李博毕业论文22.doc

【精品文档】如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流李博毕业论文22.精品文档.外源性金属硫蛋白对中国荷斯坦奶牛的血清和奶中 MT含量的影响1 前言 金属硫蛋白(metallothionein)是由微生物和动植物产生的金属结合蛋白，富含半胱氨酸的短肽，对多种重金属有高度亲和性。它是分子质量较低，半胱氨酸残基和金属含量极高的蛋白质。与其结合的金属主要是镉、铜和锌，广泛地存在于从微生物到人类各种生物中，其结构高度保守。它广泛存在于人体、动物、植物以及微生物体内,且理化性质基本一致。它可被不良刺激、金属、激素等诱导合成。近年来随着越来越多的金属硫蛋白基因被克隆及金属硫蛋白分离纯化技术的改进,对金属硫蛋白的研究日益深入,很多实验表明,金属硫蛋白参与体内微量元素的储存、转运和代谢,拮抗电离辐射,清除自由基以及对重金属的解毒作用,还与机体生长发育、延缓衰老及某些疾病有关。目前,动物金属硫蛋白由于发现较早,研究深入,而植物金属硫蛋白发现相对较晚,进展缓慢。中国荷斯坦奶牛由中国黄牛的与当时引进我国的荷斯坦牛杂交，经过19701980年的不断选育，而逐渐形成的。1.1 MT的诞生及发展状况 1957年Margoshes和Vallee在研究金属生物学作用时，从动物器官分离出一种新的蛋白质，它含有丰富的巯基，能螯合大量的金属离子，此物质称为金属硫蛋白（英文为Metallothionein，简称MT）。人体、动物、植物以及微生物体内均含MT，而且其理化特性基本一致。MT分子呈椭圆形，分子量为6500道尔顿，直径3050，分两个结构域，每个分子含712个金属原子，具有特殊的光吸收。MT构象较坚固，具有较强的耐热性。自从MT被发现以来，它成为基础科学研究的热点之一。从1978年到1999年共举行了四次国际专题研讨会，并且明年将在我国举行MT的第五次国际会议。我国将MT列入863重大攻关计划，1995年列入国家级火炬计划。同时各国科学家也在努力开发MT的新用途，大量的科学实验和临床结果表明：MT在抗电离辐射、紫外线照射、解除金属毒素、治疗消化道溃疡、心肌梗塞、各种炎症、各种癌症、美容护肤、减轻吸烟及环境污染对人体的危害及抗过敏等方面均有显著疗效1。1.2 MT的研究目的和意义国内外有关MT在畜禽尤其是经济动物的理论和应用研究还很少。这与多种因素有关: 金属硫蛋白的价格较贵; 生产量还有限; 在畜禽和经济动物体内的代谢规律、代谢途径和生理作用的研究还不够深入。但以实验动物为对象, 金属硫蛋白的作用及其作用机制已进行了大量的研究, 尤其是有关金属硫蛋白在各种应激因子作用下, 其抗氧化、抗应激和增强机体免疫力的作用研究。长期以来，氧化应激一直是困扰奶牛饲养业的一大难题。鉴于由奶牛生物学特性决定的应激敏感性以及奶和奶制品抗氧化的重要性，探索减少或缓解奶牛氧化应激的途径一直是奶牛饲养业的重大课题之一。MT作为一种天然生理活性物质和高效抗氧化剂，其研究和应用为提高奶牛抗氧化应激能力带来了新的希望。动物应激是多种直接影响机体健康和正常生产的多种激素反应因素综合，主要体现在对神经内分泌的影响。本项目拟研究外源性金属硫蛋白通过静脉注射之后对奶牛血清和奶中MT含量的影响，来探索金属硫蛋白在奶牛体内的存留时间和持续作用时间效应与剂量效应的关系。在金属硫蛋白在经济动物和畜禽的系统研究中, 将有助于解决平衡家畜的新陈代谢、增强家畜免疫力和抗应激能力、提高家畜的健康水平和生产性能、改善畜产品的质量等重大问题, 为促进养殖业可持续发展提供科学依据。1.3 MT生物学功能1.3.1抗肿瘤 MT抗肿瘤主要是通过参与肿瘤细胞的分化、 增生及凋亡和提高机体的免疫功能来完成的。MT 受体(MTS)存在于细胞的胞质、细胞核中，当细胞受到致癌物质的刺激后，MT基因迅速进行表达，抑制细胞凋亡。有研究发现，将细胞暴露在抗癌药物中，提高MTS的表达量可以诱导细胞产生抗凋亡作用，而在缺乏MTS的细胞中，细胞的死亡率显著高。另外，MT还可以通过影响机体的免疫功能、 提高免疫细胞和免疫因子的活性，从而增f机体对癌细胞的杀灭作用。赵红光等观察含MT蛋奶粉对一荷瘤小鼠肝癌有无治疗作用，结果表明，小鼠形成肝癌第27、29及31天，添加了MT奶粉组的胂瘤体. 积变小，增加了淋巴细胞刺激指数、CD4+细胞百分率及CD47CD8+;降低了小鼠淋巴细胞Go/Q期细胞百分率和淋巴细胞凋亡百分率，提高小鼠脾脏CTL 细胞毒活性和NK细胞毒活性,增加了荷瘤小鼠的 IL-2和TNF-a活性，表明含MT蛋奶粉对肿瘤的治 疗性效应可能是通过增强荷瘤小鼠的免疫功能实现的陈伟强（2006）等研究表明，MT蛋白的表达与肺癌的分化程度，Ki-67及凋亡显著相关，MT可作为判断肺癌细胞分化程度、增殖活性及凋亡等的指标2。1.3.2抗氧化正常情况下，动物机体产生的自由基可以参与细胞内的化学反应，但是过多的自由基能够损害机体内的生物活性物质，从而产生机体衰老、组织损伤、免疫力下降等。一般情况下，机体可产生自由基和清除自由基以达到平衡。但是，会因为重金属中毒、应激、辐射、疾病等因素导致机体自由基增多，影响机体的健康。MT含有大量的巯基基团，还原状态的巯,具有亲核性，其中的金属具有动力 学不稳定性，这使得MT对羟基自由基（·OH)、超氧自由基(·O2-)或一氧化氮(NO·)等自由基具有较强的清除作用。有研究表明，MT清除自由基的能力比谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和超氧化物歧化酶(SOD)强。另外，MT还能够通过影响机体一些氧化酶的活性，来提高机体对组织器官的保护作用。李树田（2006）等研究发现，植物提取的MT能够增强镉中毒小鼠血液SOD活性和GSH-PX活力，降低丙二醛 (MDA)含量，而且存在显著的交互作用。李忠义（2009）等发现，转金属硫蛋白基因平菇可改善辐射对小鼠血小板(PLT)和脾脏的损伤；增强受辐射小鼠血清SOD活性，降低其血清MDA含量。刘云华(2004)等研究发现，MT可抑制阿霉素(DOX)致氧自由基产生增加及还原型谷胱甘肽(GSH)耗竭，降低D0X对心脏的毒性2。 MT抗电离辐射引起的氧化损伤、MT抗糖尿病高血糖引起的氧化损伤、抗过氧化亚硝酸盐(ONOO)引起的氧化损伤。MT作为一种有效的抗氧化剂能被多种因素如氧化应激、细胞因子和电离辐射等诱导。许多实验研究表明MT在体外是一种作用较强的抗氧化剂能有效地抑制ROS和RNS对中枢神经系统、心血管系统及视网膜病变细胞的氧化损伤作用。但是由于实验方法和取材的不同MT在体内的抗氧化损伤作用尚存争议3。1.3.3抗应激 机体在应激的情况下，能够诱导MT的表达， 提高机体的抗应激能力。,补充外源性MT也能够降低应激的发生，缓解应激带来的危害。赵鹏（2011）等观察抗氧化剂MT对糖尿病大鼠肾脏氧化应激指标及NADPH氧化酶的影响，结果表明，MT可能通过降低糖尿病大鼠肾脏氧化应激水平，抑制肾皮质 PKC-/3、血管紧张素原(ANG)以及NADPH氧化酶亚基的表达，发挥肾脏保护作用4。印遇龙（2004）等在猪肌肉注射MT后快速追赶使其产生应激，结果表明，金属硫蛋白能提高应激猪体内抗氧化酶的活性，从而对应激造成的细胞损伤起到保护作用4。1.3.4解毒作用 MT含有高达30%的半胱氨酸，半胱氨酸中的巯基(.SH)能迅速螯合有毒金属汞、银、铅、镉、 砷等。因此，MT是目前临床上最为理想的生物螯合解毒剂。秋水仙碱对动物的肝有一定的损伤作用，还可以干扰细胞微管功能。研究发现，秋水仙碱可以诱导肝合成MT，MT的存在和增加有助于MT(+/+)小鼠颉颃秋水仙碱对小鼠肝的损伤作用22。 诸熙2011等研究发现，MT对极性贫油中毒大鼠具有解毒的作用，但是预防性给予ZnSO4导产生内源性金属硫蛋白，能更好发挥对贫铀中毒的解毒效果。 张洁(2011)等研究金属硫蛋白基因在长期水砷暴露小鼠肝组织中的表达，发现MT表达的降低可能是亚砷酸钠肝毒性的一个易感因素。肖定福2009等研究结果发现，灌喂HgCl2大鼠肾中的Hg-MT诱导量显著增加，说明MT在染汞大鼠肾脏中起着对汞的解毒作用。有研究发现，染镉后，低剂量的镉诱导血管中MT的产生，MT对氧化损伤起保护作用。李南平2008等给儿童服用MT 23个月效果显著，未见不良反应，随着血铅水平的下降，腹痛及伴随症状消失，结果证明，应用MT治疗儿童铅中毒是一种既安全又有效的新型预防和干预手段22。1.4 MT的应用与测定 由于金属硫蛋白具有广泛而重要的生理学和生物学功能,所以引起国内外学者的广泛重视, 并对实验动物和人的金属硫蛋白进行了广泛而深入的研究。在弄清金属硫蛋白结构、特征和功能的基础上, 将MT用于医学、医药和保健已取得长足的进展。目前国内外正开发利用MT保健品和药品来调控人体新陈代谢、提高人体免疫力、缓解应激和延缓衰老。将金属硫蛋白作为食品添加剂的研究正在进行。 它有望成为一种集营养、生理调控和抗氧化为一体的新型食品添加剂。在肿瘤的预防和治疗中, 金属硫蛋白可保护细胞抵抗重金属和烷化剂的致癌、致突变作用， 因而用于肿瘤临床的辅助治疗和用作肿瘤标志物。金属硫蛋白也用于美容化妆品中。金属硫蛋白的作用显示了它具有广阔的应用前景。研究发现，MT 与生物体内的多种功能相关，主要有转运、储存金属离子、清除自由基、激活( 失活) 锌调节蛋白等，其中最基本、最主要的功能是与金属离子相结合，从而解除或降低生物生活环境中的重金属毒害作用，然而到目前为止，MT 的诸多功能的作用机理仍不清楚。 降低或解除重金属的毒害作用，提高生物的耐性解除重金属的毒害作用，提高生物的重金属耐性是MT 最主要的功能，也是生物学家们一直研究的重点和热点。在MT 的结构域上含7个以上的半胱氨酸残基重金属结合位点，通过替换或直接结合金属离子，从而起到降低细胞内金属离子含量的作用，据研究发现MT 可以与18 种金属离子相结合。 维持生物体内微量元素的动态平衡在细胞内金属离子与MT结合后储存在液泡中，当生长环境或机体改变时，这些金属离子可以通过交换的形式重新释放出来。Hall等认为细胞内的多种机制促成了金属离子的动态平衡，而MT的螯合作用就是其中最主要的一种。 清除生物体内的自由基自由基是机体氧化反应中产生的具有强氧化性的化合物，可损害机体的组织和细胞，进而引起慢性疾病及衰老等生理现象，常见的自由基，如羟基自由基、氧自由基。虽然MT清除自由基的机制仍不清楚，但是和谷胱甘肽一样，其还原状态的巯基被公认为是最有效的细胞内的自由基清除物质，保护着细胞器及其他重要的生化物质，如一些酶类、DNA等。此外，MT还通过结合或释放金属离子来调节自由基的水平。有研究发现，MT的表达可以被射线激发的超氧化物或巯基自由基所诱导，据此推测，MT可能作为供体为细胞的修复提供锌。 测定方法一般应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中牛金属硫蛋白水平。用纯化的抗体包被微孔板制成固相抗体往包被单抗的微孔中依次加入牛金属硫蛋白抗原、生物素化的抗牛金属硫蛋白抗体、HRP标记的亲和素经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的牛金属硫蛋白呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度OD值计算样品浓度。1.5 MT的理化性质 MT是一类低分子量、富含半胱氨酸(CYS)的金属结合蛋白质。1957年Margo和Vale首次在马肾中发现并分离出MT，以后发现MT广泛存在于各种生物体中，1985年第2届国际MT会议提出，被确认为MT的多肽具有以下几个与马肾MT相似的性质：分子量低 (通常少于10000 Da)，金属含量高(通常412个金属离子分子)，半胱氨酸含量高(有丰富的CYSXCys3肽序列结构域)，缺乏芳香族氨基酸，组氨酸含量极少。到1997年第4届国际MT会议止，共发现并确定氨基酸序列的MT有170多种。虽然MT分子中含有大量巯基，但分子内、分子间均不存在二硫键，在自然条件下，所有CYS的巯基均与金属结合翻。并且可以与多种金属离子结合，结合的稳定常数一般较大。但不同MT的解离常数因所含金属不同而异，MT的光吸收也与其所结合的金属种类有关，据此可鉴定不同的MT。1.6 中国荷斯坦奶牛的基本特性 中国荷斯坦奶牛（1997年以前称中国黑白花奶牛）是19世纪末期，由中国的黄牛与当时引进我国的荷斯坦牛杂交，经过19701980年的不断选育，而逐渐形成的。中国荷斯坦奶牛体格健壮，结构匀称。毛色呈黑白花，花片分明。中国荷斯坦牛的原名为“中国黑白花奶牛”，于1992年更名“中国荷斯坦奶牛”。中国荷斯坦牛，因受荷兰兼用荷斯坦牛的影响，近似兼用型。毛色一般为黑白相间，花层分明，额部多有白班 ；腹底部，四肢膝关节以下及尾端多呈白色，体质细致结实、体躯结构匀称，泌乳系统发育良好，蹄质坚实。母牛腹大而不下垂，胸部发育良好，乳头大小适中、分布均匀，乳静脉大而弯曲，乳井大而深。母牛泌乳性良好，泌乳期270305天，产奶量在450010000公斤，乳脂率3.5%。肉用价值高，淘汰母牛屠宰率49.7%，净肉率40.8%；营养良好的淘汰公牛，屠宰率可达58.1%，净肉率50.1%。繁殖性能良好，产后发情为53天，发情周期21.2天，怀孕期280天。遗传稳定、适应性强，我国大部分地区均可饲养。1.6.1 影响奶牛产奶性能的因素遗传：不同品种奶牛产奶量和乳脂率有很大差异。经过高度培育的品种，其产奶量显著高于地方品种。产奶量和乳脂率之问存在着负相关，产奶量较高的品种，其乳脂率相应较低，但通过有计划的选育，乳脂率也可提高。同一品种不同个体，其产奶量和乳脂率也有差异，如黑白花牛的产奶量变异范围为3 00012 000千克，乳脂率2.66.0。一般来说，体重大的个体其绝对产奶量比体重小的要高。通常情况下，体重在550650千克为宜。生理：初产乳牛的年龄在2岁左右，由于本身尚在发育阶段，其产奶量较低，但随着年龄和胎次的增加，产奶量逐渐增加；到69岁，第47胎时，产奶量达到一生中的高峰；10岁以后，由于机体逐渐衰老，产奶量又逐渐下降；饲养良好，体质健壮的母牛，年龄到1314岁时，仍然维持较高的泌乳水平。相反，饲养不良，体质衰弱的母牛，78岁以后，产奶量就开始逐渐下降。分娩后，日产乳量逐渐上升，从第1个泌乳月未到第2个泌乳月中达到该泌乳期的最高峰，维持一段时间后，在第4个泌乳月开始，又逐渐下降，至第7个泌乳月之后，迅速下降，到第10个泌乳月左右停止泌乳，全期每日产乳量形成一个动态曲线，称为“泌乳曲线”。该曲线反映了乳牛泌乳的一般规律。在同一牛群中，虽然环境条件相对一致，但因个体遗传素质有差异，所以，泌乳曲线也出现三种类型：第一类是高度稳定型，其逐月泌乳量的下降速率平均维持在6以内，这类个体具有优异的育种价值；第二类是比较平稳型，其逐月泌乳量的下降速率为67，这类个体在牛群中较为常见，全泌乳期产乳量高，因此，可以选入育种核心群；第三类是急剧下降型，其逐月泌乳量下降的速率平均在8以上，这类个体产乳量低，泌乳期不宜留做种用。初乳期内的乳脂率很高，几乎超过常乳的l倍。第28个星期，乳脂率最低，第3个泌乳月开始，乳脂率又逐渐上升。母牛干乳期一般为5060天，其长短应根据每头母牛的具体情况决定。5岁以上的母牛，干乳期为4060天，其营养条件能得到保证，对下胎产乳量影响较小。母牛发情期间，由于性激素的作用，产乳量会出现暂时性的下降，其下降幅度约为1012，乳脂率略有上升；母牛妊娠初期对产乳量影响极微，从妊娠第5个月开始，由于胎盘分泌动情素(雌激素)和助孕素(黄体素)对泌乳起了抑制用，泌乳量显著下降，第8个月则迅速下降，以致干乳。3环境泌乳母牛日粮中应给予多量的青绿多汁和青贮饲料，根据泌乳母牛的营养需要实行全价饲养。适当的运动，经常刷拭牛体，牛舍内保持通风良好，清洁干燥，合理安排工人日程，定期进行预防检疫工作，对提高产乳量有良好的作用。一昼夜产乳量在15千克以下的乳牛，可采用2次挤乳；15千克以上的乳牛，特别是高产乳牛，则应采用3次挤乳。挤乳前用热水擦洗和按摩乳房，能提高产乳量和乳脂率。母牛最适宜的产犊季节是冬季和春季。因为母牛在分娩后的泌乳盛期，恰好在青绿饲料丰富和气候温和的季节。此期母牛体内催乳素分泌旺盛，有利于产乳量的提高。黑白花奶牛对温度的适应范围是220，最适宜的气温是1016。外界气温升高到40时，呼吸频率加快5倍，且采食停止，产乳量显著下降。相对而言，乳牛怕热不怕冷，黑白花奶牛在外界气温1320时，产乳量才开始下降。冬季保证供应足够的青贮料和多汁料，多喂些蛋白质饲料，一般对产乳量不会有很大影响。1.6.2中国荷斯坦奶牛与热应激中国荷斯坦奶牛分布在4040的气温条件下，由于各地的饲料种类、饲养管理和环境条件的差异很大，因此，在各地的表现也各有不同，据初步测定，中国荷斯坦奶牛在高温条件下的适应性能较差。但气温降至零度以下，产乳量则无明显变化。奶牛热应激既为奶牛热应激综合征，是奶牛受到超过本身体温调节能力的过高温度刺激时，作用于垂体肾上腺皮质系统，所引起的机体非特异性防御反应和特异性障碍在内的全身性适应症。中国荷斯坦丁奶牛不耐热，极易出现热应激症状。由于在热带和亚热带地区普遍存在热应激。目前，大多研究报道为环境温度对奶牛热应激的影响。如环境温度超过25 时，奶牛呼吸频率可达5060次/min。当环境温度从25 升到28.6 时，奶牛标准产奶量下降25.3%。69月重庆市奶牛产奶量下降25.6%33.5%等。影响家畜热平衡的环境因素较多复杂，除气温外，还有气湿、气流和辐射等多种因素。温湿指数（THI）是结合气温和气湿来综合评价炎热程度的一个指标，最初用于判断人在温热环境下的舒适程度，后被应用于牛。Ingraham等认为THI小于72，对奶牛无应激，7278对奶牛会产生轻微热应激，7989对奶牛会产生中度热应激，90 以上时，会产生严重热应激。虽然THI没有考虑辐射、气流、产奶量、营养水平等因素的影响，不能精确表示机体的热负荷状况，但仍然较好地表达了在温湿环境中奶牛热应激程度的大小。2 材料和方法2.1试验材料所有受试奶牛采用相同的饲粮喂养，试验日配方成及营养水平见表1，奶牛营养需要标准参照NRC (2001)和(中国奶牛饲养标准)(2000)2.1.1 主要仪器及试剂 x放射免疫计数器:科大创新股份有限公司中佳分公司生产，型号为GC-400型。 离心机:飞鸽牌离心机，TDL-5000B 酶标仪:ELECTRON CORPORATION MULTISKAN MK3 自动化挤奶系统:West Surge Dairy Plan C21 自动化乳成分检测仪:N.FOSS LIECTRIC DENMARK生产，Milko-Scan 134A/82.1.2 试验动物日粮表1试验动物日粮配比日粮配方组成粗饲料组成粗料使用量及日粮营养水平精料配比(%)稻草（kg）10玉米56象草（kg）20麦麸13产奶净能(MJ/kg)6.19豆粕9奶牛能量单位(NND/kg)2.4棉粕8粗蛋白(%)16菜粕5钙(%)0.7酵母粉5磷(%)0.45磷酸氢钙1石粉1食盐1碳酸氢钠12.2试验动物的分组与处理本试验在湖南省奶牛原种场进行，预饲期为7天，正试期为45天。试验牛的选择与分组采用随机区组试验设计的方法，根据不同产奶量和生理时期均分为4组，A为对照组，B、C、D为试验组，依次静脉注射20mL生理盐水溶解的Zn-MT0.0（对照），6.0，12.0和18.0mg/头。每日挤奶2次，喂料2次，刷拭体表1次，清扫牛舍2次。自由舔食盐砖及饮水，舍外运动场自由活动。采样：在试验期的第1 (注射MT 前) 、15、30 和45d 分别从供试牛颈静脉采血。采血10ml/头·次，常温下静置20min，后4下离心（4000r×10min），取血清，分装，-20保存待测。另外，各个试验阶段每头分别抽取5ml 奶样，用EDTA(1.5mg/ml)防腐，于4保存待测。2.3 ELISA法ELISA法定量测定牛血清、血浆或其它相关液体中金属硫蛋白MT含量。2.3.1 ELISA的步骤( 1) 包被: 加含一抗的包被液100L, 4包被过夜。洗涤4 次。( 2) 封闭: 每孔加封闭液200L, 37封闭2h。洗涤4次。( 3) 加抗原: 将待测样品于每孔中加入100L, 37反应23h。洗涤4 次。( 4) 加酶标二抗: 加稀释好的辣根过氧化酶标记的羊抗鼠二抗( sigma 公司) 100L/ 孔, 37反应2h。洗涤4 次。( 5) 加底物: 加TMB 底物100L/ 孔, 37反应2030min。( 6) 加终止液: 加2moL/ L 的H2SO4 50L。( 7) 在酶标仪450nm 波长读数11。( 8) 根据标准曲线计算出MT 含量。 2.3.2 ELISA公式血清和奶中MT 采用间接竞争型ELISA 定量分析方法 所用仪器系 TECAN 公司生产的 TECA-NA-5082 型酶联免疫分析仪。标准曲线的回归方程为：Y = 19.704x 2 + 0.094 6x - 0.1267，R 2 = 0.9991(Y表示MT的含量，单位为ng/mL、x表示OD值)。数据处理与统计分析 数据均以平均数±标准差表示。采用 SAS6.12 统计软件(GLM 过程)进行方差分析，用 Duncan 统计方法进行多重比较以检验组间差异显著性，检验误差为5和1水平。3 结果与分析3.1外源性MT对奶牛血清和奶中MT含量的影响 表2 各组奶牛血清和奶中MT的含量 ng/mL 样品时间（d）A组B组C组D组血清11.94±0.37aA1.94±0.68aA1.94±0.41bA1.93±0.55aA151.86±0.62aA2.12±0.40aA2.20±0.28abA2.14±0.64aA301.51±0.25aB1.89±0.72aAB2.28±0.33aA2.35±0.23aA451.53±0.10aB1.89±0.43aAB2.03±0.22abA2.11±0.27aA牛奶12.11±0.68aA2.20±0.20bA2.34±0.84bA2.23±0.55bA152.13±0.82aC2.67±0.56aCB4.81±0.94aA3.23±0.85aB302.12±0.62aA2.09±0.08bA2.25±0.80bA2.63±0.76abA注：同一组相同小写字母表示差异不显著（0.05），相邻字母如、或、表示差异显著（0.05），不相邻字母如、表示差异极显著（0.01）。同一时间段相同大写字母表示差异不显著（0.05），相邻字母如、或、表示差异显著（0.05），不相邻字母如、表示差异极显著（0.01）。下同。从表2中可以看出，当同列时A组无显著性差异，当同行时A组与C组有极显著性差异。外源性MT 对血清中的MT 含量的有影响。牛血清和奶中MT 的含量、作用时效均与MT 使用剂量呈正向关系，MT 使用剂量越大，牛血清和奶中MT含量越高，作用时效也越长。从表3、4中可以看出，注射MT后，B、C和D各组试验牛血清和乳中的 MT 含量均高于对照组。15d 时，各试验牛血清中的 MT 含量，虽比 A 组高，但无显著性差异 (P>0.05)，但从30d 后，各试验组MT 含量均显著高于对照组 (P<0.05)，其中，C 组和D 组较A 组极显著增加(P<0.01)。同样，牛乳中MT含量以C 组1630d 时最高，极显著高于其它各组各阶段(P<0.01)。图1 各组奶牛血清中MT含量外源性MT 对血清中的MT 含量的有影响, 可以看出当时间段在30天左右时，C组的MT含量明显增高，这就说明此时MT含量呈极显著性提高，用P<0.01表示。图2 各组奶牛奶中MT含量4 讨论与结论4.1 讨论奶牛具有耐寒怕热的生物学特性，当环境温度超过15.6时就会影响奶牛的呼吸频率，超过21.1时，奶牛的直肠温度也将受到影响，本试验环境温度均在833，时间是911月，刚经过高温季节，可以确定奶牛处于高热应激与非热应激的过渡状态，其体内产能性能和内分泌均有不同程度的变动。激素是动物体内的第一信使，具有级联放大作用，其微量变化都可引起机体代谢发生较大调整，因此MT通过调控动物体内激素含量来发挥功能无疑能起到事半功倍的效果。4.2 结论通过此次对泌乳盛期和泌乳中期的奶牛进行试验表明，本课题组自提的MT经颈静脉注射的途径给予健康的泌乳奶牛，能够对奶牛的内分泌产生调节作用，并提高奶牛的4%标准乳产量和奶乳的品质。参 考 文 献1吴力专，李丽立，张彬金属硫蛋白在动物营养学上的应用J长江大学学报（自然科学版）,2006,3（1）：156-1602 肖定福，张彬，李忠义，等不同应激因子对小鼠肝脏金属硫蛋白诱导合成的影响J中国实验动物学报,2009,17(2)：90-96.3 陈海燕，张彬，李丽立，等金属硫蛋白在动物生殖系统中的定位与调J黑龙江动物繁殖,2008,16(1)：1-34 陈伟强，程义勇，李树田，等锌对心理应激大鼠不同脑区金属硫蛋白亚型表达的影响J营养学报,2006,28(4)：288-291.5 李丽立，张彬，印遇龙，等金属硫蛋白在仔猪体内代谢动力学研究J核农学报,2004,18(6)：480-4846 李丽立，刘云华，侯德兴，等金属硫蛋白对仔猪抗氧化功能及 基因表达的影响J第四军医大学学报,2006,27(19)：1733-17367 刘云华，张彬，李丽立金属硫蛋白及其在养殖业中的应用前景J家畜生态学报,2004,25(4)：179-1828 吴力专，张彬，李丽立猪金属硫蛋白抗体的制备及应用J畜牧兽医学报,2006,37(2)：204-2089 张彬，肖定福，李丽立，等.金属硫蛋白在奶牛公犊体内的代谢规律研究J草业学报,2008,17(6)：78-8410 张彬，薛立群，李丽立，等外源性金属硫蛋白对奶牛抗热应激调控及SOD基因表达的影响J.应用生态学报,2007,18(1)：193-198.11 吴力专,罗佳捷, 张彬,等. 外源性金属硫蛋白对中国荷斯坦奶牛血淋巴细胞凋亡/坏死及线粒体膜电位的影响J.草业学报，2010，22（4）：205-211.12 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