实验5病原生物学实验.ppt

实验五培养基的制作,（一）实验目的要求,1、掌握培养基的制作程序；2、熟悉常用培养基的种类及用途；3、掌握培养基的消毒灭菌技术。,（二）培养基的成分、种类和用途,1、培养基的概念：是指人工配制的适合细菌生长繁殖的综合营养基质。2、培养基的营养物质：蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类、水。3、培养基的其它成分：凝固剂、抑制剂、指示剂。,4、培养基的种类和用途,基础培养基：培养营养要求不高的细菌，如普通平板；营养培养基：能满足营养需求较高细菌的生长，如血平板；鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克氏双糖培养基（KIA）；选择培养基：具有选择性抑制作用，用于选择性的培养目的菌，如SS平板；增菌培养基：促进目的菌的生长，适用于含菌量较少的标本，如葡萄糖肉汤；厌氧培养基：用于培养厌氧菌。,（1）按用途分类：,（2）按物理性状分类：,液体培养基：不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。半固体培养基：含0.30.5琼脂，用于观察细菌的动力。固体培养基：含22.5琼脂，多用于细菌的分离培养。,（三）实验器材,常用玻璃器材：培养皿、试管、烧杯、三角烧瓶、玻棒等。培养基的成分：普通琼脂培养基、蛋白胨、牛肉浸膏、NaCl、琼脂粉等。称量工具：普通天平、电子天平。灭菌器材：电磁炉、高压蒸汽灭菌锅、干烤箱、微波炉等。培养基的制作：无菌室、超净工作台。,干烤箱,用途：适用于玻璃器皿、油剂、粉剂等的灭菌；温度160170，时间2h。,高压蒸汽灭菌器,超净工作台,（四）实验方法,玻璃器材的清洗新购置的玻璃器材：12盐酸浸泡清水清洗；用过的无污染器皿：洗涤剂洗刷清水清洗；细菌污染的器材：消毒灭菌后再洗刷盛培养基试管和平皿：高压灭菌趁热倒出洗涤剂洗刷清水冲洗；吸管：3来苏浸泡清水冲洗；玻片和盖玻片：3来苏和清洁液浸泡清水冲洗；染色后的玻片，应肥皂水煮沸10min再洗涤；含油脂的器皿：单独灭菌。,1、常用玻璃器材的准备,玻璃器皿灭菌前的准备,玻璃器皿在清洗、干燥后必须经正确的包裹和加塞后才能进行灭菌处理。灭菌方法：干烤灭菌法,2、培养基制备的一般程序,称量,溶化,分装,灭菌,倒平板,培养基灭菌方法, 基础培养基：121.3高压蒸汽灭菌15分钟, 含糖培养基：113 灭菌15分钟, 鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌3天3次, 不耐高温的液体成分：滤过除菌,保存,要求配置的培养基量（每组）,4人一小组,每组需配培养基:液体培养基：25ml，分装试管4支半固体培养基：25ml，分装试管4支固体培养基：100ml/2人,倒4支试管、4板平板,成分: 牛肉浸膏（0.2g） 蛋白胨（0.5g） 氯化钠（0.25g） 50mldH2O等。 程序： 称量;熔化;分装(试管);灭菌;保存,（1）液体培养基的制作,2.半固体培养基：在肉汤中加入0.2%0.5%的琼脂即成。25ml肉汤中0.1g琼脂粉。,程序：称量；熔化；分装(试管)；灭菌；保存,3.固体培养基： 在肉汤中加入2%3%的琼脂即成；或直接用营养琼脂粉配置。,平板制作程序：称量3.5g琼脂粉配100ml固体培养基。 称量；熔化；分装(三角烧瓶)；灭菌；倒平板；保存,试管斜面制作程序： 称量；熔化；分装(试管)；灭菌；斜置；保存,