DNA的粗提取和鉴定0507.ppt

【资料搜集资料搜集】DNADNA的特性及应用的特性及应用 强奸案、无名尸源强奸案、无名尸源 确认、碎尸案的同一认定等案件确认、碎尸案的同一认定等案件用不同材料进行用不同材料进行DNADNA的粗提取的粗提取与鉴定与鉴定江苏省海门中学江苏省海门中学 路洪娜路洪娜DNADNA提取与鉴定的原理提取与鉴定的原理DNA的理化性质的理化性质在在“DNA粗提取与鉴粗提取与鉴定定”实验中的应用实验中的应用b.DNAb.DNA和蛋白质等其他成分在和蛋白质等其他成分在不同浓度的不同浓度的NaCl溶液中溶解溶液中溶解度不同。度不同。c.DNAc.DNA不溶于酒精溶液，但细不溶于酒精溶液，但细胞中某些物质则溶于酒精。胞中某些物质则溶于酒精。a.a. 洗涤剂可瓦解细胞膜，但洗涤剂可瓦解细胞膜，但对对DNADNA没有影响。没有影响。d.蛋白酶能水解蛋白质，但对蛋白酶能水解蛋白质，但对DNA没有影响。没有影响。2.去除DNA中的蛋白质杂质5.鉴定DNA1.调节溶液浓度使DNA充分溶解，而使杂质沉淀3.使DNA从细胞中释放4.析出DNA除去溶解的杂质e.沸水浴条条件下，件下，DNADNA与二苯与二苯胺反应呈蓝色。胺反应呈蓝色。其中含有的其中含有的SDS,SDS,使蛋白质变性使蛋白质变性此时溶液此时溶液的浓度？的浓度？实验步骤实验步骤粗提取粗提取DNADNA1.先加食盐研磨、先加食盐研磨、再加再加SDS混匀混匀2.过滤，过滤，取滤液取滤液6.获得丝状提取物获得丝状提取物5.加冷酒精加冷酒精3.嫩肉粉处理嫩肉粉处理（60，10min）7. 溶解在溶解在10ml的的2mol/l的的NaCl中中4.过滤，过滤，取滤液取滤液将滤液将滤液倒入倒入试管试管中，贴中，贴标签标签实验步骤实验步骤鉴定鉴定DNADNA步骤步骤A A试管试管B B试管试管15mL溶有DNA的NaCl溶液24mL二苯胺试剂二苯胺试剂（现用现配）（现用现配）3沸水浴沸水浴中加热中加热5min5min冷却后观察并记录现象实验设计时须遵循的原则：实验设计时须遵循的原则：对照原则、单因子变量原则对照原则、单因子变量原则5ml NaCl5ml NaCl溶液溶液4ml 4ml 二苯胺试剂二苯胺试剂对照组对照组实验组实验组自变量自变量实验结果与分析实验结果与分析 若想使实验结果明显，若想使实验结果明显，应选择应选择DNA含量较含量较高的实验材料。另外，实验材料的保存方法对高的实验材料。另外，实验材料的保存方法对实验成败也至关重要。实验成败也至关重要。 猕猴桃中的猕猴桃中的DNADNA含量明显多于香蕉。含量明显多于香蕉。 香蕉中染色体数为香蕉中染色体数为3n=333n=33；猕猴桃中染色体；猕猴桃中染色体数为数为2n=582n=58实验结果与分析实验结果与分析为何加蛋白酶处理后，提取物反而明显减少？为何加蛋白酶处理后，提取物反而明显减少？ DNADNA含量较少，而杂质量较多含量较少，而杂质量较多拓展延伸拓展延伸 进行基因工程等操作时，实验样本往进行基因工程等操作时，实验样本往往很有限，且对纯度要求高。往很有限，且对纯度要求高。如何如何改进实改进实验步骤，验步骤，提取纯度更高的提取纯度更高的DNA? 1、研磨时加入细胞核提取液，使核、研磨时加入细胞核提取液，使核DNA充分释放充分释放2、用氯仿异戊醇处理，去除蛋白质杂质、用氯仿异戊醇处理，去除蛋白质杂质3、用离心代替过滤，减少、用离心代替过滤，减少DNA损耗损耗4、抑制外援、抑制外援DNA酶的活性：提取液中加入酶的活性：提取液中加入EDTA(螯合螯合剂，抑制酶的活性剂，抑制酶的活性)、低温操作、低温操作