分子生物学 习题.doc

【精品文档】如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流分子生物学 习题.精品文档.1.核糖体的E位点是（ D ）A结合氨酰-t RNA B结合肽酰-t RNAC结合ShineDalgarno序列D短暂地结合-t RNAE结合m RNA起始密码子2.在细菌中IF-2的作用( B )A阻止50S核糖体亚基过早的结合B帮助起始氨酰t RNA进入核糖体C促进30S亚基结合到m RNA上D阻止氨酰t RNA结合到A位点E稳定30S核糖体亚基3.细菌30S核糖体亚基结合到m RNA是为了（ C ）A.30S亚基识别m RNA的5末端B.核糖体蛋白结合到ShineDalgarno序列C. ShineDalgarno序列和r RNA的碱基配对D.起始密码AUG和r RNA的碱基配对E.随后和50S亚基结合4.在真核生物中，40S核糖体亚基结合到m RNA是为了（A）A.40S亚基识别m RNA的5末端B.核糖体蛋白结合到m RNA的识别序列上C. m RNA 和r RNA的碱基配对D.起始密码AUG和r RNA的碱基配对E.随后和60S亚基结合5.细菌中那种蛋白质复合体与氨酰t RNA和GTP结合在核糖体A位点（A）A. EF-TuB. eIF2C. IF-2D. EF-TsE. EF-G6.细菌中核糖体移位需要那种蛋白质（E）A. EF-TuB. eIF2C. IF-2D. EF-TsE. EF-G7.第一类释放因子的作用（C）A.从核糖体上释放出脱酰基的t RNAB.从核糖体上释放第二类释放因子C.识别终止密码子，结合在A位点D.帮助核糖体移位E.从t RNA释放氨基酸8.细菌核糖体的那部分具有肽基转移酶活性（B）A.30S亚基上的一种蛋白质B. 23S rRNAC. 50S亚基上的一种蛋白质D. 16S rRNAE. 5S rRNA9.一旦肽键的形成发生，移位作用使核糖体的一个密码子沿着m RNA向前移动，在移位之后核糖体上多肽和tRNAs的结构？答案：t-RNA从P位点移动到A位点，肽基t-RNA从A位点移动到P 位点，现在一个新的氨酰t-RNA进入A位点，A位点被置于下一个密码子上。Page 66910.翻译的三个阶段，他们是怎么开始的？（老师说是重点）答案：1起始，在肽键形成之前，组装核糖体，mRNA和two tRNAs；2延伸，包括第一个肽键和最后一个肽键的生成；3终止，包括新生多肽链的释放，m-RNA的分解，两个核糖体亚基的分离。11. mRNA5端UTR（非转录区）包含的序列对转录是必要的。核糖体结合位点（包括ShineDalgarno序列）定位在起始密码子AUG开始后十个碱基对内。核糖体结合位点在转录中的作用是什么？答案：通过核糖体结合位点和16S小RNA3末端的碱基互补配对，小核糖体亚基（30S）结合到mRNA，P位点置于起始密码子上。12.对于转录起始必须的的三个起始因子(IF-1, IF-2, and IF-3)，它们各自的作用是什么？答案：这些因子和30S结合，当50S大亚基和小亚基结合时，他们就被释放出来。IF-3结合在游离的30S亚基上，阻止其与50S亚基结合，在模拟位点上能够使他们结合到m RNA,它检查第一个氨酰RNA结合的准确性。IF-2结合一个特殊的起始tRNA，使它的一部分进入P位点（只有30S亚基能够结合到mRNA）。50S亚基的结合激活了IF-2的GTP酶的活性，可能转变成有活性的70S。IF-1与30S亚基结合，在起始时阻止氨酰tRNA进入A位点。13.什么是起始密码子，它编码那种氨基酸？答案：起始密码子在原核和真核生物中都是AUG，编码甲硫氨酸（蛋氨酸）。有时，细菌会使用GUG或UUG，但是他们仍然结合相同的起始甲硫氨酸-tRNA。14.假如大多数的原核生物的mRNA都是多顺反子，编码不止一个多肽链，它能合成多聚蛋白质或每一个顺反子的转录起始是独立发生的？答案：多顺反子信息的起始转录在每一个顺反子中都是独立开始的，每一个顺反子都有一个核糖体结合位点。没有多聚蛋白质的合成，每一个顺反子都被翻译为一个独立多聚蛋白质。15.第一个添加到多肽链上的氨基酸是甲硫氨酸，除此之外，多肽链内部也会有蛋氨酸。为什么单独用甲硫氨酰-tRNAs来作为转录的起始和延伸，核糖体是如何区分的？答案：起始tRNA必须部分结合在30S亚基的P位点上，被一个特殊因子IF-2识别。在延伸时，甲硫氨酰tRNA完全进入核糖体上A位点，由EF-Tu联系。在起始tRNA上的甲硫氨酸的氨基被甲酰化，tRNAfMet 稍微改变了受体的碱基配对，把反密码子臂比作tRNAmMet 。16.核糖体移位必须的因子是什么，在一位过程中发生了什么事件？答案：EF-G是移位必需的因子，核糖体通过EF-G介导的GTP的水解提供的能量向mRNA添加三个碱基，脱酰基tRNA从P位点移动到E位点，肽基tRNA也从A位点移到P位点，留下空的A位点。17.转录终止密码子有哪些？它们如何介导终止？答案：终止密码子有三个：UAA, UAG和UAA。他们不能被任何一种氨酰-tRNAs识别，但能被第一类释放因子识别，RF1和 RF2催化核糖体中多肽链脱水缩合。第二类释放因子RF3释放第一类释放因子，核糖体回收这些释放因子（RRF），这些因子最终导致mRNA的释放和30S和50S亚基的解离。1. 一个激活剂没有一个活化域（ C ）A. 必须直接与核糖核酸酶相互作用B. 也不需要DNA结合域C. 可能需要一个活性区域作为共激活子D. 是一个突变体不能激活一个基因E. 被称为抑制剂 2. 所有的染色质重组复合物都有一个亚基（ B ），它被基因超家族的一个成员编码。A. 结合组蛋白B. ATPaseC. 结合抑制剂D. 结合DNAE. 结合转录因子3. 转录激活通过一个重组复合体，经常伴随着（D）A. 组蛋白的去乙酰化B. 募集一个激活剂到启动子上C. DNA甲基化D. 从启动子上置换核小体E. 分裂核小体4. 关于甲基化和基因的活性之间的关系哪一个描述最好（A）A. DNA甲基化通常和转录的沉默联系B. DNA甲基化通常和翻译的沉默联系C. DNA甲基化通常和转录的活化联系D. 组蛋白甲基化通常和转录的沉默联系E. 组蛋白甲基化通常和转录的活化联系5. 真核生物基因的表达在那些水平上被调节？那一个水平最重要？答案：真核生物基因的表达有六个主要控制点：DNA局部结构的改变，转录的起始，RNA转录产物的加工，信使RNA从细胞核运送到细胞质，信使RNA翻译，信使RNA降解和更新。多数调控都在转录起始阶段。6. 染色体结构的哪些方面影响基因转录的起始？答案：活跃的转录基因与对核酸酶降解敏感的常染色体区域有关，观察的结果可被理解为这样含义，一个特殊基因的转录涉及到核小体重组导致基因的启动子暴露给转录因子和RNA聚合酶。也伴随着组蛋白的变性，一般情况下，组蛋白的乙酰化和基因的活性相关，反之组蛋白的去乙酰化和基因的沉默相关7. 描述双杂交试验的概念，评价蛋白质与蛋白质之间的相互作用？答案：在这个过程中，两种蛋白质中的一种的分析鉴定是通过它融合DNA结合域，另一个融合成一个激活域。DNA结合域应该能结合一个基因，当这个基因被激活时，它转录出易被检测到的产物。如果产物被检测到，那么这个基因就被成功激活了，意味着DNA结合域和激活域已经被两种检测蛋白质的相互作用联系在一起。8. 一些激活子没有激活域，作为激活子他们怎么起作用？答案：没有激活域的激活子一定可以结合在共激活子蛋白上被携带到到激活域。9. 在体外观察到的和染色质的重组属于哪种类型？答案：在体外可以观察到三种变化：首先，核小体为了改变暴露在外面的序列沿着DNA滑动，第二，核小体之间的缝隙增加或者减小为了改变与蛋白质有关的DNA序列的位置，第三，组蛋白八聚体从DNA上完全移出，留下没有河西奥体的部位。10. 核染色质复合物不包括DNA结合序，他们是怎么样影响核染色质结构的？答案：这些复合物必须被其他DNA结合蛋白募集，如激活子或抑制剂，来影响核染色质的结构。11. 那种化学结构的变化可以修饰组蛋白？答案：组蛋白可以被甲基化，乙酰化，磷酸化以及脱去这些功能组分。12. 组蛋白去乙酰化的作用是什么？答案：组蛋白去乙酰化的一般作用是抑制基因的表达，去乙酰化酶与阻遏物蛋白复合体相关联，异染色质（没有活性的染色质）通常包含着去乙酰化组蛋白的核小体。13. 组蛋白甲基化的作用？它和DNA甲基化的联系？答案：组蛋白甲基化与DNA沉默片段有关系，比如异染色质（甲基化的DNA）或活化基因。组蛋白甲基化和DNA甲基化是相关的，DNA甲基化导致了组蛋白的甲基化。14. 一般启动子活化时发生着什么？答案：启动子的活化伴随着组蛋白的乙酰化和脱甲基化，以及DNA的脱甲基化。 一、名词解释 1cDNA 是由 mRNA 通过反转录酶合成的双链 DNA；cccDNA 是游离 于染色体之外的质粒双链闭合环形 DNA。4回文序列：DNA 片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。5micRNA：互补干扰 RNA 或称反义 RNA，与 mRNA 序列互补，可抑制 mRNA 的翻译。6核酶：具有催化活性的 RNA，在 RNA 的剪接加工过程中起到自我催化的作用。7模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域 8信号肽：在蛋白质合成过程中 N 端有 1536 个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。 9弱化子：在操纵区与结构基因之间的一段可以终止转录作用的核苷酸序列。11上游启动子元件： 是指对启动子的活性起到一种调节作用的 DNA 序列，区的 TATA、 -10 -35 区的 TGACA 及增强子，弱化子等12DNA 探针：是带有标记的一段已知序列 DNA，用以检测未知序列、筛选目的基因等方 面广泛应用。13SD 序列：是核糖体与 mRNA 结合序列，对翻译起到调控作用。14单克隆抗体：只针对单一抗原决定簇起作用的抗体17顺式作用元件：在 DNA 中一段特殊的碱基序列，对基因的表达起到调控作用的基因元件18Klenow 酶：DNA 聚合酶 I 大片段，只是从 DNA 聚合酶 I 全酶中去除了 5 3外切酶活 性20融合蛋白：真核蛋白的基因与外源基因连接，同时表达翻译出的原基因蛋白与外源蛋白 结合在一起所组成的蛋白质。 二、填 空 1 DNA 的物理图谱是 DNA 分子的（限制性内切酶酶解 ）片段的排列顺序。 2 RNA 酶的剪切分为（自体催化）（异体催化）两种类型。3原核生物中有三种起始因子分别是（IF-1）（IF-2）和（IF-3）。4蛋白质的跨膜需要（信号肽）的引导，蛋白伴侣的作用是（辅助肽链折叠成天然构象 的蛋白质）。5启动子中的元件通常可以分为两种：（核心启动子元件 ）和（上游启动子元件 ）。6分子生物学的研究内容主要包含（结构分子生物学）（基因表达与调控）（DNA 重组技术）三部分。7证明 DNA 是遗传物质的两个关键性实验是（肺炎球菌感染小鼠）（T2 噬菌体感染大肠杆菌）这两个实验中主要的论点证据是：（生物体吸收的外源 DNA 改变了其遗传潜能）。8hnRNA 与 mRNA 之间的差别主要有两点： hnRNA 在转变为 mRNA 的过程中经过剪接（mRNA 的 5末端被加上一个 m7pGppp 帽子， mRNA3末端多了一个多聚腺苷酸(polyA) 在 尾巴）。9蛋白质多亚基形式的优点是（亚基对 DNA 的利用来说是一种经济的方法 ）（可以减少蛋白质合成过程中随机的错误对蛋白质活性的影响） 活性能够非常有效和迅速地被打开和被关闭 ）。10蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）（结构充实）（最后重排）。 11半乳糖对细菌有双重作用；一方面（可以作为碳源供细胞生长）另一方面（它又是细胞壁的成分）。所以需要一个不依赖于 cAMPCRP 的启动子 S2 进行本底水平的永久型合成；同时需要一个依赖于 cAMPCRP 的启动子 S1 对高水平合成进行调节。有 G 时转录从 （S2）开始，无 G 时转录从（S1）开始。12DNA 重组技术也称为（基因克隆）或（分子克隆）。最终目的是（把一个生物体中的遗传信息 DNA 转入另一个生物体）。典型的 DNA 重组实验通常包含以下几个步骤：提取供体生物的目的基因（或称外源基因），酶接连接到另一 DNA 分子上（克隆载体）， 形成一个新的重组 DNA 分子。将这个重组 DNA 分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化。对那些吸收了重组 DNA 的受体细胞进行筛选和鉴定。 对含有重组 DNA 的细胞进行大量培养，检测外援基因是否表达。13、质粒的复制类型有两种：受到宿主细胞蛋白质合成的严格控制的称为（严紧型质粒），不受宿主细胞蛋白质合成的严格控制称为（松弛型质粒）。 14PCR 的反应体系要具有以下条件：a、被分离的目的基因两条链各一端序列相互补的 DNA 引物（约 20 个碱基左右）。b、具有热稳定性的酶如：TagDNA 聚合酶。c、dNTP d、作为模板的目的 DNA 序列 15PCR 的基本反应过程包括：（变性）（退火）（延伸）三个阶段。16、转基因动物的基本过程通常包括：将克隆的外源基因导入到一个受精卵或胚胎干细胞的细胞核中；接种后的受精卵或胚胎干细胞移植到雌性的子宫；完成胚胎发育，生长为后代并带有外源基因；利用这些能产生外源蛋白的动物作为种畜，培育新的纯合系。17杂交瘤细胞系的产生是由（脾 B）细胞与（骨髓瘤）细胞杂交产生的，由于（脾细胞）可以利用次黄嘌呤，骨细胞）提供细胞分裂功能，所以能在 HAT 培养基中生长。18随着研究的深入第一代抗体称为（多克隆抗体）第二代（单克隆抗体）第三代（基因工程抗体）。19目前对昆虫病毒的基因工程改造主要集中于杆状病毒，表现在引入（外源毒蛋白基因）（扰乱昆虫正常生活周期的基因）（对病毒基因进行修饰）。 20哺乳类 RNA 聚合酶启动子中常见的元件 TATA、GC、CAAT 所对应的反式作用蛋白 因子分别是（TFIID）（SP-1）和（CTF/NF1）。21RNA 聚合酶的基本转录因子有、TF-A、TF-B、TFII-D、TF-E 他们的结合顺序是：（ D、A、B、E ）。其中 TFII-D 的功能是（与 TATA 盒结合）22与 DNA 结合的转录因子大多以二聚体形式起作用，转录因子与 DNA 结合的功能域常见有以下几种（螺旋-转角-螺旋）（锌指模体）（亮氨酸拉链模体）。23限制性内切酶的切割方式有三种类型分别是（在对称轴5' 侧切割产生5' 粘端 ）（在对称轴3' 侧切割产生3' 粘端（在对称轴处切割产生平段）。 25外源基因表达系统，主要有（大肠杆菌,酵母,昆虫）和（哺乳类细胞表）。26转基因动物常用的方法有：逆转录病毒感染法）DNA 显微注射法）胚胎干细胞法。 三、简 答 1 分别说出 5 种以上 RNA 的功能？ 转运 RNA tRNA 转运氨基酸 核蛋白体 RNA rRNA 核蛋白体组成成 信使 RNA mRNA 蛋白质合成模板 不均一核 RNA hnRNA 成熟 mRNA 的前体 小核 RNA snRNA 参与 hnRNA 的剪接 小胞浆 RNA scRNA/7SL-RNA 蛋白质内质网定位合成的信号识别体的组成成分 反义 RNA anRNA/micRNA 对基因的表达起调节作用 核 酶 Ribozyme RNA 有酶活性的 RNA3对天然质粒的人工构建主要表现在哪些方面？ 天然质粒往往存在着缺陷，因而不适合用作基因工程的载体，必须对之进行改造构建： a、加入合适的选择标记基因，如两个以上，易于用作选择,通常是抗生素基因。 b、增加或减少合适的酶切位点，便于重组。 c、缩短长度，切去不必要的片段，提高导入效率，增加装载量。 d、改变复制子，变严紧为松弛，变少拷贝为多拷贝。 e、根据基因工程的特殊要求加装特殊的基因元件 4举例说明差示筛选组织特异 cDNA 的方法？ 制备两种细胞群体， 目的基因在其中一种细胞中表达或高表达， 在另一种细胞中不表达或低 表达，然后通过杂交对比找到目的基因。 例如：在肿瘤发生和发展过程中，肿瘤细胞会呈现与正常细胞表达水平不同的 mRNA，因 此，可以通过差示杂交筛选出与肿瘤相关的基因。也可利用诱导的方法，筛选出诱导表达的 基因。 5杂交瘤细胞系的产生与筛选？ 脾 B 细胞+骨髓瘤细胞，加聚乙二醇（PEG）促进细胞融合，HAT 培养基中培养（内含次黄 嘌呤、氨基蝶呤、T）生长出来的脾 B-骨髓瘤融合细胞继续扩大培养。 细胞融合物中包含： 脾-脾融合细胞：不能生长，脾细胞不能体外培养。 骨-骨融合细胞：不能利用次黄嘌呤，但可通过第二途 径利用叶酸还原酶合成嘌呤。氨基蝶 呤对叶酸还原酶有抑制作用，因此不能生长。 骨-脾融合细胞：在 HAT 中能生长，脾细胞可以利用次黄嘌呤，骨细胞提供细胞分裂功能。7、激活蛋白（CAP）对转录的正调控作用？ 环腺苷酸（cAMP）受体蛋白 CRP（cAMP receptor protein） ，cAMP 与 CRP 结合后所形成的 复合物称激活蛋白 CAP（cAMPactivated protein ） 。当大肠杆菌生长在缺乏葡萄糖的培养基 中时，CAP 合成量增加，CAP 具有激活乳糖（Lac）等启动子的功能。一些依赖于 CRP 的 启动子缺乏一般启动子所具有的典型的-35 区序列特征（TTGACA） 。因此 RNA 聚合酶难以 与其结合。 CAP 的存在（功能） ：能显著提高酶与启动子结合常数。主要表现以下二方面： CAP 通过改变启动子的构象以及与酶的相互作用帮助酶分子正确定向,以便与-10 区结合， 起到取代-35 区功能的作用。 CAP 还能抑制 RNA 聚合酶与 DNA 中其它位点的结合，从而提高与其特定启动子结合的 概率。 8、典型的 DNA 重组实验通常包括哪些步骤？ a、提取供体生物的目的基因（或称外源基因），酶接连接到另一 DNA 分子上（克隆载体），形成一个新的重组 DNA 分子。b、将这个重组 DNA 分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化。c、对那些吸收了重组 DNA 的受体细胞进行筛选和鉴定。 d、对含有重组 DNA 的细胞进行大量培养，检测外援基因是否表达。 9、基因文库的构建对重组子的筛选举出 3 种方法并简述过程。 抗生素抗性筛选、抗性的插入失活、兰-白斑筛选 或 PCR 筛选、差式筛选、DNA 探针 多数克隆载体均带有抗生素抗性基因（抗氨苄青霉素、四环素）。当质粒转入大肠杆菌中后， 该菌便获得抗性，没有转入的不具有抗性。但不能区分是否已重组。在含有两个抗性基因的载体中，如果外源 DNA 片段插入其中一个基因并导致该基因失活， 就可用两个分别含不同药物的平板对照筛选阳性重组子。如 pUC 质粒含 LacZ 基因（编码 半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物 X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷)产生蓝色，从而 使菌株变蓝。 当外源 DNA 插入后， LacZ 基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。 10、说明通过胚胎干细胞获得转基因动物的基本过程？ 胚胎干细胞（embryonic stem cell,ES） ：是胚胎发育期的胚细胞，可以人工培养增殖并具有分 化成其它类型细胞的功能。 ES 细胞的培养： 分离胚泡的内层细胞团进行培养。ES 在无饲养层中培养时会分化为肌细胞、N 细胞等多种 功能细胞，在含有成纤维细胞中培养时 ES 将保持分化功能。 可以对 ES 进行基因操作，不影响它的分化功能可以定点整合，解决了随机整合的问题。向 胚胎干细胞导入外源基因，然后植入到待孕雌鼠子宫，发育成幼鼠，杂交获得纯合鼠。 分子生物学试题及参考答案 蛋白质的生物合成 (二)问答题 1参与蛋白质生物合成体系的组分有哪些?它们具有什么功能? 2遗传密码是如何破译的? 3遗传密码有什么特点? 4简述三种 RNA 在蛋白质生物合成中的作用。 5简述核糖体的活性中心的二位点模型及三位点模型的内容。 6氨基酸在蛋白质合成过程中是怎样被活化的? 7简述蛋白质生物合成过程。 8蛋白质合成中如何保证其翻译的正确性? 9原核细胞和真核细胞在合成蛋白质的起始过程有什么区别。 10蛋白质合成后的加工修饰有哪些内容? 11蛋白质的高级结构是怎样形成的? 12真核细胞与原核细胞核糖体组成有什么不同?如何证明核糖体是蛋白质的合成场所? 13. 已知一种突变的噬菌体蛋白是由于单个核苷酸插入引起的移码突变的，将正常的蛋白质 和突变体蛋白质用胰蛋白酶消化后，进行指纹图分析。结果发现只有一个肽段的差异，测得 其基酸顺序如下： 正常肽段 Met-Val-Cys-Val-Arg 突变体肽段 Met-Ala-Met-Arg （1）什么核苷酸插入到什么地方导致了氨基酸顺序的改变？ （2）推导出编码正常肽段和突变体肽段的核苷酸序列. 提示：有关氨基酸的简并密码分别为 Val: GUU GUC GUA GUG Arg: CGU CGC CGA CG AGA AGG Cys: UGU UGC Ala: GCU GCC GCA CGC 14. 试列表比较核酸与蛋白质的结构。 15. 试比较原核生物与真核生物的翻译。 (三)填空题 1蛋白质的生物合成是以_为模板，以_为原料直接供体，以 _为合成杨所。 2生物界共有_个密码子，其中_个为氨基酸编码，起始密码 子为_；终止密码子为_、_、_。 3原核生物的起始 tRNA 以_表示，真核生物的起始 tRNA 以_ 表示，延伸中的甲硫氨酰 tRNA 以_表示。 4植物细胞中蛋白质生物合成可在_、_和_三种细胞 器内进行。 5延长因子 T 由 Tu 和 Ts 两个亚基组成，Tu 为对热_蛋白质，Ts 为对热 _蛋白质。 6原核生物中的释放因子有三种，其中 RF-1 识别终止密码子_、 _；RF-2 识别_、_；真核中的释放因子只有_ 一种。 7氨酰-tRNA 合成酶对_和相应的_有高度的选择性。 8原核细胞的起始氨基酸是_，起始氨酰-tRNA 是_。 9原核细胞核糖体的_亚基上的 _协助辨认起始密码子。 l0每形成一个肽键要消耗_个高能磷酸键，但在合成起始时还需多消耗 _个高能磷酸键。 11 肽基转移酶在蛋白质生物合成中的作用是催化_形成和_的水解。 12肽链合成终止时，_进人“A”位，识别出_，同时终止因子使 _的催化作用转变为_。 13 原核生物的核糖体由_小亚基和_大亚基组成， 真核生物核糖体 由_小亚基和_大亚基组成。 14. 蛋白 质中可 进行 磷酸化 修饰 的氨 基酸 残基主要 为 _、 _、 _。 (四)选择题 1蛋白质生物合成的方向是(从 NC 端) 2不能合成蛋白质的细胞器是(高尔基体)3真核生物的延伸因子是(EF 一 1) 4真核生物的释放因子是( RF) 5能与 tRNA 反密码子中的 I 碱基配对的是(U、C、A) 6蛋白质合成所需能量来自(ATP、GTP )7 tRNA 的作用是(把氨基酸带到 mRNA 位置上) 8关于核糖体的移位，叙述正确的是(核糖体沿 mRNA 的 53方向相对移动) 9在蛋白质合成中，下列哪一步不需要消耗高能磷酸键(肽基转移酶形成肽键) 10在真核细胞中肽链合成的终止原因是(终止密码子被终止因子(RF)所识别) 11蛋白质生物合成中的终止密码是(UAA UAGUGA) 12根据摆动假说，当 tRNA 反密码子第 1 位碱基是 I 时，能够识别哪几种密码子(A,C ,U )13下列哪些因子是真核生物蛋白质合成的起始因子(eIF2 eIF4 elF4A )14蛋白质生物合成具有下列哪些特征(氨基酸必须活化 需要消耗能量 每延长一个氨基酸必须经过进位、转肽、移 位、税落四个步骤 新生肽链需加工才能成为活性 蛋白质 )15下列哪些内容属于蛋白质合成后的加工、修饰( )。 切除内含子，连接外显子× 切除信号肽 切除 N-端 Met 形成二硫键 氨的侧链修饰 16蛋白质生物合成过程中，下列哪些步骤需要消耗能量( )。 氨基酸分子的活化 70S 起始复合物的形成 氨酰 tRNA 进入核糖体 A 位 肽键形成× 核糖体移位 17原核生物的肽链延伸过程有下列哪些物质参与( )。 肽基转移酶 鸟苷三磷酸 mRNA 甲酰甲硫氨酰-tRNA× EF-Tu、EF-Ts、 EF-G 18.Shine-Dalgarno 顺序(SD-顺序)是指: ( 在 mRNA 分子的起始码上游 8-13 个核苷酸处的顺序19. 在研究蛋白合成中,可利用嘌呤霉素,这是因为它: (使肽链提前释放 ) 20. 氨基酸活化酶：(每一种酶特异地作用于一种氨基酸及相应的 tRNA )(五)是非题 1DNA 不仅决定遗传性状，而且还直接表现遗传性状。(×) 2密码子在 mRNA 上的阅读方向为 5 3 。3每种氨基酸都有两种以上密码子。(×) 4一种 tRNA 只能识别一种密码子。(×) 5线粒体和叶绿体的核糖体的亚基组成与原核生物类似。线粒体密码子与通用密码子不同 6大肠杆菌的核糖体的小亚基必须在大亚基存在时，才能与 mRNA 结合。(×) 7大肠杆菌的核糖体的大亚基必须在小亚存在时，才能与 mRNA 结合。8在大肠杆菌中，一种氨基酸只对应于一种氨酰-tRNA 合成酶。(×) 9氨基酸活化时，在氨酰-tRNA 合成酶的催化下，由 ATP 供能，消耗个高能磷酸键。10线粒体和叶绿体内的蛋白质生物合成起始与原核生物相同。11每种氨基酸只能有一种特定的 tRNA 与之对应。(×) 12AUG 既可作为 fMet-tRNAf 和 Met-tRNAi 的密码子，又可作为肽链内部 Met 的密 码子。13构成密码子和反密码子的碱基都只是 A、U、C、G。(×) 14核糖体大小亚基的结合和分离与 Mg2+，的浓度有关。15核糖体的活性中心“A”位和“P”位都主要在大亚基上。(×) 16. E.coli 中，DnaA 与复制起始区 DNA 结合，决定复制的起始。二、参考答案 (一)名词解释 1翻译：以 mRNA 为模板，氨酰-tRNA 为原料直接供体，在多种蛋白质因 子和酶的参与下，在核糖体上将 mRNA 分子上的核苷酸顺序表达为有特定氨基酸顺序的蛋 白质的过程。 2密码子：mRNA 中碱基顺序与蛋白质中氨基酸顺序的对应关系是通过密码实现的，mRNA 中每三个相邻的碱基决定一个氨基酸，这三个相邻的碱基称为一个密码子。3密码的简并性：个氨基酸具有两个以上密码子的现象。 4同义密码子：为同种氨基酸编码的各个密码子，称为同义密码 了。 5变偶假说：指反密码子的前两个碱基(3-端)按照标准与密码子 的前两个碱基(5-端)配对，而反密码子中的第三个碱墓则有某种程度的变动，使其有可能 与几种不同的碱基配对。6移码突变：在mRNA 中，若插入或删去一个核苷酸，就会使读码发错误，称为移码，由于移码而造成的突变、称移码突变。7，同功受体：转运同一种氨基酸的几种tRNA称为同功受体。8反密码子：指 tRNA 反密码子环中的三个核苷酸的序列，在蛋白质合成过程中通过碱基配对，识别并结合到 mRNA 的特殊密码上。 9多核糖体：mRNA 同时与若干个核糖体结合形成的念珠状结构，称为多 核糖体。 (二)问答题 1mRNA：蛋白质合成的模板；tRNA：蛋白质合成的氨基酸运载工具；核糖体： 蛋白质合成的场所；辅助因子：(a)起始因子-参与蛋白质合成起始复合物形成；(b)延长 因子-肽链的延伸作用；(c)释放因子一-终止肽链合成并从核糖体上释放出来。 2提示：三个突破性工作 (1)体外翻译系统的建立；(2)核糖体结合技术；(3)核酸的人工合成。 3(1)密码无标点：从起始密码始到终止密码止，需连续阅读，不可中断。增加或删除 某个核苷酸会发生移码突变。 (2)密码不重叠：组成一个密码的三个核苷酸只代表一个氨基酸，只使用一次，不重叠 使用。 (3)密码的简并性：在密码子表中，除 Met、Trp 各对应一个密码外，其余氨基酸均有两 个以上的密码，对保持生物遗传的稳定性具有重要意义。 (4)变偶假说：密码的专一性主要由头两位碱基决定，第三位碱基重要性不大，因此在 与反密码子的相互作用中具有一定的灵活性。 (5)通用性及例外：地球上的一切生物都使用同一套遗传密码，但近年来已发现某些个 别例外现象，如某些哺乳动物线粒体中的 UGA 不是终止密码而是色氨酸密码子。 (6)起始密码子 AUG，同时也代表 Met，终止密码子 UAA、UAG、UGA 使用频率不同。 4(1)mRNA：DNA 的遗传信息通过转录作用传递给 mRNA，mRNA 作为蛋白质合成 模板，传递遗传信息，指导蛋白质合成。 (2)tRNA：蛋白质合成中氨基酸运载工具，tRNA 的反密码子与 mRNA 上的密码子相互 作用，使分子中的遗传信息转换成蛋白质的氨基酸顺序是遗传信息的转换器。 (3)rRNA 核糖体的组分，在形成核糖体的结构和功能上起重要作用，它与核糖体中蛋 白质以及其它辅助因子一起提供了翻译过程所需的全部酶活性。 5(1)二位点模型 A 位：氨酰-tRNA 进入并结合的部位；P 位：起始氨酰-tRNA 或正 在延伸的肽基-tRNA 结合部位，也是无载的 tRNA 从核糖体上离开的部位。(2)三位点模型 大肠杆菌上的 70S 核糖体上除 A 位和 P 位外，还存在第三个结合 tRNA 的位点，称为 E 位， 它特异地结合无负载的 tRNA 及无负载的 tRNA 最后从核糖体上离开的位点。 6催化氨基酸活化的酶称氨酰-tRNA 合成酶，形成氨酰-tRNA，反应分两步进行： (1)活化需 Mg2+和 Mn2+，由 ATP 供能，由合成酶催化，生成氨基酸-AMP-酶复合 物。(2)转移 在合成酶催化下将氨基酸从氨基酸AMP酶复合物上转移到相应的 tRNA 上，形成氨酰-tRNA。 7蛋白质合成可分四个步骤，以大肠杆菌为例： (1)氨基酸的活化：游离的氨基酸必须经过活化以获得能量才能参与蛋白质合成，由氨 酰-tRNA 合成酶催化，消耗 1 分子 ATP，形成氨酰-tRNA。 (2)肽链合成的起始：由起始因子参与，mRNA 与 30S 小亚基、50S 大亚基及起始甲酰 甲硫氨酰-tRNA(fMet-tRNAt)形成 70S 起始复合物，整个过程需 GTP 水解提供能量。 (3)肽链的延长：起始复合物形成后肽链即开始延长。 首先氨酰-tRNA 结合到核糖体的 A 位，然后，由肽酰转移酶催化与 P 位的起始氨基酸或肽酰基形成肽键，tRNAf 或空载 tRNA 仍留在 P 位最后核糖体沿 mRNA53方向移动一个密码子距离，A 位上的延长一个氨基 酸单位的肽酰-tRNA 转移到 P 位，全部过程需延伸因子 EF-Tu、EF-Ts，能量由 GTP 提供。 (4)肽链合成终止，当核糖体移至终止密码 UAA、UAG 或 UGA 时，终止因子 RF-1、 RF-2 识别终止密码，并使肽酰转移酶活性转为水解作用，将 P 位肽酰-tRNA 水解，释放肽 链，合成终止。 8提示：(1)氨基酸与 tRNA 的专一结合，保证了 tRNA 携带正确的氨基酸；(2)携带氨 基酸的 tRNA 对 mRNA 的识别，mRNA 上的密码子与 tRNA 上的反密码子的相互识别，保 证了遗传信息准确无误地转译；(3)起始因子及延长因子的作用，起始因子保证了只有起始 氨酰-tRNA 能进入核糖体 P 位与起始密码子结合， 延伸因子的高度专一性， 保证了起始 tRNA 携带的 fMet 不进入肽链内部；(4)核糖体三位点模型的 E 位与 A 位的相互影响，可以防止不 正确的氨酰-tRNA 进入 A 位，从而提高翻译的正确性；(5)校正作用：氨酰-tRNA 合成酶和 tRNA 的校正作用；对占据核糖体 A 位的氨酰-tRNA 的校对；变异校对即基因内校对与基因 间校对等多种校正作用可以保证翻译的正确。 9(1)起始因子不同：原核为 IF-1，IF-2，IF-2，真核起始因子达十几种。 (2)起始氨酰-tRNA 不同：原核为 fMet-tRNAf，真核 Met-tRNAi (3)核糖体不同：原核为 70S 核粒体，可分为 30S 和 50S 两种亚基，真核为 80S 核糖体， 分 40S 和 60S 两种亚基 10提示：(1)水解修饰；(2)肽键中氨基酸残基侧链的修饰；(3)二硫键的形成；(4)辅基 的连接及亚基的聚合。11提示：蛋白质的高级结构是由氨基酸的顺序决定的，不同的蛋白质有不同的氨基酸 顺序，各自按一定的方式折叠而成该蛋白质的高级结构。折叠是在自然条件下自发进行的，在生理条件下，它是热力学上最稳定的形式，同时离不开环境因素对它的影响。对于具有四 级结构的蛋白质，其亚基可以由一个基因编码的相同肽链组成，也可以由不同肽链组成，不 同肽链可以通过一条肽链加工剪切形成，或由几个不同单顺反子 mRNA 翻译，或由多顺反 子 mRNA 翻译合成。 12 原核细胞： 70S 核糖体由 30S 和 50S 两个亚基组成； 真核细胞： 80S 核糖体由 40S 和 60S 两个亚基组成。利用放射性同位素标记法，通过核糖体的分离证明之。 13. 提示：(1)在正常肽段的第一个 Val 的密码 GUA 的 G 后插入了一个 C ；(2) 正常肽段的 核苷酸序列为：AUG GUA UGC GU CG；突变体肽段的核苷酸序列为：AUG GCU AUG CGU 。15.原核生物与真核生物的翻译比较如下：仅述真核生物的，原核生物与此相反。（1）起始 Met 不需甲酰化；（2） SD 序列.无 但需要一个扫描过程；（3）tRNA 先于 mRNA 与核糖体小亚基结合； （4）.起始因子比较多；（5）.只一个终止释放因子。 (三)填空题 1mRNA 氨酰-tRNA 核糖体 264 61 UAA UAG UGA 3tRNAf tRNAi tRNAm 4核糖体 线粒体 叶绿体 5不稳定 稳定 6UAA UAG UAA UGA RF 7氨基酸 tRNA 8甲酰甲硫氨酸 甲酰甲硫氨酰-tRNA 9小 16SrRNA 104 1 11肽键 肽酰-t