一次性使用卫生用品鉴定试验.docx

一次性使用卫生用品鉴定试验一次性使用卫生用品鉴定试验一次性使用卫生用品是指使用一次后即丢弃的，与人体直接或间接接触的，并 为达到人体生理卫生或卫生保健（抗菌或抑菌）目的而使用的各种日常生活用 品，产品性状可以是固体也可以是液体。例如，一次性使用手套或指套（不包 括医用手套或指套）、纸巾、湿巾、卫生湿巾、卫生棉（棒、签、球）、化妆 棉（纸、巾）、纸质餐饮具、电话膜、帽子、口罩、内裤、妇女经期卫生用品 （包括卫生护垫）、尿布等排泄物卫生用品（不包括皱纹卫生纸等厕所用纸）、 避孕套等，以及卫生部所发布的其他一次性使用卫生用品。2.1.11.1 样品采集于同一批号的三个运输包装中至少抽取 12 个最小销售包装样品，1/4 样品用于 检测，1/4 样品用于留样，另 2/4 样品（可就地封存）必要时用于复检。 抽样 的最小销售包装不应有破裂，检验前不得启开。2.1.11.2 样品微生物污染鉴定2.1.11.2.1 细菌菌落总数与初始污染菌检测法（1）样品的处理在 100 级净化条件下用无菌方法打开用于检测的至少 3 个包装，从每个包装中 取样，准确称取 10g±1g 样品。剪碎后加入到 200ml 灭菌生理盐水（如产品中 含有抑菌或杀菌成份，须加入相应的中和剂）中，充分混匀，得到一个生理盐 水样液。液体产品用原液直接作样液（如产品中含有抑菌或杀菌成份，须在样 液中加入相应的中和剂）。如被检样品含有大量吸水树脂材料而导致不能吸出足够样液时，稀释液量可按 每次 50ml 递增，直至能吸出足够测试用样液。（2）活菌培养计数待上述生理盐水样液自然沉降后取上清液接种 5 个平皿，参照 2.1.1.3 进行活 菌培养计数。(3) 结果报告当总菌落数在 100 以内，按实有数报告，大于 100 时采用二位有效数字。如果 样品菌落总数超过标准值，按下述方法进行复检和结果报告。(4) 复检方法取留存的复检样品依前法复测 2 次，2 次结果平均值都达到标准规定者，则判 定被检样品合格；如其中仍有 1 次结果平均值超过标准规定，则判定被检样品 不合格。2.1.11.2.2 大肠菌群检测方法(1) 操作步骤取样液 5ml 接种 50 ml 乳糖胆盐发酵管，置 35±2培养 24 h，若不产酸也 不产气，则报告为大肠菌群阴性。如产酸产气，则划线接种伊红亚甲蓝琼脂平板，置 35±2培养 18h24h， 观察平板上菌落形态。典型的大肠菌落为黑紫色或红紫色，圆形，边缘整齐， 表面光滑湿润，常具有金属光泽，也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或 粉红色，中心较深的菌落。取疑似菌落 12 个作革兰染色镜检，同时接种乳糖 发酵管，置 35±2培养 24 h，观察产气情况。(2) 结果报告乳糖胆盐发酵管产酸产气，乳糖发酵管产酸产气，在伊红亚甲蓝平板上有典型 大肠菌落，革兰染色为阴性无芽孢杆菌，可报告被检样品检出大肠杆菌。2.1.11.2.3 铜绿假单胞菌检测方法(1) 操作步骤取样液 5 ml，加入到 50 ml SCDLP 培养液中，充分混匀，置 35±2培养 18h24 h。如有铜绿假单胞菌生长，培养液表面呈现一层薄菌膜，培养液常呈 黄绿色或蓝绿色。从培养液的薄菌膜处挑取培养物，划线接种十六烷三甲基溴 化铵琼脂平板，置 35±2培养 18h24h，观察菌落特征。铜绿假单胞菌在 此培养基上生长良好，菌落扁平，边缘不整，菌落周围培养基略带粉红色，其 他菌不长。取可疑菌落涂片作革兰染色，镜检为革兰阴性菌者应进行下列试验：氧化酶试验：氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻棒挑取可 疑菌落涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的 1%二甲基对苯二胺试液， 30s 内出现粉红色或紫红色，为氧化酶试验阳性，不变色者为阴性。绿脓菌素试验：取 2 个3 个可疑菌落，分别接种在绿脓菌素测定用培养基斜 面，35±2培养 24 h，加入三氯甲烷 3 ml5ml，充分振荡使培养物中可能 存在的绿脓菌素溶解，待三氯甲烷呈蓝色时，用吸管移到另一试管中并加入 1mol/L 的盐酸 1ml，振荡后静置片刻。如上层出现粉红色或紫红色即为阳性， 表示有绿脓菌素存在。硝酸盐还原产气试验：硝酸盐还原产气试验：挑取被检菌纯培养物接种在硝酸盐胨水培养基中， 置 35±2培养 24 h，培养基小倒管中有气者即为阳性。明胶液化试验：明胶液化试验：取可疑菌落纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，置 35±2培养 24h，取出放于 410，如仍呈液态为阳性，凝固者为阴性。4242生长试验：生长试验：取可疑培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，置 42培养 24h48h，有铜绿假单胞菌生长为阳性。(2) 结果报告被检样品经增菌分离培养后，证实为革兰阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试 验均为阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。如绿脓菌素试验阴性 而液化明胶、硝酸盐还原产气和 42生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检 样品中检出铜绿假单胞菌。2.1.11.2.4 金黄色葡萄球菌检测方法(1) 操作步骤取样液 5ml，加入到 50ml SCDLP 培养液中，充分混匀，置 35±2培养 24 h。自上述增菌液中取 1 或 2 接种环，划线接种在血琼脂培养基上，置 35 ±2培养 24h48 h。在血琼脂平板上该菌菌落呈金黄色，大而突起，圆形， 不透明，表面光滑，周围有溶血圈。挑取典型菌落，涂片作革兰染色镜检，金 黄色葡萄球菌为革兰阳性球菌，排列成葡萄状，无芽孢与荚膜。镜检符合上列 情况应进行下列试验：甘露醇发酵试验：甘露醇发酵试验：取上述菌落接种甘露醇培养液，置 35±2培养 24h， 发酵甘露醇产酸者为阳性。血浆凝固酶试验：血浆凝固酶试验：玻片法：取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴生理盐水， 另一端滴加一滴兔血浆，挑取菌落分别与生理盐水和血浆混合，5min 如血浆内 出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固则为阳性，如两者均无 凝固则为阴性。凡盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验。试 管法：吸取 1：4 新鲜血浆 0.5ml，放灭菌小试管中，加入等量待检菌 24h 肉汤 培养物 0.5ml。混匀，放 35±2温箱或水浴中，每半小时观察一次，24 h 之内呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物各 0.5 ml 作为阳性与阴性对照。(2) 结果报告凡在琼脂平板上有可疑菌落生长，镜检为革兰阳性葡萄球菌，并能发酵甘 露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。2.1.11.2.5 溶血性链球菌检测方法(1) 操作步骤取样液 5ml 加入到 50ml 葡萄糖肉汤，35±2培养 24 h。将培养物划线 接种血琼脂平板，35±2培养 24h 观察菌落特征。溶血性链球菌在血平板上 为灰白色，半透明或不透明，针尖状突起，表面光滑，边缘整齐，周围有无色 透明溶血圈。挑取典型菌落作涂片革兰染色镜检，应为革兰阳性，呈链状排列 的球菌。镜检符合上述情况，应进行下列试验：链激酶试验：吸取草酸钾血浆 0.2 ml（0.01g 草酸钾加 5mL 兔血浆混匀， 经离心沉淀，吸取上清液），加入 0.8 ml 灭菌生理盐水，混匀后再加入待检菌 24 h 肉汤培养物 0.5 ml 和 0.25 % 氯化钙 0.25 ml，混匀，放 35±2水浴 中，2 min 观察一次（一般 10 min 内可凝固），待血浆凝固后继续观察并记录 溶化时间。如 2 h 内不溶化，继续放置 24 h 观察，如凝块全部溶化为阳性，24 h 仍不溶化为阴性。杆菌肽敏感试验：将被检菌菌液涂于血平板上，用灭菌镊子取每片含 0.04 单位杆菌肽的纸片放在平板表面上，同时以已知阳性菌株作对照，在 35 ±2下放置 18h24h，有抑菌带者为阳性。(2) 结果报告镜检革兰阳性链状排列球菌，血平板上呈现溶血圈，链激酶和杆菌肽试验 阳性，可报告被检样品检出溶血性链球菌。2.1.11.2.6 真菌菌落总数检测方法(1) 操作步骤待上述生理盐水样液自然沉降后取上清液作真菌计数。共接种 5 个平皿 ， 每个平皿中加入 1 ml 样液，然后用冷却至 45左右的熔化的沙氏琼脂培养基 15ml25ml 倒入每个平皿内混合均匀，琼脂凝固后翻转平皿置 25±2培养 7d，分别于 3d、5d、7d 观察，计算平板上的菌落数，如果发现菌落蔓延，以前 一次的菌落计数为准。(2) 结果报告菌落呈片状生长的平板不宜采用；计数符合要求的平板上的菌落，按下式计算 结果：式中：XF为样品真菌菌落总数，cfu/g 或 cfu/ml；Nt为 5 块沙氏琼脂培养基 平板上的真菌菌落总数；K为稀释度。当菌落数在 100 以内，按实有数报告，大于 100 时采用二位有效数字。如果样品菌落总数超过本标准的规定，按下述方法进行复检和结果报告。(3) 复检方法 将留存的复检样品依前法复测 2 次，2 次结果平均值都达到标准的规定， 则判定被检样品合格；其中有任何 1 次结果平均值超过标准规定，则判定被检 样品不合格。2.1.11.2.7 真菌定性检测方法(1) 操作步骤取样液 5ml 加入到 50ml 沙氏培养基中，25±2培养 7d，逐日观察有无 真菌生长。(2) 结果报告培养管混浊应转种沙氏琼脂培养基，证实有真菌生长，可报告被检样品检出真 菌。2.1.11.3 产品杀菌性能、抑菌性能及其稳定性鉴定杀菌性能与抑菌性能试验取样部位，根据被试产品生产者的说明而确定。2.1.11.3.1 杀菌性能测试方法（1）试验菌与菌液制备1）试验菌：细菌：金黄色葡萄球菌（ATCC 6538），大肠杆菌（8099 或 ATCC 25922）；酵母菌：白色念珠菌(ATCC 10231)。2）染菌样片制备：取菌株第 3 代14 代的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物 (18h24h)，用 5 mL 0.03mol/L 磷酸盐缓冲液 （以下简称 PBS）洗下菌苔， 后用上述 PBS 稀释至所需浓度，取 100l 滴于样片（2.0cm×3.0cm）上，使回 收菌数达 1×104 cfu/片）9×104cfu/片。3）菌液制备：取菌株第 3 代14 代的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物 (18h24h)，用 5 ml 0.03mol/L 磷酸盐缓冲液 （以下简称 PBS）洗下菌苔， 使菌悬浮均匀后用上述 PBS 稀释至所需浓度.(2) 中和剂鉴定试验： 参照 2.1.1.5 中和剂载体定量鉴定试验方法进行。(3) 杀菌试验参照 2.1.1.7.5 载体浸泡定量杀菌试验方法进行。1) 操作步骤将试验菌 24h 斜面培养物用 PBS 洗下，制成菌悬液（要求的浓度为：用 100l 滴于对照样片上，回收菌数为 1×104 cfu/片）9×104cfu/片）。取被试样片（2.0cm×3.0cm）和对照样片（与试样同质材料，同等大 小，但不含抗菌材料，且经灭菌处理）各 4 片，分成 4 组置于 4 个灭菌平皿内。取上述菌悬液，分别在每个被试样片和对照样片上滴加 100l，均匀 涂布，开始计时，作用 2min、5min、10min、20min，用无菌镊分别将样片投入 含 5ml 相应中和剂的试管内，充分混匀，作适当稀释，然后取其中 2 个3 个 稀释度，分别吸取 0.5ml，置于两个平皿，用凉至 4045的营养琼脂培养 基（细菌）或沙氏琼脂培养基（酵母菌）15ml 作倾注，转动平皿，使其充分均 匀，琼脂凝固后翻转平板，35±2培养 48h（细菌）或 72h（酵母菌），作 活菌菌落计数。试验重复 3 次，按下式计算杀菌率：式中：X为 杀菌率，% ；NC为对照样品平均菌落数，cfu/片； NS为被试样品平 均菌落数，cfu/片。（4）评价标准杀菌率90%，产品有杀菌作用。2.1.11.3.2 溶出性抗（抑）菌产品抑菌性能测试方法(1)操作步骤将试验菌 24h 斜面培养物用 PBS 洗下，制成菌悬液（要求的浓度为：用 100l 滴于对照样片上或 5ml 样液内，回收菌数为 1×104 cfu/片或 ml9×104cfu/片或 ml）。取被试样片（2.0cm×3.0cm）或样液（5ml）和对照样片或样液（与样 片同质材料，同等大小，但不含抗菌材料，且经灭菌处理）各 4 片（置于灭菌 平皿内）或 4 管。取上述菌悬液，分别在每个被试样片或样液和对照样片或样液上或内 滴加 100l，均匀涂布/混合，开始计时，作用 2min、5min、10min、20min， 用无菌镊分别将样片或样液（0.5ml）投入含 5ml PBS 的试管内，充分混匀，作 适当稀释，然后取其中 2 个3 个稀释度，分别吸取 0.5ml，置于 2 个平皿，用 凉至 4045的营养琼脂培养基（细菌）或沙氏琼脂培养基（酵母菌）15ml 作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，35±2培养 48h（细菌）或 72h（酵母菌），作活菌菌落计数。试验重复 3 次，按下式计算抑菌率:式中：X为 抑菌率，% ；NC为对照样品平均菌落数，cfu/片； NS为被试样品平 均菌落数，cfu/片。（2）评价标准抑菌率50%90%，产品有抑菌作用，抑菌率90%，产品有较强抑菌作用。2.1.11.3.3 非溶出性抗（抑）菌产品抑菌性能测试方法参照 2.1.7.6 振荡烧瓶试验方法进行2.1.11.3.4 稳定性测试方法(1)测试条件1) 自然留样：将原包装样品置室温下按使用说明书规定的时间抽样进行抑菌或 杀菌性能测试。2) 加速试验：将原包装样品置 5456恒温箱内 14d 或 3740恒温箱 内 3 个月，保持相对湿度 75 %，抽样进行抑菌或杀菌性能测试。(2)评价标准1) 自然留样，其杀菌率或抑菌率达到规定的标准值，产品的杀菌或抑菌作用有 效期为自然留样时间。2) 54加速试验，其杀菌率或抑菌率达到规定的标准值，产品的杀菌或抑菌作 用有效期为室温保存至少 1 年。3) 37加速试验，其杀菌率或抑菌率达到规定的标准值，产品的杀菌或抑菌作 用有效期为室温下至少保持 2 年。2.1.11.4 产品环氧乙烷残留量测试方法(可参见 GB 15979-2002)2.1.11.52.1.11.5 产品毒理学鉴定产品毒理学鉴定2.1.11.5.1 鉴定指标 当原材料、生产工艺等发生变化可能影响产品毒性时，应按下表 2-7 根据 不同产品种类提供有效的 (经政府认定的第三方) 成品毒理学测试报告。表 2-7 产品毒理学试验选项*用于阴道粘膜的产品须做阴道粘膜刺激试验，但无须做皮肤刺激试验。2.1.11.5.2 试验方法皮肤刺激试验、阴道粘膜刺激试验和皮肤变态反应试验方法按 2.3 的方法测试。固体产品的样品制备方法按照 2.1.11.5.3 样品制备进行。注： 1）用于皮肤刺激试验中的空白对照应为：生理盐水和斑贴纸。2）在皮肤变态反应中，致敏处理和激发处理所用的剂量保持一致。2.1.11.5.3 样品制备(1) 皮肤刺激试验和皮肤变态反应试验 以横断方式剪一块斑贴大小的产品。对于干的产品，如尿布、妇女经期卫生用 品，用生理盐水润湿后贴到皮肤上，再用斑贴纸覆盖。湿的产品，如湿巾，则 可以按要求裁剪合适的面积，直接贴到皮肤上，再用斑贴纸覆盖。产 品 种 类 皮肤刺激试验 阴道粘膜刺激试验皮肤变态反应试验手套或指套、内裤 Ö Ö抗菌（或抑菌）液体产 品Ö根据用途选择*Ö湿巾、卫生湿巾Ö根据用途选择*根据材料选择口罩Ö 妇女经期卫生用品ÖÖ尿布等排泄物卫生用品Ö Ö避孕套ÖÖ(2) 阴道粘膜刺激试验1) 干的产品（如妇女经 期卫生用品）：以横断方式剪取足够重量的产品，按 1g/10ml 的比例加入灭菌生理盐水，密封于萃取容器中搅拌后置于 37±1 下 24 h。冷却到室温，搅拌后析取样液备检。2) 湿的产品（如卫生湿巾）：在进行阴道粘膜刺激试验的当天，挤出湿巾里的 添加液作为样片。2.1.11.5.4 判定标准按 2.3 中的相应部分作为试验结果判定原则。2.1.11.6 消毒效果生物监测评价方法2.1.11.6.1 环氧乙烷灭菌或消毒参照 2.1.5.6 环氧乙烷灭菌器灭菌效果鉴定试验进行。(1)环氧乙烷消毒效果评价用生物指示菌为枯草杆菌黑色变种芽孢（ATCC 9372）。在菌量为 5×105cfu/个5×106cfu/个、环氧乙烷浓度为 600mg/L±30mg/L、作用温度为 54±2、相对湿度为 60%±10% 条件下，其 杀灭 90% 微生物所需时间 D 值应为 2.5min5.8min，存活时间7.5min，杀灭 时间58min。(2)每次测试至少布放 10 片生物指示剂，放于最难杀灭处。消毒完毕，取出指 示菌片接种营养肉汤培养液作定性检测或接种营养琼脂培养基作定量检测，将 未处理阳性对照菌片作相同接种，两者均置 35±2培养。阳性对照应在 24h 内有菌生长。定性培养样品如连续观察 7d 全部无菌生长，可报告生物指示剂培 养阴性，消毒合格。定量培养样品与阳性对照相比杀灭对数值达到 3.0 也可报 告消毒合格。2.1.11.6.2 电离辐射灭菌或消毒(1)生物指示菌短小杆菌芽孢 E 601（ATCC 27142），在菌量为 5×105cfu/个5×106cfu/个 时，其 D10值应为 1.7 kGy。(2)检测方法每次测试至少选 5 箱，每箱产品布放 3 片生物指示剂，将待检箱置最小剂量处。 消毒完毕，取出指示菌片接种营养肉汤培养液作定性检测或接种营养琼脂培养 基作定量检测，将未处理阳性对照菌片作相同接种，两者均置 35±2培养。（3）结果判定阳性对照应在 24h 内有菌生长。定性培养样品如连续观察 7d 全部无菌生长，可 报告生物指示剂培养阴性，消毒合格。定量培养样品与阳性对照相比杀灭对数 值达到 3.0 也可报告消毒合格。2.1.11.6.3 压力蒸汽灭菌或消毒参照 GB 15981-1995消毒与灭菌效果的评价方法与标准第一篇：压力蒸汽 灭菌效果评价方法与标准中的规定执行。2.1.11.7 产品卫生标准(1) 外观必须整洁，符合该卫生用品固有性状，不得有异常气味与异物。(2) 不得对皮肤与粘膜产生不良刺激与过敏反应及其他损害作用。(3) 产品微生物学指标：须符合下表 2-8 的规定。(4) 卫生湿巾除必须达到上表微生物学标准外，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌 的杀灭率须90%，如需标明对真菌的作用，还须对白色念珠菌的杀灭率 90%，其杀菌作用在室温下至少须保持 1 年。(5) 抗菌（或抑菌）产品除必须达到上表同类同级产品微生物学标准外，对大 肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率须50%(溶出性)或>26%(非溶出性)，如需标 明对真菌的作用，还须对白色念珠菌的抑菌率50%(溶出性)或26%(非溶出性)， 其抑菌作用在室温下至少须保持 1 年。(6) 任何经环氧乙烷消毒的卫生用品出厂时，环氧乙烷残留量必须 250g/g。表 2-8 产品微生物学指标产品种类初始污染菌1）(cfu/g)细菌菌落总 数(cfu/g 或cfu/ml)大肠菌 群致病性 化脓菌2)真菌菌落总数 (cfu/g 或cfu/ml)手套或指套、纸巾、湿巾、 帽子、内裤、电话膜200不得检 出不得检 出100抗菌（或抑菌）液体产品200不得检 出不得检 出100卫生湿巾 20不得检 出不得检 出不得检出口罩普通级200不得检 出不得检 出100消毒级1000020不得检 出不得检 出不得检出妇女经期卫生用品普通级200不得检 出不得检 出100消毒级1000020不得检 出不得检 出不得检出尿布等排泄物用品普通级200不得检 出不得检 出100消毒级1000020不得检 出不得检 出不得检出避孕套20不得检 出不得检 出不得检出注：1) 如初始污染菌超过表内数值，应相应提高杀灭对数值，使达规定的细菌 与真菌限值。2) 致病性化脓菌指绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌与溶血性链球菌。