666DDT检测作业指导书.doc
666DDT 检测作业指导书检测作业指导书1 1.试剂及其配制试剂及其配制1.1 硫酸：=1.84g/ml，超纯。1.2 无水硫酸钠（Na2SO4）：600灼烧 4h 以上，冷却后密闭保存，有效期 1 个月。1.3 硫酸钠溶液（20g/l）：将 20g 无水硫酸钠溶于水中，稀释至 1000ml。1.4 正己烷（含量大于 99%）：于全玻璃磨口回流蒸馏器中每 1000ml 正己烷加入 1g 固体氢氧化钠，回流 4h。换上分馏柱水浴蒸馏，收集（6669）馏分，弃去前 5%和最后 10%的馏分。1.5 苯：经全玻璃蒸馏器重蒸，收集 80%馏分。1.6 异辛烷：经全玻璃蒸馏器重蒸。1.7 丙酮：经全玻璃蒸馏器重蒸，收集（3839）馏分。1.8 色谱担体：Gas Chrom Q,100 目120 目（150um120um） 。1.9 固定液：OV-17,OV-210。1.10 666、DDT 各组分标准品：-666、-666、-666、-666、o.p-DDT、p.p-DDE、p.p-DDT、p.p-DDD，色谱纯。1.11 666、DDT 各组分标准贮备溶液：分别称取1.00mg-666、-666、-666，4.00mg-666，p.p-DDE、5.00mg p.p-DDD，8.00mg o.p-DDT 和 10.0mg p.p-DDD 于 8 个 10.0ml 的量瓶中，用正己烷或异辛烷溶解并稀释至标线，混匀。各标准贮备液的浓度分别为：0.100mg/ml, 0.100mg/ml，0.100mg/ml，0.400mg/ml，0.400mg/ml，0.500mg/ml，0.800mg/ml，1.00mg/ml。1.12 666、DDT 各组分混合标准使用溶液：分别准确移取一定体积 666、DDT 各组分标准贮备液于同一量瓶中用正己烷稀释定容，最终制成混合标准使用液的浓度分别为：-666、0.010ng/ul；-666，0.010ng/ul；-666，0.040ng/ul；-666，0.010ng/ul；p.p-DDE， 0.040ng/ul；o.p-DDT，0.080ng/ul；p.p-DDD，0.050ng/ul；p.p-DDT ，0.100ng/ul。将上述混合标准使用液分装于 2ml 安瓿瓶（经 450灼烧 4h 以上）中封存，置冰箱内保存。每支安瓿瓶装 0.3ml0.5ml 标准使用液，临用时启封。2 2.色谱柱制备色谱柱制备a)色谱柱预处理：玻璃柱用盐酸溶液（1+1）浸泡过夜，用水冲净，烘干。注入 10%（V/V）二甲基二氯硅烷的甲苯溶液浸泡 2h，弃去溶液，用氮气吹干；b）固定相制备：称取 0.080G OV-17 和 0.320g OV-210于 100ml 圆底烧杯内，用适量丙酮溶解。烧杯与冷凝管联接，置于水浴中回流 2h。稍冷后将 5g 预热过的色谱担体倒入，控制丙酮页面略高于担体，在微沸下回流 4h。冷却后自然晾干（不时摇动，以防粘结） ；c）色谱柱装柱：将玻璃柱与固定相在 120下预热2h，冷却。在柱的一端填上一小块玻璃毛，高度约为5min，并接到真空系统的抽滤瓶。柱的另一端接一小漏斗，在减压下边振荡，边填柱，使固定相填充均匀。填完后取下漏斗，并填上一小块玻璃毛；d）色谱柱老化：将已填好的色谱柱一端接色谱仪注射进样口，另一端放空，依次在 150，180，210各老化 2h，最后在 230老化 16h 以上；e)连接检测器：将已老化的色谱柱放空端接入检测器，在工作条件下用氮气吹洗 8h。注射 666、DDT 各组分混合标准使用溶液，根据其色谱图检验色谱柱的分离效果，应得到完全分离的 8 种异构体的色谱峰。3 3.样品测定样品测定a)样品萃取：量取 500ml 海水样品于锥形分液漏斗中，加入 10.0ml 正己烷，剧烈振荡 2min，静置分层后弃去水层；b）净化：正己烷相用硫酸净化 2 次，每次 5ml，剧烈振荡 1min，再用硫酸钠溶液洗涤 2 次，每次 10ml，振荡1min。正己烷相经无水硫酸钠柱脱水。用 10ml 正己烷分两次洗涤分液漏斗并经脱水柱。最后用 5ml 正己烷冲洗脱水柱。所有流经脱水住的正己烷均采集在浓缩瓶内；c）浓缩：将浓缩瓶装到 K-D 浓缩器或蒸发浓缩装置，在 8090的水浴中浓缩至 3ml5ml。取下浓缩瓶，在常温下用氮气吹拂使溶液体积小于 0.5ml，最后用正己烷定容至 0.50ml。若不能立即进行色谱测定，将溶液封存在安瓿瓶内，冰箱保存；d）色谱测定：分别抽取相同体积的样品浓缩液和混合标准使用液按选定的气相色谱仪工作条件测量各异构体的峰高 hw 和 ho；e）同时，取 10ml 正己烷按步骤测定试剂空白 hb。4 4.记录与计算记录与计算将测得的标准空白和水样的有机氯农药各异构体的数据记入表中，按式计算水样中有机氯农药各异构体的浓度。666、DDT=co（hw-hb）V/hoV1(27)式中：666、DDT水样中有机氯农药各异构体浓度，单位为纳克每升（ng/l） ；co标准使用溶液中该异构体的浓度，单位为纳克每微升（ng/ul） ；hw样品提取液相应的异构体的色谱峰高，单位为毫米（mm） ；V提取液浓缩后定容体积，单位为微升（ul） ；hb空白中相应的异构体的色谱峰高，单位为毫米（mm） ；Vi水样体积，单位为升（L） 。水样中 666 和 DDT 的总量为各异构体浓度之和。
