皮肤光毒替代试验方法的建立与改良.doc

体外体外 Balb/cBalb/c 3T33T3 成纤维细胞中性红摄取试验对光毒物质的评价成纤维细胞中性红摄取试验对光毒物质的评价吕中明，俞萍，王民生( 江苏省疾病预防控制中心, 江苏南京 210009)摘摘 要：目的要：目的 建立体外Balb/c 3T3成纤维细胞中性红摄取试验(3T3 NRU PT)，研究其作为化学品安全性评价中替代动物光毒性试验的可行性，从而为制定和完善新的检测标准和规范提供依据。方方法法 Balb/c 3T3细胞经过UVA不同照射剂量照射后，用中性红摄入法测定不同照射剂量的细胞活力；选取十二烷基硫酸钠(SDS)，8-甲氧基补骨脂(8-MOP)，盐酸氯丙嗪(CPZ)作为受试物,按照OECD“化学品测试导则432”的推荐方法，将Balb/c 3T3 成纤维细胞接种于96 孔细胞培养板，24 h后, 每一种受试物经预试验后设立8个浓度组，处理细胞1h后, 随机选择一块培养板用紫外照度计(Bio-spectra system，法国VILBER LOURMAT公司)，选UVA光源(365nm)进行紫外线照射(+Irr),照射剂量为5J/cm2,另一平行板置于黑暗中不照射(-Irr)作为对照。照射结束后，洗去受试化学物,孵育24h后换中性红培养液培养3h,洗去培养基,加入中性红解吸附液，在540nm处酶标仪测定NRU的吸光度值。根据测定的吸光度值, 使用PHOTO32 软件分别建立平均光效应(MPE值) 和光刺激因子(PIF值) 预测模型,以判断所测物质是否具有光毒性.结果结果 随着照射剂量的增加,细胞存活率逐渐降低，照射剂量为5、7.5、10、15、20J/cm2时，细胞存活率分别为91.4%、77.0%、72.3%、40.2%和18.8%；3T3 NRU PT试验测得SDS、8-MOP、CPZ的PIF值分别为0.89、22.81和17.60；MPE值分别为0.001、0.706和0.502,按该试验阈值分类方法, SDS为无光毒性物质，8-MOP、CPZ均具有光毒性.结结论论 通过正常3T3细胞经紫外线照射后细胞存活率的比较发现,照射剂量为5J/cm2时细胞的存活率高于90%,但剂量达7.5J/cm2时细胞存活率就低于80%，显示出一定的细胞毒性，故照射剂量应不高于5J/cm2为宜，结果同欧洲的多个实验室的结果基本一致；通过3T3 NRU PT对目前已知的阳性物8-MOP、CPZ及阴性物SDS的检测得出一致的结论,本实验室成功地建立了3T3 NRU PT，本实验室成功地建立了3T3-NRU PT，并在照射剂量控制等方面进行了探索，从而为化学品安全性评价提供依据。关键词：关键词：Balb/c 3T3, 中性红，光毒性