11DNA重组技术的基本工具.pptx

11DNA重组技术的基本工具基因工程的概念：基因工程的概念： 基因工程又叫基因工程又叫基因拼接技术基因拼接技术或或DNA重组重组技术技术。该技术是在生物。该技术是在生物体外体外，通过对，通过对DNA分分子进行人工子进行人工“剪切剪切”和和“拼接拼接”，对生物的，对生物的基因进行基因进行改造改造和和重新组合重新组合，然后，然后导入受体细导入受体细胞胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内内表达表达，产生出人类所需要的，产生出人类所需要的基因产物基因产物。重组重组DNA导入导入形成形成基因的剪刀基因的剪刀限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶基因的针线基因的针线DNA连接酶连接酶基因的运输工具基因的运输工具运载体运载体 第一节第一节 DNA重组技术的基本工具重组技术的基本工具特定的核苷酸序特定的核苷酸序列列粘性末端粘性末端平末端平末端酶的特异性酶的特异性1、CTGCAG2、GCGC 2、 “分子缝合针分子缝合针” DNA连接酶连接酶 作用作用把把2个个DNA片段末端之间的缝隙片段末端之间的缝隙“缝合缝合”起来。起来。G A A T T C C T T A A G 即脱氧核糖、磷酸基之间的连接即脱氧核糖、磷酸基之间的连接 GP AP 限制酶切割后有两种不同的结果，一种限制酶切割后有两种不同的结果，一种产生黏性末端，一种产生平末端。那么恢产生黏性末端，一种产生平末端。那么恢复它们的连接时，所用复它们的连接时，所用DNA连接酶是否一连接酶是否一样呢？样呢？DNA连接酶的种类：连接酶的种类：E.coliDNAE.coliDNA连接酶：连接酶：连接黏性末端连接黏性末端T T4 4DNADNA连接酶：连接酶：连接黏性末端和平末端连接黏性末端和平末端3、基因进入受体细胞的工具、基因进入受体细胞的工具种类：质粒、噬菌体和动植物病毒种类：质粒、噬菌体和动植物病毒要让一个从甲生物细胞内取出来的基因要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，还得将这个基因送到在乙生物体内进行表达，还得将这个基因送到乙生物的细胞内去！能将外源基因送入细胞的乙生物的细胞内去！能将外源基因送入细胞的工具就是工具就是运载体运载体。作用：将重组基因导入受体细胞作用：将重组基因导入受体细胞作为运载体的必要条件作为运载体的必要条件质粒质粒拟核拟核大肠杆菌细胞大肠杆菌细胞质粒的特点质粒的特点1 1、细胞染色体（或拟核、细胞染色体（或拟核DNADNA分子）外能分子）外能自主复制的自主复制的小型环状小型环状DNADNA分子；分子；2 2、质粒的存在对宿主细胞无影响；、质粒的存在对宿主细胞无影响；3 3、质粒的复制只能在宿主细胞内完成。、质粒的复制只能在宿主细胞内完成。 原核生物很容易受到自然界中外源原核生物很容易受到自然界中外源DNADNA的入侵，的入侵，但是长期的进化过程中，这些原核生物却没有因为但是长期的进化过程中，这些原核生物却没有因为外源外源DNADNA的入侵而灭绝。的入侵而灭绝。 根据我们刚刚掌握的知识，你能推测这其中的根据我们刚刚掌握的知识，你能推测这其中的原因吗？原因吗？ 原核生物细胞中的原核生物细胞中的限制酶会将外源限制酶会将外源DNADNA切割掉切割掉，使之失效，以保证自身的安全，使之失效，以保证自身的安全，但是不会切割自身但是不会切割自身的的DNADNA，这是原核生物在长期进化过程中形成的一，这是原核生物在长期进化过程中形成的一套防御机制。套防御机制。寻根问底寻根问底：寻根问底寻根问底：DNA连接酶和连接酶和DNA聚合酶是一回事吗？为什么？聚合酶是一回事吗？为什么？双链双链单链单链两两DNA片段片段之间的磷酸之间的磷酸二酯键二酯键将将游离游离的的脱脱氧核苷酸氧核苷酸通通过磷酸二酯过磷酸二酯键连接起来键连接起来随堂练习：随堂练习：1 1、关于限制酶的说法中，正确的是（、关于限制酶的说法中，正确的是（ ）A A、限制酶是一种酶，只识别、限制酶是一种酶，只识别GAATTCGAATTC碱基序列碱基序列B B、EcoRIEcoRI切割的是切割的是GAGA之间的氢键之间的氢键C C限制酶一般不切割自身的限制酶一般不切割自身的DNADNA分子，只切割分子，只切割外源外源DNADNAD D限制酶只存在于原核生物中限制酶只存在于原核生物中答案：答案：C2. （双选）（双选）答案：答案：BD