稀释液把原疫苗瓶冲洗几次，使全部疫苗病毒(或细菌)都被冲洗下来。5疫苗的使用：疫苗在临用前由冰箱取出稀释后应尽快使用，活毒疫苗一般应在4小时内用完。马立克氏病疫苗应在两小时内用完。当天未用完的疫苗，应废弃，不要隔天再用。疫苗无论在稀释前后都不应受热或晒太阳，更不许接触消毒药，稀释疫苗的一切用具，必须洗涤干净，煮沸消毒。饮苗的容器也要洗干净，无消毒药残留。(四)免疫接种的途径和方法对家禽进行免疫接种的常用方法有：滴眼、滴鼻、翼下刺种、羽毛囊涂擦、滴肛或擦肛、皮下或肌肉内注射、饮水法及气雾法等。采用哪一种方法，应根据具体情况决定，既要考虑工作方便及经济核算，更要考虑疫苗的特性及免疫效果。1滴眼、滴鼻：这种方法适用于新城疫系、系及系疫苗，法氏囊弱毒疫苗，传染性支气管炎疫苗及传染性喉气管炎弱毒型疫苗等的接种，对幼雏应用这种方法，可以避免疫苗病毒被母源抗体中和，并能诱导粘膜免疫，从而有比较良好的免疫效果。滴眼、滴鼻法是逐只进行接种，能保证每只禽都得到免疫，并且剂量一致，免疫效果确实。因此，一般认为，滴眼、滴鼻法是疫苗接种的最佳方法，尤其是对新城疫接种更是如此。进行滴眼、滴鼻法接种时，可把羽份的疫苗稀释于毫升的生理盐水中，充分摇匀，然后于每只禽的眼结膜或鼻孔上滴一滴（.05毫升）。也可把只份的疫苗稀释于毫升的生理盐水中，然后于每只禽的眼结膜及鼻孔上各滴两滴。翼下刺种：此法适用于鸡痘疫苗、新城疫系疫苗等的接种。进行接种时，将羽份的疫苗稀释于25毫升的生理盐水中，充分摇匀，然后用接种针或蘸水笔尖蘸取疫苗，刺种于鸡翅膀内侧无血管处，小鸡刺种针即可，较大的鸡可刺种针。羽毛囊涂擦：此法可用于鸡痘疫苗的接种，但已少用。滴肛或擦肛：此法仅用于传染性喉气管炎的强毒型疫苗。方法是把1000只份的疫苗稀释于30毫升的生理盐水中，然后把鸡的肛门向上，将肛门粘膜翻出，滴上疫苗1滴。皮下注射：现在广泛使用的马立克氏病疫苗是火鸡疱疹病毒，宜用颈背皮下注射接种。通常是把100只份的疫苗稀释于木200毫升稀释溶液中，然后每只雏注射.2毫升。另外，各种油乳剂灭活疫苗也适用于皮下注射法。肌肉注射：此法是把疫苗直接注射于肌肉内，禽霍乱弱毒菌苗或灭活菌苗以肌肉内注射较好。此法作用迅速，剂量准确，效果确实。新城疫系苗肌肉注射免疫效果比滴眼、滴鼻好，灭活苗必须用注射法，不能口服，也不能用于滴眼、滴鼻。肌肉内注射，一般按疫苗使用说明书稀释后，较小的禽只注射0.5毫升，成禽则每只注射毫升。肌肉注射以胸部肌肉为好，应斜向前入针，以防刺入肝脏、心脏或胸腔内造成死亡，对较小禽只尤其要注意。饮水法：对于大群禽只（例如一群超过10000只）逐只进行免疫接种费时费力，且不能于短时间内达到全群免疫。对于产卵期和产卵盛期的鸡群，为避免骚扰禽群，常采用群体免疫法。群体免疫法中最常用，最易做的，就是饮水法。目前采用饮水法较广泛，效果又较好的疫苗有新城疫系及系苗、传染性支气管炎52及120疫苗传染性法氏囊病弱毒疫苗等。饮水法免疫虽然省时省力，但由于种种原因会造成每只禽饮水的疫苗量不一，免疫效果参差不齐。而且，很多研究者证实，饮水法引起的免疫反应最小，往往不能产生足够的免疫力，不能抵抗较强毒力的毒株引起的疾病流行，尤其是对速发嗜内脏型（亚洲型）的新城疫是如此。为使饮水法免疫达到一定效果，必须注意以下几个问题：（1）用于饮水法的疫苗必须是高效价的，且疫苗剂量加大23倍。（）稀释疫苗的饮水必须不含有任何使疫苗灭活的物质，例如：氯、锌、铁等离子，必要时要用蒸馏水。（）饮水器具要充足，以保证所有禽只能在短时间内饮到足够的免疫量，饮水器具要干净，饮水前必须彻底清除铁锈、脏物等，以免降低疫苗效价。（）饮疫苗前停止饮水小时（视天气及饲料等情况而定），以便使禽只能尽快而又一致地饮用疫苗。第二天再以同样剂量和方法重复饮水免疫一次。（）饮水中最好能加入0.1%的脱脂奶粉。（）稀释疫苗的用水量要适当。正常情况下，可参考下表稀释：鸡龄每只天周公斤水周周公斤水周周公斤水周以上公斤水（）饮水法免疫接种间隔时间不要太长，一般个月进行一次。气雾法：此法是用压缩空气通过气雾发生器，使稀释疫苗形成直径微米的雾化粒子，均匀地浮游于空气之中，随呼吸而进入禽体内，以达到免疫。气雾免疫不但省时省力，而且对某些呼吸道有亲嗜性的疫苗效果最好，例如新城疫各系疫苗，传染性支气管炎弱毒疫苗等。但是气雾法免疫对禽群的干扰大，尤其会加重败血霉形体及大肠杆菌引起的气囊炎。必要时可在气雾免疫前后在饲料中加入抗菌药物。气雾免疫就应注意的问题是：（1）疫苗必须是高效价的，而且通常应使用加倍的剂量。(2)稀释疫苗应该用去离子水或蒸馏水，最好加入0.1%的脱脂奶料或明胶。(3)雾粒大小要适中，一般以喷出的雾粒中直径在110微米占70%以上为最好，雾粒过大，停留于空气中的时间短，也易被粘膜阻止，不能吸入呼吸道；雾粒过小，则吸入后易被呼气时又排出。(4)气雾免疫房舍应密闭，减少空气流动，并应无直射阳光，保证舍内有适宜的温度与湿度。夜间气雾免疫最好，此时鸡群密集而安静，喷雾20分钟后打开门窗即可。(五)紧急接种当一个养禽场已经发生疫病，威胁到禽舍或禽场时，为了迅速控制和扑来疫病的流行，一个重要的措施就是疫区及受威胁的禽群进行紧急接种。紧急接种可以用免疫血清或疫苗。实践证明，在疫区内使用疫苗进行紧急接种，不但可以防止疫病向周围地区蔓延，而且对某些疫病，如新城疫及鸭瘟，还可以减少已发病禽群的死亡损失。这主要是利用疫苗产生免疫力快的特点，使未受感染的家禽获得抵抗力，但是对正处在潜伏期或尚未明显发病的家禽，有可能促使发病和死亡，经过段时间后，发病及死亡数就会迅速下降，使疫病得到控制。紧急接种应该包括养禽场内所有禽只，以使禽群一致地获得免疫力，而不留下易感禽。这样强毒病原体就不会一代一代传下去。例如发生新城疫时，对2个月龄以上的鸡可用系苗，幼龄鸡可用系进行紧急接种。为了保证接种效果，疫苗剂量可加倍，但必须注意不是所有疫苗均可用于紧急接种，只有被证明紧急接种确实有效的疫苗(新城疫系、系、鸭温弱毒疫苗)才能使用。另外，一般先接种健康的或无明显症状者，然后再接种可疑感染者或发病者，以防人为地将病原体由病禽传给健康禽只，扩大疫情。(六)免疫接种的一般注意事项1接种前应对禽群进行详细了解和检查，注意营养状况和有无疫病。一般鸡群健康，可保证接种安全，相反，可能出现明显的接种反应，甚至发病，产生免疫力差。因此免疫接种应于禽群健康状况良好时进行为宜。2接种前应考虑雏禽母源抗体水平，决定首次免疫接种时间。雏鸡的母源抗体，一方面可以抵抗病原的传染，另一方面又能妨碍疫苗接种后的免疫反应。一般来说传染性支气管炎的母源抗体可维持2周左右，新城疫的母源抗体3周后完全消失，但传染性法氏囊病的母源抗体可持续45周龄。雏鸡的母源抗体受母禽抗体的影响。由于母禽免疫接种时间的不同，或者孵化的种蛋来源不同，因此后代雏鸡的母源抗体水平就会有较大的差异。所以就很难规定一个统一免疫程序而适用于各养禽场。如新城疫，根据母源抗体的检测结果，对于母源抗体水平低而个体差异又较小的雏鸡，首次接种应在早龄进行；相反，母源抗体水平高的雏鸡，应推迟疫苗接种时间。对于母源抗体水平参差不齐，差别很大，而该地区又存在有新城疫威胁时，应早用苗，以提高母源抗体水平低的雏鸡的免疫力，然后再接种一次，使本来母源抗体水平较高的雏鸡，也能对疫苗接种有良好的反应，重复接种可根据监测血凝抑制抗体的情况，如果多数鸡只血凝抑制抗体下降到1:16以下时，就应进行强化免疫。3接种弱毒活菌苗前后各5天，禽群应停止使用对疫苗菌株敏感的药物，以免影响免疫效果。此外，抗病毒性疾病的疫苗的常加入某些抗菌药物，如青霉素、链霉素等。如果与弱毒活菌苗混合使用，则会降低疫苗的活菌数，从而也会影响免疫效果。4一个养禽场往往都不只进行一各种疫苗的接种。因此必须考虑到各种疫苗的互相配合，以减少相互之间的干扰作用，保证免疫的效果。例如一日龄雏鸡同时进行马立克氏病疫苗和新城疫疫苗接种时，新城疫疫苗的免疫效果受到抑制，新城疫疫苗与传染性支气管炎疫苗同时接种时，一般无不良影响，但如果分别接种，则认为支气管炎疫苗接种14天内不应接种新城疫疫苗，否则新城疫疫苗的免疫效果显著下降。为了保证免疫效果，对当地流行最严重的传染病，最好能单独进行接种，以便产生坚强的免疫力。从免疫学的角度考虑，任何疫苗都以单使用时效果最好，并已被实践证明。5使用各种疫苗，一定要按说明书的要求做，才能确保免疫效果。要做好免疫接种的详细记录。记录内容至少应包括：接种日期、禽群的品种、日龄、数量、使用疫苗的名称、厂名、批号、生产日期及有效期、稀释剂及稀释倍数、疫苗接种方法、操作人员等。6免疫接种后，要注意观察禽群接种疫苗后正常的异常的反应，如有不良反应或发病等情况，应采取适当的措施，并向有关部门报告。疫苗接种经过一定时间(1020天)后，应检查免疫效果。尤其是改用新的免疫程序及疫苗种类时更应检查。(七)免疫接种失败的原因分析禽群经免疫接种后，抵挡不住特定疫病的流行(例如：接种鸡新城疫疫苗后仍发生鸡新城疫)，或者效力检查不合格(例如鸡新城疫疫苗接种后，血凝抑抗体滴度不能达到应有的水平或抽检攻毒保护率低于标准要求)。均认为免疫接种失败。分析免疫接种失败原因，必须从客观实际出发，周密地考虑各方面的因素，切忌主观武断。事实上，每次免疫接种失败，都有其特殊的原因，但为了便于分析，开阔思路，把一些可能的原因归纳如下，以供参考。1雏禽在免疫接种时，存在有母源抗体。2疫苗选择不当，在疫病严重流行的地区，仅选用安全性好，但免疫效果较低的疫苗品系，例如，在有速发嗜内脏型新城疫流行的地区选用系苗。3免疫接种途径错误，例如，1周龄内的雏鸡，采用饮水法接种新城疫疫苗；强化免疫时，把新城疫系疫苗用于点眼、滴鼻。把灭活苗用于饮水等。4疫苗质量差。5疫苗运输、保管不当，造成疫苗失效或减效。6使用超过有效期的疫苗。7免疫接种工作不认真，例如采用饮水法免疫时饮水器不足，进行疫苗稀释时计算错误或稀释不均匀，没有把应该接种的禽只全部接种等。8鸡群中有免疫抑制性疾病存在，如法氏囊病、马立克氏病等。9不同种类疫苗之间的干扰作用。10服用抗菌药物或免疫抑制性药物。11接种时禽群内已潜伏有强毒病原微生物，或由接种人员及接种工具带入强毒病原微生物。三、剖检技术及病变检查要点病理剖检和病变检查是诊断传染病的重要方法之一。它既可验证临床诊断结果的正确与否，又可为实验室诊断方法和内容的选择提供进一步的参考依据。对家禽的基本剖技术可参考下述方法：1将病、死禽只羽毛、皮肤用水浸湿，以减少空气染污。用力压迫，使髋关节断袭，两腿叉开。2在靠近胸骨柄处剪开腹肌，沿两侧胁骨缘向前剪开胸肌，用力将胸骨向上折断、掀起，充分暴露胸腔和腹腔。3先检查胸腔脏器，如心、肺、气囊等；再检查腹腔脏器，如肝、脾、肾、法氏囊、卵巢、睾丸、气囊、输卵管、输尿管及胃、肠浆膜，观察有无变性、坏死、肿瘤等明显异常变化。需要做细菌或病毒分离培养时，则应按照无菌手续采取所需病料。最后剖开口腔、气管、食道、胃及肠管检查有无典型病理变化。四、细菌分离、培养技术细菌分离培养不仅是确诊传染病的重要和可靠手段，而且也是进上步研究病原特性，如耐药性、致病性和生化特性等必不可少的步骤。病原细菌分离培养的一般方法如下：1采取接种材料：分离细菌一般多采取心血、淋巴结、肝脏或脾脏，雏鸡白痢可取胆汁或未吸收完的卵黄。所选病料应在病鸡自然残废后立即采取，并严格按照无菌要求操作。病料取好后应尽快接种到培养基上，不应久放，以免被杂菌污染或病料中细菌死亡而得出错误培养结果。2制备培养基：一般大多数细菌在普通营养琼脂平板或肉汤中均能良好生长，因此最常用的培养基主要是普通琼脂或肉汤。为了特殊目的，有时需用特殊培养基，例如禽霍乱巴氏杆菌，为检查其荧光性菌落，要用血清琼脂平板（普通琼脂中加入10%的鸡或绵羊血清）；为让其生长更旺盛并检查有无溶血性，要用血液琼脂平板（普通琼脂中加入10%的新鲜绵羊血）。另外，对霉形体、孤菌、霉菌及传染性鼻炎等病原体的分离培养，也需要较特殊的培养基。普通琼脂的制备方法：取牛肉汤100毫升，加蛋白胨1克，氯化钠0.8克，琼脂粉2克，加热使其充分溶化，用NaHO溶液调PH7.8，15磅高压灭菌30分钟，冷至45左右时倾注于干烤消毒过的平皿中，每个平皿约20毫升，冷却凝固后用消毒纸包好放4冰箱备用，可保存12周。若上述培养基中不加琼脂粉便叫普通肉汤。将普通肉汤装入10毫升的试管中，每管23毫升，高压灭菌30分钟后放4冰箱备用，可保存数月。3细菌的接种：将选好的病料放于灭菌容器内，在无菌室或无菌罩或酒精灯下，以烧热的铁片或剪刀在病料表面烧烙消毒，然后在烧烙处剪一小口，用接种棒插入小口，勾取少量组织接入肉汤内，或在普通琼脂平板上划线接种，然后将接种过的肉汤或平皿放入37温箱培养1824小时，观察细菌生长情况，并将培养物涂片染色镜检，或进一步纯培养后作生化试验，动物接种试验或药敏试验。根据以上培养特性，染色镜检特性、生化试验结果以及动物接种结果对疫病做出最后诊断。不同细菌的各种特性可参考后面有关内容或微生物学教材。所有过程都应严格无菌操作。五、病原菌药敏试验抗菌药物（中草药、抗菌素、磺胺类等）是兽医临床常用的药物，但是各种病原体对抗菌药物的敏感性各不相同，同时，由于抗菌药物的广泛应用，以及广谱抗菌素的不断增加，它们虽然对病原体有一定的作用，但在使用不当时常导致抗药性的形成，甚至干扰机体内的正常微生物群的作用，反而对机体带来不良影响。因此，测定病原菌对抗菌药物的敏感性，正确使用抗菌药物，对于临床治疗工作具有重要的意义，药敏试验有以下几种方法。（一）纸片法纸片法操作简单，应用也最普遍。抗菌素纸片的制备1将质量较好的滤纸用打孔机打成直径6毫米的圆片，每100片放入一小瓶中，160干热灭菌12小时，或用高压灭菌（15磅30分钟）后在60条件下烘干。2抗菌药物的浓度（用蒸馏水或生理盐水稀释）青霉素200单位/毫升其他抗菌素1000微克/毫升磺胺类药物10毫克/毫升中草药制剂1克/毫升3用无菌操作法将欲测的抗菌药物溶液1毫升，加入100片纸片中，置冰箱内浸泡12小时，如立即试验可不烘干，若保存备用可用下法烘干（干燥的抗菌素纸片可保存六个月）。（1）培养皿烘干法：将浸有抗菌药液的纸片摊平在培养皿中，于37温箱内保持23小时即可干燥，或放在无菌室内过夜干燥。（2）真空抽干法：将放有抗菌药物纸片的试管，放在干燥器内，用真空抽气机抽干，一般需要1824小时。4将制好的各种药物纸片装入无菌小瓶中，置冰箱内保存备用，并用标准敏感菌株作敏感性试验，记录抑制圈的直径，若抑菌圈比原来的缩小，则表明该抗菌药物已失效，不能再用。培养基：一般细菌如肠道杆菌及葡萄球菌等可用普通琼脂平板；链球菌、巴氏杆菌或肺炎球菌等可用血液琼脂平板；测定对磺胺类药物的敏感试验时，应使用无蛋白胨琼脂平板。菌液：为培养1013小时的幼龄菌液（抑菌圈的大小受菌液浓度的影响较大，因而菌液培养的时间一般不宜超过17小时）。试验方法：用白金耳取培养1018小时的幼龄菌，均匀涂抹于琼脂平板上，待干燥后，用镊子夹取各种抗菌素纸片，平均分布于琼脂表面（每个平板放置45片），在37温箱内培养18小时后观察结果。结果测定：根据抗菌纸片周围无菌区（抑菌区）的大小，测定其抗药程度。因此，必须测量抑菌圈的直径（包括纸片），按其大小，报告该菌株对某种药物敏感与否。1青霉素抑菌圈的标准：抑菌圈直径敏感性10毫米1020毫米20毫米抗药中度敏感极度敏感2其他抗菌素及磺胺类药物的敏感标准：抑菌圈直径敏感性10毫米1115毫米15毫米抗药中度敏感极度敏感3中药抑菌素的标准：抑菌圈直径敏感性15毫米15毫米1520毫米抗药中度敏感极度敏感（二）快速敏感试验葡萄糖指示法许多细菌能分解葡萄糖而产酸，使培养基PH值发生改变，若在培养基中加入抗菌药物，接种的细菌对抗菌药物敏感时，培养基中的葡萄糖就不被细菌分解利用，不会形成酸性物质，PH值不发生变化，因而指示剂也不变色，相反，细菌对抗菌药物不敏感时，抗菌药物抑制不了该菌的生长繁殖，因而分解葡萄糖并产酸，使加入其中的溴甲酚紫由紫变黄，以此来测定细菌对药物的敏感性。具体操作方法如下：1抗菌素纸片及菌液的准备，同纸片法。2配制指示培养基：取普通琼脂15毫升，加入1%葡萄糖及0.6%溴甲酚紫指示剂0.7毫升。3灭菌后，待培养基凉至50左右时，加入菌液0.5毫升，充分混匀后（防止气泡）作倾注培养。4待凝固后，用镊子将抗菌素