白酒中甲醇的快速检测.doc

1附件 12白酒中甲醇的快速检测（征求意见稿）1 范围本方法规定了白酒中甲醇的快速检测方法。 本方法第一法适用于白酒（酒精度 1868% vol）中甲醇的快速检测，第二法适用于白酒 （酒精度 3468% vol）中甲醇的快速检测。第一法 变色酸法2 原理样品中的甲醇在磷酸溶液中，被高锰酸钾氧化为甲醛，用偏重亚硫酸钠除去过量的高锰酸 钾。甲醛在硫酸条件下与变色酸反应生成蓝紫色化合物。通过与甲醇对照液比较，对样品中甲 醇含量进行定性判定。3 试剂和材料方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为 GB /T 6682 规定的三级水。3.1 试剂3.1.1 高锰酸钾（KMnO4）。3.1.2 磷酸（H3PO4）。3.1.3 偏重亚硫酸钠（Na2S2O5）。3.1.4 硫酸（H2SO4）。3.1.5 变色酸钠（C10H6Na2O8S2·2H2O）。3.1.6 乙醇（C2H6O）。3.1.7 5%乙醇（体积分数）：吸取乙醇 5 mL，置于 100 mL 容量瓶，加水稀释至刻度。3.1.8 高锰酸钾-磷酸溶液（30 g/L）：称取 3.0 g 高锰酸钾，溶于 100 mL 磷酸-水（15+85）溶液。3.1.9 偏重亚硫酸钠溶液（100 g/L）：称取 10.0 g 偏重亚硫酸钠，溶于 100 mL 水中。3.1.10 变色酸显色剂：称取 0.1 g 变色酸钠溶于 25 mL 水中，加入 75 mL 硫酸。3.2 参考物质甲醇参考物质中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子质量见表 1，纯度99%。2表 1 甲醇中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子质量中文名称英文名称CAS 登录号分子式相对分子质量甲醇Methanol67-56-1CH3OH32.043.3 标准溶液的配制甲醇标准溶液（1 g/L）：称取 0.1 g（精确至 0.001 g）甲醇标准品于 100 mL 容量瓶中，用 5%乙醇（3.1.7）稀释至刻度，混匀。3.4 材料甲醇快速检测试剂盒：适用基质为白酒（酒精度1868% vol），需在阴凉、干燥、避光条 件下保存。4 仪器和设备4.1 电子天平：感量 0.001 g。4.2 量筒：50 mL，100 mL。4.3 移液器：1 mL，5 mL。4.4 酒精计：分度值为 1% vol。4.5 涡旋振荡器。4.6 水浴锅。4.7 环境温度：1030。5 分析步骤5.1 待测液制备5.1.1 酒精度的测定：取洁净、干燥的100 mL量筒，注入100 mL样品，静置数分钟，待酒中气 泡消失后，放入洁净、擦干的酒精计，轻轻按一下，不应接触量筒，平衡约5 min，水平观测， 读取与弯月面相切处的刻度示值。 5.1.2 样品稀释：根据酒精计示值吸取对应体积的样品（参见表2），置于10 mL比色管中，补 水至10 mL。 表2 不同酒精度样品吸取体积表酒精计示值 (% vol)样品吸取体积 (mL)补水体积 (mL)18222.5 7.523272.0 8.028321.7 8.333361.5 8.537411.3 8.7342451.2 8.846531.0 9.054600.9 9.161680.8 9.25.1.3 显色：吸取稀释后的样品溶液（5.1.2）1.0 mL，置于10 mL比色管中，加入高锰酸钾-磷酸 溶液0.5 mL，混匀，密塞，静置15 min。加入0.3 mL偏重亚硫酸钠溶液，混匀，使试液完全褪 色。沿比色管壁缓慢加入5 mL变色酸显色剂，密塞，混匀，置于70水浴中，显色20 min后取 出，迅速冷却至室温，即得待测液。每批测试应吸取1mL 5%乙醇（3.1.7）同5.1.3“加入高锰酸 钾-磷酸溶液0.5 mL”起操作，随行全试剂空白试验。5.2 甲醇对照液制备根据待测样品的分类（粮谷类或其他类），吸取对应体积（参见表3）的甲醇标准溶液 （3.3），置于10 mL比色管中，补5%乙醇至10 mL，混匀。吸取上述溶液1.0 mL，置于10 mL比 色管中，同5.1.3“加入高锰酸钾-磷酸溶液0.5 mL”起操作，制得甲醇对照液。表3 标准溶液对应吸取体积表待测样品分类标准溶液吸取体积(mL)粮谷类0.3其他类1.05.3 判读将待测液（5.1）与甲醇对照液（5.2）进行目视比色，10 min内判读结果。应进行平行试验， 且两次判读结果应一致。 6 结果判定要求观察待测液颜色，与甲醇对照液比较判读样品中甲醇的含量。颜色深于对照液者为阳性， 浅于对照液者为阴性。为尽量避免出现假阴性结果，判读时遵循就高不就低的原则。7 性能指标7.1 检测限：0.2 g/L。7.2 灵敏度：95%。7.3 特异性：85%。7.4 假阴性率：5%。7.5 假阳性率：15%。注：性能指标计算方法见附录 A。8 其他4本方法所述试剂及操作步骤等是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不作限定。方 法使用者在使用替代试剂或操作步骤前，须对其进行考察，应满足本方法规定的各项性能指标。本方法的参比方法为 GB 5009.266食品安全国家标准 食品中甲醇的测定。本方法中采用的高锰酸钾-磷酸溶液（3.1.8）、变色酸显色剂（3.1.10）久置后会发生变化， 建议方法使用者考察稳定性或临用新配。采用本方法，酒精度为非整数的样品，为避免出现假阴性结果，建议参照表2吸取酒精度整 数部分体积。当目视不能判定颜色深浅时，可采用分光光度计测定待测液与甲醇对照液 570 nm 处的吸光 度进行比较判定。第二法 乙酰丙酮法9 原理样品中的甲醇在磷酸溶液中，被高锰酸钾氧化为甲醛，用草酸除去过量的高锰酸钾。甲醛 在过量铵盐条件下与乙酰丙酮反应生成黄色化合物。通过与甲醇对照液比较，对样品中甲醇含 量进行定性判定。10 试剂和材料方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为 GB /T 6682 规定的三级水。10.1 试剂 10.1.1 高锰酸钾-磷酸溶液：同 3.1.8。10.1.2 草酸：无水草酸（H2C2O4）或含 2 分子结晶水的草酸（H2C2O4·2H2O）。10.1.3 乙酰丙酮（C5H8O2）。10.1.4 乙酸铵（C2H7O2N）。10.1.5 冰乙酸（C2H4O2）。10.1.6 50%乙醇（体积分数）：量取乙醇（3.1.6）50 mL，置于 100 mL 容量瓶，加水稀释至刻 度。10.1.7 草酸溶液（50 g/L）：称取 5.0 g 无水草酸或 7.0 g 含 2 分子结晶水的草酸，溶于 100 mL 水。10.1.8 乙酰丙酮溶液：称取乙酸铵 25.0 g，加水 70 mL 使溶解，加冰乙酸 3 mL 及乙酰丙酮 0.25 mL，加水稀释至 100 mL，用力摇匀。临用现配。10.2 参考物质同3.2。510.3 标准溶液配制甲醇标准溶液（1 g/L）：称取 0.1 g（精确至 0.001g）甲醇标准物质于 100 mL 容量瓶中， 用 50%乙醇（10.1.6）稀释至刻度，混匀。10.4 材料甲醇快速检测试剂盒：适用基质为白酒（酒精度3468% vol），需在阴凉、干燥、避光条 件下保存。11 仪器和设备同4。12 分析步骤12.1 待测液制备12.1.1 酒精度的测定：同 5.1.1。12.1.2 显色：根据酒精计示值吸取对应体积的样品，置于10 mL比色管中，补乙醇和水至2.0 mL（参见表4）。加入高锰酸钾-磷酸溶液1.0 mL，混匀，密塞，静置30 min。加入草酸溶液1.0 mL，混匀，密塞，置沸水浴中使其褪色，取出冷却至室温。加入乙酰丙酮溶液2.0 mL，混匀， 密塞，置沸水浴中，显色30 min后取出，迅速冷却至室温，即得待测液。每批测试应吸取2mL 50%乙醇（10.1.6）同12.1.2“加入高锰酸钾-磷酸溶液1.0 mL”起操作，随行全试剂空白试验。表4 不同酒精度样品吸取体积表酒精计示值 (% vol)样品吸取体积 (mL)补乙醇体积 (mL)补水体积 (mL)34351.50.50.036401.30.5 0.241441.2 0.5 0.3 45521.0 0.5 0.5 53580.9 0.5 0.6 59650.8 0.5 0.7 66680.7 0.5 0.8 12.2 甲醇对照液制备根据待测样品的分类，吸取对应体积（参见表5）的甲醇标准溶液（10.3），补50%乙醇至 2.0 mL，混匀后同12.1.2“加入高锰酸钾-磷酸溶液1.0 mL”起操作，制得甲醇对照液。表5 对应标准溶液吸取体积表待测样品分类标准溶液吸取体积(mL)粮谷类0.3其他类1.0612.3 判读 将待测液与对照液进行目视比色，10 min内判读结果。应进行平行试验，且两次测定结果 应一致。13 结果判定要求同6。14 性能指标14.1 检测限：0.3 g/L。 14.2 灵敏度：95%。14.3 特异性：85%。14.4 假阴性率：5%。14.5 假阳性率：15%。注：性能指标计算方法见附录A。15 其他本方法所述试剂及操作步骤等是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不作限定。方 法使用者在使用替代试剂或操作步骤前，须对其进行考察，应满足本方法规定的各项性能指标。本方法的参比方法为 GB 5009.266食品安全国家标准 食品中甲醇的测定。 采用本方法，酒精度为非整数的样品，为避免出现假阴性结果，建议参照表4吸取酒精度整 数部分体积。当目视不能判定颜色深浅时，可采用分光光度计测定待测液与甲醇对照液 415 nm 处的吸光 度进行比较判定。7附录 A快速检测方法性能指标计算表检测结果b 样品情况a 阳性阴性总数阳性N11N12N1.=N11+N12阴性N21N22N2.=N21+N22总数N.1=N11+N21N.2=N12+N22N=N1.+N2.或 N.1+N.2显著性差异（2）2=（N12-N21-1）2/（N12+N21），自由度（df）=1灵敏度（p+，%）p+=N11/N1.特异性（p-，%）p-=N22/N2.假阴性率（pf-，%）pf-=N12/N1.=100-灵敏度假阳性率 （pf+，%）pf+=N21/N2.=100-特异性相对准确度，%c（N11+N22）/(N1.+N2.)注：a由参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果；b由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果。N：任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。例如：N11 表示第一行， 第一列，N1.表示所有的第一行，N.2 表示所有的第二列；N12 表示第一行，第二列。C为方法的检测结果相对准确性的结果，与一致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。本方法负责起草单位：四川省食品药品检验检测院8验证单位：陕西省食品药品监督检验研究院、湖北省食品质量安全监督检验研究院、南昌市食 品药品检验所 主要起草人：余晓琴、刘美、姚欢、李澍才、陈小泉、杜钢