分子生物学思考题.doc

【精品文档】如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流分子生物学思考题.精品文档. 第一章1. 基因：指表达一种蛋白质或功能RNA的遗传物质的基本单位，基因是遗传物质的最小功能单位。2. 分子生物学：是在分子水平研究生命现象的科学，是现代生命科学的共同语言。它的核心内容是通过生物的物质基础-核酸-蛋白质-酶等生物大分子的结构-功能及其相互作用等的研究来阐明生命分子基础，从而探索生命的奥秘。3. 简述遗传学三大基本规律： 一.孟德尔遗传定律：包括分离定律和自由组合定律 分离定律：遗传性状是由遗传因子所控制，遗传因子在体细胞中成对存在，每对遗传因子中，一个来自母方，一个来自父方。一个单位性状由一对遗传因子控制。遗传因子之间存在显隐性关系。形成配子时，两个遗传因子彼此分开，分别随机进入到不同的配子中，配子只含有成对遗传因子中的一个。 自由组合定律：当具有两对或多对相对性状的亲本进行杂交，在子一代产生配子时，在等位基因分离的同时，非同源染色体上的基因表现为自由组合。 连锁互换定律：原来为同一亲本所具有的两个性状，在F2中常常有连系在一起遗传的倾向。4. 列出一种证明DNA是遗传物质的实验证据：肺炎双球菌实验中，在加热杀死的S型菌中存在一种使活的R型菌转变成S型菌的因子，用一系列的化学和酶学方法把提取液中的蛋白质，类脂，多糖，RNA去掉并不影响转化，最后发现只要把纯化的S型菌的DNA加入到R型菌培养液中就足以导致转化的发生，证明DNA是遗传物质。 第二章1. 熟悉DNA的双螺旋结构。2. 什么是DNA的变性和复性，复性的条件是什么？ 变性：在高温，酸碱，某些化学试剂的作用下，双螺旋结构区的氢键断裂，成为单链的过程。 复性：变性单链DNA在适当的条件下，使彼此分开的链自发的重新结合，成为双螺旋结构的过程。 复性的条件：1.盐浓度必须高，足以使两链之间磷酸基团上负电荷的排斥力消失，通常用0.150.5mol/L的Nacl; 2.温度必须适当高，足以防止链内随即形成氢键，复性的最适温度比熔炼温度低2025度。3. 了解加减法测定DNA序列的原理。(p25)4. 蛋白质重要的结构域有哪些？简述螺旋-拐角-螺旋，亮氨酸拉链的结构。 结构域为蛋白质亚基结构中明显分开的紧密球状结构区域。包括：锌指结构，螺旋-拐角-螺旋，螺旋-环-螺旋，亮氨酸拉链等。 螺旋-拐角-螺旋：模体含有4050个氨基酸残基，在两个两性螺旋之间有一个长度可变的连接区。 亮氨酸拉链：是一种重要的蛋白质-蛋白质相互作用的结构域，其每七个氨基酸中的第七个氨基酸是亮氨酸，亮氨酸是疏水性氨基酸，排列在螺旋的一侧，所有带电荷的氨基酸残基排列在另一侧。当两个蛋白质分子平行排列时，亮氨酸之间相互作用形成二聚体，形成拉链。5. 真核生物DNA是如何形成染色体的？DNA包装成染色体需要经过三级压缩，其具体过程是：1。首先组蛋白h1 h2a h2b h3 h4各两个组成盘装八聚体核心，而后1.75圈共146BP DNA缠绕其上，成为核小体颗粒，两个颗粒之间经过60BP连接DNA连接，在出口和入口处再结合组蛋白H1作为稳定结构，经过不断的连接，核小体颗粒形成外径10nm的纤维状串珠，称为核小体串珠纤维，是为染色体一级结构。2.核小体串珠纤维在酶的作用下形成每圈6个核小体，外径30nm的螺旋结构。 是为染色体二级结构3.螺旋结构再次螺旋化，形成超螺旋结构（此处有争议，我看过的书上，人卫版医学细胞生物学同意超螺旋学说，而北大版教材认为3级结构是微带，即曲折化的螺线管），此为3级结构4.超螺线管（或者说微带），形成绊环，即线性的螺线管形成的放射状环。绊环再非组蛋白上缠绕即形成了显微镜下可见的染色体结构。 第三章第一节 DNA的半保留复制：在DNA复制过程中，子代DNA双链中，一条来自亲代，另一条链是新合成的互补链，这种复制方式称为半保留复制。冈崎片段：是在DNA的后随链的不连续合成期间生成的片段。前导链：与复制叉移动的方向一致，通过连续的5-3聚合合成的新的DNA链。后随链：与复制叉移动的方向相反，通过不连续的5-3聚合合成的新的DNA链。又称滞后链。2. 与DNA复制的酶和蛋白质有哪些？ DNA聚合酶，DNA连接酶，拓扑异构酶，DNA解链酶，单链DNA结合蛋白，引物合成酶和RNA酶H,FEN-1，RNase H。3. 简述大肠杆菌中DNA聚合酶和的结构和功能。4. 简述原核生物DNA复制的延伸过程。DNA的复制是一个边解旋边复制的过程。复制开始时，DNA分子首先利用细胞提供的能量，在解旋酶的作用下，把两条螺旋的双链解开，这个过程叫解旋。然后，以解开的每一段母链为模板，以周围环境中的四种脱氧核苷酸为原料，按照碱基配对互补配对原则，在DNA聚合酶的作用下，各自合成与母链互补的一段子链。随着解旋过程的进行，新合成的子链也不断地延伸，同时，每条子链与其母链盘绕成双螺旋结构，从而各形成一个新的DNA分子。这样，复制结束后，一个DNA分子，通过细胞分裂分配到两个子细胞中去。5. DNA复制的忠实性是怎样实现的？ 1.DNA复制过程中碱基配对受到双重核对： 2.DNA聚合酶(DNA pol )对碱基的选择作用 3.3 5外切核酸酶(Klenow片段)的校正作用 4.复制的修复系统（DNA损伤的修复）6. 简述端粒酶的作用机制。端粒酶的RNA部分有一段序列与端粒TG链突出的3-末端互补，二者结合后，端粒酶以自身的RNA为模板，在端粒TG链的3-末端添加脱氧核苷酸，使端粒的TG链延长一小段，随后，端粒酶移动位置，继续加长TG链，直到达到细胞所需要的长度。被延长的TG链可以作为合成冈崎片段的模板，使端粒形成双链也可以通过单链区的回折，合成AC链，随后对末端的发夹结构进行修剪，使端粒形成双链。7. 复制子，转座子的定义。复制子：DNA分子上一个独立的复制单位。转座子：原真核基因组中存在着可以从一个部位转移到另一个部位的DNA序列。这些序列叫做转座子。 第三章第二节1. 紫外线引起的DNA损伤通过哪几种途径修复？答：大致通过四种途径：（1）在损伤部位就地修复光复活；（2）取代损伤部位暗修复或切除修复；（3）越过损伤部位进行修复重组修复；（4）紧急修复SOS修复。2. 简述错配修复和重组修复的过程。答：（1）错配修复 错配修复系统通过Dam甲基化酶来识别母链DNA，根据“保存母链，修正子链”的原则，MutS蛋白识别并结合到错配碱基上，与MutL结合后形成稳定复合物，该复合体与MutH核酸内切酶结合后，未甲基化的DNA链被切开，随后切口到错配位点的这段序列也被切除，最后，由DNA聚合酶3填充这段序列空缺，DNA连接酶连接缺口完成修复。（2）重组修复 又称“复制后修复”。当复制叉遇到受损DNA位点时先停止跳动，暂停之后又继续移动进行复制，结果在新合成的子链中留下一个对着损伤位点的缺口，之后缺口链和另一条子链DNA的同源链发生重组，即从同源DNA母链上将相应核苷酸片段转移至缺口子链的缺口处。3什么是碱基的转换和颠换？答：转换：一种嘧啶替换另一种嘧啶或一种嘌呤替换另一种嘌呤颠换：一种嘧啶被一种嘌呤替换或者一种嘌呤被一种嘧啶替换。4什么是同义突变，误义突变和无义突变？答：同义突变：基因产物的序列不发生改变。误义突变：基因编码的蛋白质中氨基酸被替换，或功能性RNA的序列发生改变。无义突变：一些碱基替换后原来编码某一氨基酸的密码子被一个终止密码替换。5.青霉素筛选突变体技术的原理。答：霉素干扰细菌细胞壁的合成，在培养基中加入青霉素时，野生型细菌因不能合成细胞壁而其他物质均能合成，结果破裂死亡，而突变型细菌由培养基中无亮氨酸不能合成蛋白质，因此不会胀破死亡。 第三章第三节1. 简述Holiday模型的步骤。（p72）2. 参与同源重组的三个酶RuvA，RuvB和RuvC的作用是什么？ RuvA识别Hliday结构的连接点。 RuvB为分支迁移提供动力。 RuvC核算内切酶专一性识别Holiday结构的连接点体外切段连接点以拆分重组体。 第四章1.原核生物和真核生物的启动子的主要差别？真核生物中有三种RNA聚合酶，因此也有三类不同的启动子，其中以RNA聚合酶的启动子最为复杂，它和原核的启动子有很多不同： （1）有多种元件：TATA框，GC框，CATT框，OCT等； （2）结构不恒定。有的有多种框如组蛋白H2B；有的只有TATA框和GC框，如SV40早期转录蛋白； （3）它们的位置、序列、距离和方向都不完全相同； （4）有的有远距离的调控元件存在，如增强子； （5）这些元件常常起到控制转录效率和选择起始位点的作用； （6）不直接和RNA聚合酶结合。转录的起始是先与通用转录因子结合，RNA聚合酶是被通用转录因子招募进来的。2.什么是转录单位，强启动因子，RNA编辑？RNA分子的合成被起始、被延长和被终止的过程叫转录。从转录的起始部位（启动子）到终止部位（终止子）的脱氧核苷酸序列称为转录单位。RNA强启动子(strong promoter)，指对RNA聚合酶有很高亲和力的启动子，它能指导合成大量的mRNA。 是对转录酶有较高的亲和力，可高效启动转录的启动子。编辑是在mRNA水平上发生信息变化的过程，如插入、删除或取代一些核苷酸残基，导致DNA所编码的遗传信息的改变，因为经过编辑的mRNA序列发生了不同于模板DNA的变化。3.何谓SD序列，它有何作用？ 许多原核mRNA起始密码子AUG上游处712个核苷酸处有一小段称为核糖体结合位点（ribosome binding site，RBS）的序列，又可称作SD序列（Shine-Dalgarno sequence，SD）。该序列与16S rRNA的3端的一段序列互补，在核糖体-mRNA的结合过程中发挥作用。54 5端加帽子有什么功能？（1）保护mRNA免受RNase从5端开始的攻击。（2）使mRNA具有可翻译的能力。真核mRNA都要通过识别帽子的帽子结合蛋白，输送到达核糖体进行翻译。如果没有帽子结构，帽子结合蛋白不能结合，mRNA翻译能力就很差。（3）5端帽子有利于成熟的mRNA从细胞核输送到细胞质，只有成熟的mRNA才能进行输送。4.hnRNA转变成成熟RNA的过程包括哪些步骤？5端形成特殊的帽子结构；在链的3端切断并加上多聚腺苷酸尾巴；内含子剪接；链内部核苷酸甲基化修饰。5.I型内含子的剪接包括哪几次转酯反应？第一次转酯反应由游离的G发动，G的3-OH 攻击内含子的5末端，产生G-内含子和外显子的3-OH末端。第二次转酯反应由上一个外显子的3-OH攻击另一个外显子，并与之相连，同时释放线状内含子。游离的线状内含子发生第三次转酯反应而形成环状。6.简述依赖于p因子的转录终止过程:转录可能的模式是，在转录出一小段RNA后，亚基释放出来，核心酶不断延伸，到达终止子位点时，NusA结合在核心酶上，使得核心酶在终止子处长时间地暂停，随后因子结合上去，释放出RNA，转录终止(第四章)7.因子在转录中起什么作用:因子能促使新生的RNA链从转录复合物中解离出来，从而终止转录(第四章)8.终止序列具有哪几个重要的区域: (1)具有一个反向重复顺序，中间是不重复的片段;(2)第二区域是在靠近推测的茎环端(有时全部在茎中)，是一个富含GC区;(3)第三个区(有时不存在)是一个AT序列(可能在茎的开始)，在mRNA中产生一个6-8个尿嘧啶序列。(第四章)9.简述原核生物RNA转录起始的过程：(1)核心酶在亚基参与下与DNA分子接触，形成非专一复合物，这样的复合物是很不稳定的；(2)起始识别：全酶与启动子结合形成封闭的启动子复合物，这时,酶与DNA的外部结合，识别部位大约在启动子的-35位处；(3)活化：得到开放的启动子复合物，酶在-10区紧密与启动子结合，解开双链后识别有义链，形成转录泡。（第四章）9.原核生物启动子包含哪几个重要位点，各有什么作用？10.启动子：RNA聚合酶识别、结合并开始转录所必需的一段DNA序列。不同的启动子都存在保守的共同序列，包括RNA聚合酶识别位点和结合位点。 （1）、-10序列RNA聚合酶的结合，诱导富含AT的Pribnow框的双链解开，然后进一步扩大成17个核苷酸长度的泡状物，在泡状物中RNA聚合酶从模板链开始转录RNA产物。 （2）、-35序列只含-10序列的DNA不能转录，在-10序列上游还有一个保守序列，其中心约在-35位置，称为-35序列，此序列为RNA酶的识别区域。 -35序列的功能：它是原核RNA聚合酶全酶依靠因子的初始识别位点。因此，-35序列对RNA聚合酶全酶有很高的亲和性。-35序列的核苷酸结构，在很大程度上决定了启动子的强度，RNA聚合酶易识别强的启动子。 -35序列提供RNA聚合酶识别信号， -10序列有助于DNA局部双链解开， 启动子结构的不对称性决定了转录的方向。11.RNA合成（转录）的基本特征：1合成RNA的底物是5-三磷酸核苷酸(NTP)，包括ATP、GTP、CTP和UTP，每个NTP的3位和2位碳原子上都有一个-OH。2在RNA聚合酶作用下一个NTP的3-OH和另一个NTP的5-P反应，去掉焦磷酸，形成磷酸酯键。3RNA的碱基顺序由DNA的顺序决定，且依靠NTP与DNA上的碱基配对的亲和力被选择，这一点与DNA复制相同，只是T由U代替。4. 在开始被转录的双链DNA分子的任何一个特定区域都是以单链为模板。5RNA合成的方向是从5-3，单核苷酸只加到3-OH上，RNA链与模板链呈反向平行。与RNA互补的DNA单链被称为模板链（反义链），极性方向和RNA相反。而与RNA分子极性方向相同的被称为非模板链（有义链或编码链），因为从非模板链上可看出RNA分子的序列，并可直接推测出其编码的氨基酸序列，所以称为有义链。6在RNA的合成中不需要引物，它能从头合成RNA (这一点与DNA的合成不同)。 7只有5-三磷酸核苷酸掺入到RNA的合成中，起始转录处的第一个核苷酸是5-三磷酸，其3-OH是下个核甘酸的接触点，这样合成的RNA分子的5-末端具有三磷酸。此外，RNA聚合酶合成几个核苷酸之后，便将正在延长的RNA链从模板上质换下来。这一置换对RNA翻译产生蛋白质和多个RNA聚合酶分子可以一个紧接着另一个同时转录同一个基因是非常关键的。这样，一个细胞就可在短时间内合成同一个基因的大量产物。（第四章） 第五章1.遗传密码的主要特征有哪些？一、密码的连续性(commaless) 二、密码的简并性(degeneracy) 三、密码的摆动性四、密码的通用性(universality)和特殊性(specificity)2.核糖体有哪些功能位点？主要的功能部位包括：mRNA结合位点、A位点（aminoacyl-tRNA site, acceptor site, A site）、P位点(peotidyl tRNA site, P site)、E位点(exit site, E site)、肽酰转移酶(peptidyl transferase)、多肽链离开通道(exit channel，site E)、一些可溶性蛋白因子（起始因子、延伸因子和终止因子）的结合部位。 3.tRNA的种类及功能？（1）起始tRNA和延伸tRNA：能特异地识别mRNA模板上起始密码子的tRNA叫起始tRNA，其他tRNA统称为延伸tRNA。（2）同工受体tRNA：转运同一种氨基酸的不同tRNA称为同工受体tRNA，同工受体tRNA既要有不同的反密码子以识别该氨基酸的各种同义密码，又要有某种结构上的共同性，能被AA- tRNA合成酶识别。（3）校正tRNA：突变了的tRNA，能将一个氨基酸带到一个无义突变位点，使多肽链的合成能够继续完成，或能将一个正确的氨基酸带到一个误义突变位点，使无义突变或误义突变得到矫正，这种tRNA称为校正tRNA。4.大肠杆菌蛋白质生物合成中有哪几种起始因子，各有什么作用？ IF-1因子无专一功能，增加IF-2，IF-3活性 IF-2使fMet-tRNAfMet选择性地与30S亚基结合，许GTP IF-3使30S与mRNA起始部位连接，具解离活性，使亚基保持为解离态5.原核生物翻译的起始过程？第一步： 30S小亚基首先始密码子上游的SD序列发生碱基配对。 第二步：在IF-2和GTP的帮助下，fMet- tRNAfMet进入小亚基的P位，tRNA上的反密码子与mRNA上的起始密码子配对。第三步：带有fMet- tRNAfMet，mRNA，三个起始因子的小亚基复合物与50S大亚基结合，GTP水解，释放起始因子6.延伸因子有哪些，各有什么作用？延伸因子可分为两类：一类是帮助氨酰tRNA(延伸tRNA)进入核糖体与mRNA结合，另一类是使肽基tRNA从核糖体的A位向P位移动。前者有EF-T(包括EF-Tu和EF-Ts，细菌中)和EF-1(真核生物)；后者是EF-G(细菌)和EF-2(真核生物)。教材表5-12列出蛋白质合成中的延伸因子。7.简述肽链延伸过程？1、AA-tRNA的进位2、转肽：形成肽键的反应3、移位（translocation）8.释放因子的种类及作用？释放因子有两类：类释放因子识别终止密码子，并能催化新合成的多肽链从P位点的tRNA中水解释放出来；类释放因子在多肽链释放后，刺激类释放因子从核糖体中解离出来。9.蛋白质翻译后的加工包括哪些过程？1、多肽链的水解切割2、内含肽的切除3、二硫键的形成4、肽链的折叠 第六章1. 简述乳糖操纵子的正、负控制模型。答：1、乳糖操纵子的组成：大肠杆菌乳糖操纵子含Z、Y、A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和半乳糖苷乙酰转移酶，此外还有一个操纵基因、一个启动子和一个调节基因。结构基因能产生一定的酶系统和结构蛋白。操纵基因控制结构基因的转录速度，位于结构基因和启动子之间，本身不能转录成mRNA。启动基因也不能转录成mRNA。调节基因可调节操纵基因的活动，调节基因能转录出mRNA，并合成一种蛋白，称阻遏蛋白或调节蛋白。2. 简述色氨酸操纵子的弱化调节机制。答：在前序列中，除1区与2区互补、2区与3区互补外，3区又和4区互补，这四个区在不同条件下配对情况不同，当培养基中色氨酸的浓度很低时，负载有色氨酸的tRANTrp 也就很少,这样翻译通过两个相邻的色氨酸密码子的速度就会很慢。由于在原核生物中，转录和翻译是偶联的，即mRNA一边转录，核糖体一边集合上去翻译出多肽，在这种情况下，在4区被转录完成时，核糖体才进行到1区，这时的前导链结构区是2-3配对，3-4不形成终止结构，所以转录可继续进行直到将色氨酸操纵子的机构完全转录完。而当培养基色氨酸浓度高时，核糖体可顺利通过两个相邻的色氨酸密码子，在4区被转录前，核糖体就到达2区，这样使2-3不能配对，那么3-4则可以配对形成茎环结构使转录暂时暂停，色氨酸操纵子中的结构基因不被转录，因而不再合成色氨酸。3. 鼠伤寒沙门氏菌的鞭毛蛋白是如何从一相转变为另一相的？答：鼠伤沙门氏菌有两种鞭毛I II这是由两个基因编码的，这两个基因叫做H1和H2。H1基因和其他正常基因一样，单H2基因却和H1基因阻遏蛋白的基因rh1紧密连锁成一个转录单元。当H2基因表达时，rh1也表达，rh1就会抑制H1基因的表达，从而产生II型鞭毛抗原。反之，当H2基因不表达时，rh1基因也不表达，这是H1基因表达产生I型鞭毛抗原。而控制H1-rh1表达的基因位于其上游的一段DNA的排列方向所控制。这一段序列有一端有970bp，有三个特点：可以倒位，带有H2的启动子；带有一个叫做hin的基因，其基因产物可以催化970bp倒位。当启动子序列朝向H2基因是，则H2-rh1转录单元表达，而H1基因不能表达细菌处于II相产生II抗原。当970bp序列倒位后，启动子移向另一边而背离H2基因，因此H2-rh1转录单元不能表达，这是H1基因没有被阻遏，细菌处于I相，细菌产生I型鞭毛抗原。4. 何为稀有密码子,它调节基因表达的可能机制是什么？ 答：由于不同tRNA细胞中含量差异，产生了对密码子的偏爱性，对应的tRNA稀少的密码子叫稀有密码子。稀有密码子利用频率高的基因蛋白质合成较少，可能由于细胞内与稀有密码子对应的tRNA少，这样就延长了核糖体在mRNA上的时间，从而降低了翻译速度。5. 色氨酸操纵子的5个结构基因是量表达的，请说明其调控机制。答：色氨酸操纵子结构：色氨酸操纵子包含操纵基因O，启动子P，及5个结构基因A、B、C、D、E。E与O之间有一段前导序列L。色氨酸操纵子上游存在调节基因R，编码阻遏蛋白。2. 阻遏调控：当培养基中无色氨酸时，R编码的阻遏蛋白不与O结合，结构基因表达催化合成色氨酸的酶。当培养基中有大量色氨酸时，阻遏蛋白与色氨酸结合而改变构象，形成活性阻遏物，与O结合，阻遏结构基因转录。3. 衰减调控：中含有4段特殊序列：序列1编码一个前导肽，前导肽的第10、11位是色氨酸；序列2-3或序列3-4可形成茎环结构。3-4茎环结构是一个转录终止子结构，称为衰减子。当色氨酸缺乏时，前导肽的翻译停滞于色氨酸密码处，序列2-3形成茎环结构，使序列3、4不能形成衰减子结构，结构基因得以完全转录；当色氨酸充足时，核糖体快速翻译前导肽，并对序列2形成约束，使序列3-4形成衰减子结构，下游的结构基因不被转录。 第七章1.名词解释C值悖理：生物体的单倍体基因组所含DNA总量成为C值。这种C值与基因组中所含的遗传信息的认定数量间缺乏对应的现象，被称为C值悖理。N值悖理：基因数目与进化程度或生物复杂性的不对应性，称之为N值悖理。Alu家族：是哺乳动物包括人类基因组中含量最丰富的一种中度重复序列家族。由于每个单位长度中有一个限制性内切酶Alu的切点，因而成为Alu家族。自私DNA：在哺乳动物包括人类基因组中，存在着大量的非编码序列，它们的功能似乎只是自身复制，所以人们称这类DNA为自私DNA或寄生DNA。假基因：在多基因家族中，某些成员并不产生有功能的基因产物，这些基因称为假基因。2.真核基因组有哪些特点？答：1. 体细胞内的基因组为二倍体。 2. 基因组远远大于原核生物的基因组，具有多 复制起点。 3. 基因组中不编码的区域多于编码区域。 4. 大部分基因含有内含子，因此，基因是不连 续的（断裂基因）。 5. 真核细胞基因转录产物为单顺反子。一个结构基因经过转录和翻译生成一个mRNA分子和一条多肽链。 6. 单一序列为主，存在大量重复序列。3.线粒体基因组有哪些性质？答：1所有的基因都位于一个单一的环状DNA分子上 2 遗传物质不为核膜所包被 3 DNA不为蛋白质所压缩4 基因组没有包含那么多非编码区域5 一些密码子与通用密码子不同。相反，与一些紫色非硫细菌相似6一些碱基为两个不同基因的一部分：某碱基作为一个基因的末尾，同时作为下一个基因的开始4.真核生物基因表达调控的种类？答：根据其性质可分为两大类：一是瞬时调控或称为可逆性调控，它相当于原核细胞对环境条件变化所做出的反应。瞬时调控包括某种底物或激素水平升降时，及细胞周期不同阶段中酶活性和浓度的调节。二是发育调控或称不可逆调控，是真核基因调控的精髓部分，它决定了真核细胞生长、分化、发育的全部进程。5.真核基因翻译水平的调控包括哪些内容？答：1、mRNA的结构与翻译；2、翻译起始因子的磷酸化/去磷酸化与翻译；3、翻译延伸过程对蛋白质合成的影响。6.请说明真核基因表达调控和原核的异同点？答：真核生物基因表达调控与原核的共同点有： 1、 基因表达都有转录水平和转录后的调控，且以转录水平调控为最重要；2、在结构基因上游和下游，甚至内部存在有多种调控成分，并依靠特异蛋白因子与这些调控成分的结合与否调控基因的转录。真核生物基因表达调控与原核的不同点有：1、真核基因表达调控的环节更多；转录与翻译间隔进行，具有多种原核生物没有的调控机制；个体发育复杂，具有调控基因特异性表达的机制；2、真核生物活性染色体结构的变化对基因表达具有调控作用；DNA拓扑结构变化、DNA碱基修饰变化、组蛋白变化；3、正调控占主导，且一个真核基因通常有多个调控序列，需要多个激活物。 7.染色质结构对基因表达有什么影响？答： 1. 染色质结构的影响：紧密的染色质结构阻止基因表达；2. 组蛋白的作用与复制和转录时染色质的结构变化密切关联（与DNA的结合由紧变松，DNA才能转录）乙酰化：高乙酰化是活性染色质的标志之一磷酸化：可造成染色质疏松（组蛋白H1和DNA亲和力下降）3. 转录活跃区域对核酸酶作用敏感度增加4. DNA拓扑结构变化8.DNA甲基化的意义？答：DNA甲基化对转录的抑制直接参与发育调控。在个体发育或者细胞分化过程中，将需要保持“沉默”的基因甲基化，需要转录的基因去甲基化。基因的转录水平与DNA甲基化的状况相关，具有活性的基因与失活基因相比较，前者极少被甲基化 第十章1.凝胶电泳分离DNA的基本原理答：由于DNA带有磷酸基团，DNA通常带有负电荷，所以DNA在凝胶中是从负极向正极移动的。由于DNA分子大小不同，小分子DNA在凝胶中移动时受到的阻力要比大分子DNA小，所以电泳结果DNA按其分子大小分布。通过荧光染料将DNA染色，就可以在紫外光照射下观察凝胶上DNA的分布情况。未知分子量大小的DNA通过和已知标准分子量大小的DNA一起凝胶电泳，然后观察比较它们在凝胶上的位置就可以判断未知DNA分子量大小。2.什么是souther印迹？答：就是将样品中混合DNA片段经凝胶电泳分离，被分离出来的DNA片段从凝胶转移到吸附薄膜上并固定，然后用标记的探针进行杂交，以检测目标DNA片段。3.基因工程的具体操作步骤有哪些？答：目的DNA片段的分离制备；目的片段与载体的体外重组；将重组的DNA分子转化到表达系统中；筛选、鉴定重组DNA分子4.基因工程载体必须具备哪些基本条件？答 有自身的复制子，能独立复制 具备多个限制酶的识别位点(多克隆位点) 具有遗传表型或筛选标记 有足够的容量以容纳外源DNA片段。 表达型载体还应具备与宿主细胞相适应的启动 子、前导序列、增强子等调控元件。 载体DNA中均有一段非必需区，将外源基因插入 该非必需区，而载体本身不受影响。