临床生化AFU检测.ppt
-L- -L-岩藻糖苷酶岩藻糖苷酶(-L-FUCOSidase(-L-FUCOSidase，AFU)AFU)是一种溶酶体酸性水解酶，早是一种溶酶体酸性水解酶，早期测定本酶主要用于遗传性期测定本酶主要用于遗传性AFUAFU缺乏症的诊断，并借以与其它遗传性粘多糖贮缺乏症的诊断，并借以与其它遗传性粘多糖贮积病的鉴别。积病的鉴别。19801980年法国学者年法国学者DeugnierDeugnier等研究发现，原发性肝癌等研究发现，原发性肝癌(PHC)(PHC)患者血患者血清清AFUAFU升高，并被众多的研究所证实。故有人提出升高，并被众多的研究所证实。故有人提出AFUAFU可作为可作为PHCPHC的肿瘤标志物，的肿瘤标志物，与与AFPAFP联合或参照应用大大提高了诊疗价值。近年来研究发现，联合或参照应用大大提高了诊疗价值。近年来研究发现，AFUAFU对某些疾对某些疾病的发生、发展均具有重要意义。病的发生、发展均具有重要意义。 国内外早期文献报道国内外早期文献报道AFUAFU在原发性肝癌患者血清中活性显著升高在原发性肝癌患者血清中活性显著升高, ,测定测定AFUAFU对诊断原发性肝癌具有重要价值对诊断原发性肝癌具有重要价值, AFU, AFU测定有利于原发性肝癌（测定有利于原发性肝癌（PHCPHC）的诊）的诊断、疗效观察、手术后随访、以及肝癌普查。在断、疗效观察、手术后随访、以及肝癌普查。在AFPAFP阴性的病例中，大约有阴性的病例中，大约有70-85%70-85%出现出现AFUAFU的阳性结果，在小肝癌病例血清的阳性结果，在小肝癌病例血清AFUAFU的阳性率高于的阳性率高于AFPAFP，因此同，因此同时测定时测定AFUAFU与与AFPAFP可使可使PHCPHC的阳性检出率从单测的的阳性检出率从单测的AFP70%AFP70%，提高至，提高至90-94% 90-94% 。 目前，国内大多数医院使用的商品试剂为终点法试剂，该法由于酶底物本目前，国内大多数医院使用的商品试剂为终点法试剂，该法由于酶底物本身的抗干扰性差，对溶血、黄疸表现出明显的基质效应。我们根据市场需要，身的抗干扰性差，对溶血、黄疸表现出明显的基质效应。我们根据市场需要，从国外引进新型底物（从国外引进新型底物（MCPNPMCPNP），并优化反应体系，加入合成溶血抗干扰剂和），并优化反应体系，加入合成溶血抗干扰剂和采用抗黄疸缓冲体系，使试剂具有抗干扰性强、精密度较好，基质效应不明采用抗黄疸缓冲体系，使试剂具有抗干扰性强、精密度较好，基质效应不明显。历时近两年的试验室和临床应用评价，结果稳定显。历时近两年的试验室和临床应用评价，结果稳定, ,性能达到设计要求，现性能达到设计要求，现正式向国内市场独家推出新一代的单一稳定正式向国内市场独家推出新一代的单一稳定AFUAFU测定试剂。该试剂采用连续检测定试剂。该试剂采用连续检测法，适用于各种半测法，适用于各种半/ /全自动分析仪器。全自动分析仪器。概概 述述主要性能指标主要性能指标l单一液体试剂单一液体试剂: : 直接使用，不占试剂位。直接使用，不占试剂位。l连续检测法连续检测法: : 方便简捷，抗干扰性强方便简捷，抗干扰性强l高稳定性高稳定性: : 2 288避光密闭贮存稳定避光密闭贮存稳定1212个月个月 2 288避光开瓶稳定性避光开瓶稳定性 30 30天天l检测范围检测范围: : 高感度方式高感度方式( (原倍原倍) 300U/L) 300U/L 低感度方式低感度方式( (减量减量) 600U/L) 600U/L l精精 密密 度度: : 平均平均CV%=1.14CV%=1.14l相相 关关 性性: : 与终点法比较与终点法比较 r=0.976r=0.976l适适 用用 性性: : 适用于各种半适用于各种半/ /全自动分析仪全自动分析仪l灵灵 敏敏 度度: : 高感度方式高感度方式0.0100/min(0.0100/min(约约20U/L)20U/L)l反应线性期：反应线性期： 7 7分钟分钟l稳定的试剂空白稳定的试剂空白: : 监测期内空白稳定监测期内空白稳定仪器:7060分析仪精精 密密 度度单位: U/L低值高值N2121MEAN11.3162.4MAX12166MIN11159SD0.14011.66CV1.24%1.02%111.1162211.3163311.4161411.2162511.6160611.2159711.3163811.4162911.21651011.61641111.31641211.21661311.41611411.31611511.51621611.41631711.31631811.21641911.11632011.41622111.3161AFU试剂校准液（S 2 ）反应曲线 （ 7 0 6 0 C 分析仪）010002000300040005000161116212631测光点吸光度-20020406080100吸光度变化值ABS2A BS2/MIN灵敏度灵敏度(S2(S2反应曲线反应曲线) )AFU试剂空白反应曲线（7 0 6 0 C 分析仪）0100200300400500600700161116212631测光点试剂空白吸光度-20020406080100ABS1A BS1/MIN试剂空白吸光度变化试剂空白试剂空白主要测定方法及部分性能比较主要测定方法及部分性能比较方方 法法反应时间反应时间灵敏度灵敏度CV%CV%抗干扰性抗干扰性试剂试剂比色法比色法37603760分钟分钟低低1.801.80差差; ;收溶血收溶血/ /黄疸黄疸/ /脂血脂血影响大影响大干粉干粉自动分析法自动分析法37 537 5分钟分钟中等中等2.462.46较好较好; ; 受溶血和黄疸受溶血和黄疸影响影响液体液体连续检测法连续检测法37603760秒秒中等中等6.206.20较好较好; ;胆红素胆红素/ /溶血溶血/ /脂脂血影响较小血影响较小液体液体/ /干粉干粉CPNPCPNP法法37603760秒秒高高2.102.10较好较好; ;胆红素胆红素/ /溶血溶血/ /脂脂血影响较小血影响较小干粉干粉MGCPNPMGCPNP法法37603760秒秒高高1.131.13较好较好; ;对溶血对溶血/ /脂血脂血/ /黄黄疸有良好的抗干扰性疸有良好的抗干扰性. .单一液体单一液体ELISAELISA法法37 6037 60分钟分钟极高极高荧光法荧光法极高极高(0.06U/L)(0.06U/L)临床意义临床意义 AFU测定有利于原发性肝癌（测定有利于原发性肝癌（PHC）的诊断、疗效观察、手术后随访、以）的诊断、疗效观察、手术后随访、以及肝癌普查；在及肝癌普查；在AFP阴性的病例中，大约有阴性的病例中，大约有70-85%出现出现AFU的阳性结果，在小的阳性结果，在小肝癌病例血清肝癌病例血清AFU的阳性率高于的阳性率高于AFP，因此同时测定，因此同时测定AFU与与AFP可使可使PHC的阳的阳性检出率从单侧的性检出率从单侧的AFP70%，提高至，提高至90-94% AFU广泛存在于人体各组织细胞溶酶体和体液中，胎盘、胎儿组织、脑、广泛存在于人体各组织细胞溶酶体和体液中，胎盘、胎儿组织、脑、肺、肝、胰、肾以及血清、尿液、唾液和泪液中均含有肺、肝、胰、肾以及血清、尿液、唾液和泪液中均含有AFU。早期测定本酶主。早期测定本酶主要用于遗传性要用于遗传性AFU缺乏症的诊断，并借以与其它遗传性粘多糖贮积病的鉴别。缺乏症的诊断，并借以与其它遗传性粘多糖贮积病的鉴别。1980年法国学者年法国学者Deugnier等研究发现，原发性肝癌（等研究发现，原发性肝癌（PHC）患者血清）患者血清AFU升高，升高，并被众多研究所证实。故有人提出并被众多研究所证实。故有人提出AFU可作为可作为PHC的肿瘤标志物，与的肿瘤标志物，与AFP联合联合或参照应用大大提高了诊疗价值。近年来，国内外学者又作了许多研究，发现或参照应用大大提高了诊疗价值。近年来，国内外学者又作了许多研究，发现AFU对某些疾病的发生、发展均有重要意义。对某些疾病的发生、发展均有重要意义。 临床资料表明，在肝癌诊断中，临床资料表明，在肝癌诊断中，PHC患者患者AFU活性不仅显著高于正常对活性不仅显著高于正常对照，而且也显著高于转移性肝癌、肝硬化、先天性肝囊肿、恶性血管内照，而且也显著高于转移性肝癌、肝硬化、先天性肝囊肿、恶性血管内皮瘤、胆管细胞癌和其它良性占位性病变。对皮瘤、胆管细胞癌和其它良性占位性病变。对PHC诊断的阳性率为诊断的阳性率为70-85%，特异性达，特异性达90%左右。左右。Marotta等对等对PHC、肝硬化后肝癌患者进行、肝硬化后肝癌患者进行AFU、AFP检测，发现检测，发现PHC和肝硬化后肝癌患者和肝硬化后肝癌患者AFU、AFP均增高。慢均增高。慢性肝炎和肝硬化患者血清性肝炎和肝硬化患者血清AFU也增高，其阳性率分别为也增高，其阳性率分别为3.8%和和5.6%,可可能与肝细胞损伤能与肝细胞损伤,酶逆流入血有关。也有血清酶逆流入血有关。也有血清AFU在在PHC和肝硬化等非和肝硬化等非PHC疾病组重叠的报道，但后者一般轻度升高，且随疾病的治愈和好转疾病组重叠的报道，但后者一般轻度升高，且随疾病的治愈和好转而下降；而而下降；而PHC则血清则血清AFU持续升高，且升高幅度较大。因此持续升高，且升高幅度较大。因此AFU测定测定还有鉴别诊断的意义。还有鉴别诊断的意义。AFU活性升高与肝功能受损和肝细胞破坏无关，活性升高与肝功能受损和肝细胞破坏无关，是由于癌细胞本身代谢所致。有研究提示是由于癌细胞本身代谢所致。有研究提示AFU诊断肝细胞癌（诊断肝细胞癌（HCC）的）的敏感性好，而特异性较敏感性好，而特异性较AFP为低。血清为低。血清AFU的活性和阳性率与肝癌直径的活性和阳性率与肝癌直径大小无明显相关性。血清大小无明显相关性。血清AFU活性与活性与AFP水平无相关性，水平无相关性，AFP阴性和阴性和AFP升高而不足以诊断升高而不足以诊断PHC患者，其血清患者，其血清AFU的阳性率达的阳性率达80.8%。肝组。肝组织活检证实为织活检证实为PHC者，血清者，血清AFU的阳性率的阳性率67%为为AFP阳性率（阳性率（20%）三）三倍以上。因此倍以上。因此AFU测定对测定对AFP阴性和小细胞肝癌的诊断价值更大。阴性和小细胞肝癌的诊断价值更大。AFU与与AFP联合检测可提高肝癌的检出率。联合检测可提高肝癌的检出率。Giadina等对肝硬化患者进行随等对肝硬化患者进行随访研究，结果表明，血清访研究，结果表明，血清AFU活性是早期发现活性是早期发现HCC的有用指标，血清的有用指标，血清AFU明显增加的肝硬化患者应及时检测其它肝癌标志明确诊断。明显增加的肝硬化患者应及时检测其它肝癌标志明确诊断。 测定测定AFU活性还有有利于不同类型白血病分化程度的认识，从而指导临活性还有有利于不同类型白血病分化程度的认识，从而指导临床诊断和治疗。床诊断和治疗。Besly等报道，等报道，B细胞性慢性淋巴细胞白血病患者白细胞细胞性慢性淋巴细胞白血病患者白细胞AFU活性明显低于其它类型白血病，认为这与活性明显低于其它类型白血病，认为这与B细胞属性无关，而是恶性细细胞属性无关，而是恶性细胞的增殖产物。胞的增殖产物。 研究表明，随妊娠周数增加血浆研究表明，随妊娠周数增加血浆AFU递增，在分娩或人工终止妊娠后，递增，在分娩或人工终止妊娠后，迅速下降，迅速下降，5天后降至正常。胎儿、胎盘组织也可影响妊娠时血浆天后降至正常。胎儿、胎盘组织也可影响妊娠时血浆AFU活性，活性，故测定故测定AFU可作为妊娠的监测指标。卵巢癌患者血清可作为妊娠的监测指标。卵巢癌患者血清AFU活性下降。活性下降。 胃癌患者血清胃癌患者血清AFU升高，急性胰腺炎不升高，囊性纤维变性伴发胰腺炎升高，急性胰腺炎不升高，囊性纤维变性伴发胰腺炎时则下降。时则下降。PHCPHC与与HCCHCC时时AFUAFU阳性率阳性率67.8%HCC87%82.0%75.%76.0%81.2%PHC翟飞等翟飞等报报 道道王晓玲等王晓玲等报报 道道Dongnier等等报报 道道谭欣诚等谭欣诚等报报 道道张世民等张世民等报报 道道杨申海杨申海报报 道道两百例病人血清两百例病人血清AFU活性活性(U/L)正常对照正常对照 137 0 0 6.061.31PHC 25 18 72.0 14.679.55急性肝炎急性肝炎 45 6 13.3 6.872.93慢性肝炎慢性肝炎 69 7 10.1 6.232.74 肝硬化肝硬化 45 5 11.1 6.512.91其他消化系统肿瘤其他消化系统肿瘤 16 1 12.5 6.752.58组组 别别 例数例数 异常数异常数 异常率异常率 Xs健康人与肝病患者血清健康人与肝病患者血清AFP浓度浓度AFU活力测定结果活力测定结果组组 别别 n AFP(ug/L) AFU(nmol/ml.h AFU阳性率阳性率(%)正常对照正常对照 114 10.22.1 21487 0PHC 46 264124 884364 82肝硬化肝硬化 28 13.13.1 22694 5.6 急性肝炎急性肝炎 42 10.42.2 21489 0 慢性肝炎慢性肝炎 38 11.22.4 22692 3.8七例七例PHC患者术前、术后患者术前、术后AFU活力测定结果活力测定结果代代 号号 年龄年龄 术前术前AFU活力活力(nmol/ml。h) 术后术后AFU(nmol/ml.h 1 36 896 3982 38 776 3863 64 541 2604 59 596 2545 70 492 194 6 35 964 4107 52 524 304 注意事项注意事项1. 1. 本法禁止使用肝素和橼酸盐血浆本法禁止使用肝素和橼酸盐血浆. .可使用可使用EDTA-Na2EDTA-Na2、草酸盐、草酸盐、NaFNaF血浆。血浆。2. 2. 试剂应注意避光密闭低温保存试剂应注意避光密闭低温保存(2-8(2-8或或-20)-20)。3. 3. 本试剂反应线性期长本试剂反应线性期长, ,为了更好的发挥试剂性能为了更好的发挥试剂性能, ,建议建议用户在设置参数时反应开始读数时间用户在设置参数时反应开始读数时间( (延滞时间延滞时间) )应大应大于于9090秒秒, ,以更好的减少共存物质的基质效应。以更好的减少共存物质的基质效应。4. 4. 本法由于使用理论校准因素本法由于使用理论校准因素(F=2012),(F=2012),建议用户根据建议用户根据各自的情况建立期望值各自的情况建立期望值( (参考值参考值) )范围。范围。
