动物微生物细菌病的实验室诊断方法学习教案.ppt

学习(xux)目标 知识目标 掌握细菌病实验室诊断的方法 理解利用各种诊断方法的进行鉴定的意义(yy) 能力目标 具备结合临床病例设计实验室诊断方案的能力第1页/共42页第一页，共43页。主要(zhyo)内容 病料的采集、保存和运送 细菌(xjn)的形态学检查 细菌(xjn)的分离培养 生化试验 动物接种 血清学试验 分子生物学技术第2页/共42页第二页，共43页。重点(zhngdin)与难点 重点 细菌病实验室诊断(zhndun)的方法 难点 设计实验方案 第3页/共42页第三页，共43页。细菌(xjn)(xjn)病的实验室诊断 初诊：根据(gnj)流行病学、症状、病变等方面的疾病特征，做出初步诊断 通过实验室诊断，确定(qudng)病原是否是细菌以及病原菌的类型实验室诊断是在临床诊断的基础上进行的第4页/共42页第四页，共43页。细菌病实验室诊断(zhndun)方法 病料的采集、保存和运送 细菌的形态学检查 细菌的分离培养 生化(shn hu)试验 动物接种 血清学试验 分子生物学技术第5页/共42页第五页，共43页。病料的采集、保存(bocn)(bocn)和运送 病料采集遵循的原则 防止污染 无菌采样 适时采样 适当(shdng)部位 病料采集方法（不同病料不同方法） 实质脏器 液体材料 其他病料 病料的保存和送检第6页/共42页第六页，共43页。防止(fngzh)污染 动物剖检 个人防护和消毒(xio d) 动物尸体处理 废弃物处理第7页/共42页第七页，共43页。动物(dngw)剖检 剖检场所：应选择便于消毒、不渗水的解剖地点，最好(zu ho)有专门的剖检场所和剖检台 。 剖检前，动物尸体应浸泡消毒。第8页/共42页第八页，共43页。个人防护(fngh)和消毒 做好个人防护：剖检过程(guchng)中，注意个人防护。 剖检后的器械浸泡消毒后洗刷。第9页/共42页第九页，共43页。动物尸体焚烧炉深埋（投入消毒药）动物(dngw)尸体处理 焚烧或深埋：剖检后动物尸体(sht)和病料焚烧灭菌或消毒深埋。第10页/共42页第十页，共43页。垃圾直接洗刷处理不当会引起人和动物(dngw)疫病的散播动物(dngw)或人的传染病废弃物处理(chl)第11页/共42页第十一页，共43页。无菌采样(ci yn) 目的 防止病料被污染 方法 所用(su yn)器械和器皿必须灭菌 点燃酒精灯 注意无菌操作第12页/共42页第十二页，共43页。适时(shsh)采样 细菌丰富增殖时期、病料应该新鲜：取濒死动物或刚死亡的动物。 死亡动物采集(cij)病料夏天不宜迟于68h，冬天不迟于24h。第13页/共42页第十三页，共43页。适当(shdng)部位 选择病料的部位可采用两个原则(yunz) 第一原则(yunz)：根据疾病的类型和表现采集病变最典型的部位 第二原则(yunz)：一般采集正常无菌的部位第14页/共42页第十四页，共43页。典型(dinxng)采样心包积液脑部病变第15页/共42页第十五页，共43页。实质(shzh)脏器的采集 剖开体腔后，立即采集，置于无菌容器内。 污染或剖开过久的被检器官：先烧烙表面，然后在烧烙的深部取一块实质脏器，放在灭菌容器内。 如有细菌检验条件，可在剖检后直接做病料的触片染色(rns)和细菌的分离培养。第16页/共42页第十六页，共43页。液体(yt)病料的采集 脓汁、胸水一般用灭菌的棉棒或吸管吸取放入试管内，塞好棉塞送检(sn jin)。 血液可无菌操作从静脉或心脏采血，然后加抗凝剂（每1ml血液加3.8%枸橼酸钠0.1ml）。 若需分离血清，则采血后放在灭菌的容器中，摆成斜面，待血液凝固析出血清后，再将血清吸出，置于另一灭菌试管中送检(sn jin)。第17页/共42页第十七页，共43页。其他(qt)病料的采集 皮肤要取有病变且带有一部分正常皮肤的部位。 被毛或羽毛取病变明显部位，并带毛根放平皿。 胎儿可将流产胎儿送往实验室，也可用吸管或注射器吸取胎儿胃内容物放入试管送检(sn jin)。 肠道及内容物需选择病变最明显的部分，将其中内容物去掉，用灭菌水轻轻冲洗后放平皿内。第18页/共42页第十八页，共43页。细菌性病料的保存(bocn)和送检 低温保存(bocn) 尽快送检 做好记录 畜主姓名、动物种类、地址、发病情况、欲检部位及检验项目、采集时间等第19页/共42页第十九页，共43页。细菌(xjn)的形态学检查 方法 光学显微镜检查( jinch) 电子显微镜检查( jinch) 意义 观察病料中有无细菌以及细菌的形态、数量、分布、结构、种类等，进行初步判断第20页/共42页第二十页，共43页。细菌(xjn)的分离培养 方法：用分区划线法在合适培养基上培养 意义 看培养基中有无细菌生长推断是否为细菌病 依据菌落( jnlu)的特征判断细菌种类 用菌落( jnlu)中的细菌进一步作形态学鉴定 可进一步作生化鉴定、血清学鉴定及动物试验 可进一步作药敏试验第21页/共42页第二十一页，共43页。分离(fnl)培养 通常选用适合目标菌生长的平板培养基对细菌进行分离培养。 不同细菌的菌落大小、形态、色泽、表面特征、边缘状态、隆起度、透明度等特征不同。有的细菌在鲜血琼脂平板上形成溶血环。 也可采用(ciyng)选择培养基或鉴别培养基，以起到抑制杂菌或快速鉴别的效果。 比如肠道杆菌科可选择麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂。第22页/共42页第二十二页，共43页。分区(fn q)划线法第23页/共42页第二十三页，共43页。不同细菌的菌落大小、形态、色泽、表面特征、边缘状态、不同细菌的菌落大小、形态、色泽、表面特征、边缘状态、隆起度、透明度等特征不同隆起度、透明度等特征不同不同(b tn)细菌的菌落第24页/共42页第二十四页，共43页。溶血(rn xu)环有的细菌在鲜血培养基上有-溶血现象第25页/共42页第二十五页，共43页。伊红美蓝培养基、麦康凯培养基上大肠杆菌(d chn n jn)菌落第26页/共42页第二十六页，共43页。细菌的生化(shn hu)试验 进行生化试验的细菌(xjn)必须是纯培养物。 检验时，根据可疑细菌(xjn)的生化特性选择特定的一组生化试验，将结果与标准进行对比，以确定病原菌的种类。 例：不同种沙门氏菌的生化鉴定第27页/共42页第二十七页，共43页。鸡白痢沙门氏菌鸡伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌不同(b tn)种沙门氏菌的生化鉴定第28页/共42页第二十八页，共43页。 意义 将待检细菌液接种到动物(dngw)体内，观察动物(dngw)发病情况，进一步确认可疑细菌的致病作用和类型。 接种对象 本动物(dngw) 试验动物(dngw) 接种途径动物(dngw)接种第29页/共42页第二十九页，共43页。灌口肌肉注射腹腔注射皮下注射脑内接种静脉注射常用的动物(dngw)接种途径第30页/共42页第三十页，共43页。血清学试验(shyn) 临床诊断中，可用于细菌的血清分型、快速诊断或大群检疫。 用已知抗体检测动物(dngw)体内的病原菌 用已知的病原菌抗原检测动物(dngw)血清中的抗体 例：鸡白痢的检疫第31页/共42页第三十一页，共43页。1、加一滴(y d)抗原2、加一滴(y d)鸡的全血3、将抗原(kngyun)和血液混匀4、静置2min,观察结果鸡白痢检疫全血平板凝集试验第32页/共42页第三十二页，共43页。鸡白痢(bil)(bil)检疫结果第33页/共42页第三十三页，共43页。分子生物学方法(fngf) 分子生物学技术对病原菌的快速诊断和不能人工培养的细菌的探索发挥(fhu)巨大的作用。 PCR技术、核酸分子杂交技术等。第34页/共42页第三十四页，共43页。大肠杆菌(d chn n jn)病实验室诊断方案病料中细菌(xjn)(xjn)的形态学检查病料中细菌(xjn)(xjn)的分离培养1818小时后动物致病性试验涂片革兰氏染色生化试验H2SH2S试验糖发酵试验MRMR试验1010日龄小鸡，皮下注射0.2ml/0.2ml/只病料纯培养第35页/共42页第三十五页，共43页。大肠杆菌病实验室诊断(zhndun)结果 剖检（采集病料） 纤维素渗出物的涂片染色 分离培养(piyng)（麦康凯或伊红美蓝琼脂平板） 培养(piyng)物涂片革兰氏染色 生化试验 动物接种试验第36页/共42页第三十六页，共43页。大肠杆菌病纤维(xinwi)渗出物中的细菌第37页/共42页第三十七页，共43页。伊红美蓝培养基、麦康凯培养基上大肠杆菌(d chn n jn)菌落第38页/共42页第三十八页，共43页。大肠杆菌(d chn n jn)培养物涂片革兰氏染色第39页/共42页第三十九页，共43页。大肠杆菌(d chn n jn)生化特性第40页/共42页第四十页，共43页。谢谢！第41页/共42页第四十一页，共43页。感谢您的观看(gunkn)！第42页/共42页第四十二页，共43页。NoImage内容(nirng)总结学习目标。做好个人防护：剖检过程中，注意个人防护。焚烧或深埋：剖检后动物尸体和病料焚烧灭菌或消毒深埋。细菌丰富增殖时期、病料应该新鲜：取濒死动物或刚死亡的动物。血液可无菌操作从静脉或心脏采血，然后加抗凝剂（每1ml血液加3.8%枸橼酸钠0.1ml）。可进一步作生化鉴定、血清学鉴定及动物试验。也可采用选择培养基或鉴别培养基，以起到抑制杂菌或快速鉴别的效果。比如肠道杆菌(gnjn)科可选择麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂。感谢您的观看第四十三页，共43页。