PCR实验室管理制度培训讲学.docx

PCR实验室管理制度培训讲学PCR实验室管理制度1.0目的建立PCR实验室的工作规范，确保分子诊断室正常工作。2.0范围PCR实验室，包括试剂准备间、标本制备间、扩增间的使用及管理。3.0职责PCR实验室的工作人员必须遵守本文件的规定。4.0内容4.1在进入实验室前，在隔离台戴好头套口罩，穿上鞋套与实验服。4.2试剂准备间4.2.1配电房先打开风机先开送风机，再开排风机，再把空调系统打开。关闭时的顺序相反。4.2.2其它室的用品不得带入本室。4.2.3从PCR实验室1号入口门进入实验室，到达试剂准备间的缓冲间，脱下白色工作服，挂在缓冲间的左侧，在缓冲间的右侧更换试剂准备间的专用工作服蓝色，进入试剂准备间，实验中须戴一次性手套，手套常更换。4.2.4打开已灭菌的超净台，通风一段时间，排走臭氧。取出当次实验需配制和使用的试剂，其余试剂要立即收好放回冰箱内。4.2.5操作应在冰上进行。Taq酶尽量在配液的最后一步参加。应减少dNTP反复冻融的次数。每次实验后将枪调至最大量程。加模板前打开废液缸盖，加完模板后务必盖上废液缸的盖子。4.2.6实验作业完成时，应及时清理工作台，做好实验登记，应使用本室专用的记录本和笔，打开超净台的紫外灯旋钮到20分钟处。使用过的离心管、吸头须置于3%的HCl溶液中浸泡、消毒后方可弃之。4.2.7打开传递窗门，垫上一次性手套，将配好的试剂放到传递窗里，关上传递窗门。4.2.8在试剂缓冲间脱下工作服，穿上白色工作服。4.3标本制备间4.3.1在标本制备间的缓冲间，脱下白色工作服，换上标本制备间专用的工作服粉红色，进入标本制备间。4.3.2打开传递窗的门，取出配好的试剂，使用本区专用的加样器和带滤芯枪头。4.3.3实验作业完成时，应及时清理工作台，使用过的离心管、带滤芯枪头须置于3%的HCl溶液中浸泡、消毒后方可弃之。4.3.4做好实验登记，应使用本室专用的记录本和笔，打开超净台的紫外灯旋钮到20分钟处。4.3.5打开传递窗门，垫上一次性手套，将配好的试剂放到传递窗里，关上传递窗门。4.3.6提取基因组模板，提取经过中丢弃的枪头、离心管和废液请丢弃在此垃圾袋并于实验结束后立即将垃圾袋扎口丢弃。提取质粒可先提取野生型质粒再提取突变型质粒。每次提取工作完成后擦拭台面。4.3.7在试剂缓冲间脱下工作服，穿上白色工作服。4.4扩增间4.4.1在扩增间的缓冲间，脱下白色工作服，换上扩增间专用工作服绿色。4.4.2打开传递窗门，取出配好的试剂，关上传递窗门。4.4.3打开PCR仪预热20min。4.4.4将反响管放入PCR仪中，关好门。4.4.5脱掉手套，设定程序，并命名。4.4.6结束后需待仪器冷却后方可取出PCR仪里的试剂，取出时用镊子将试剂条夹出，注意勿要使管盖打开，用三个PE手套包好方可弃之。机器上不允许存放PCR扩增产物，每次实验后请自行及时清理PCR扩增产物。4.4.7结束实验后，到配电房先把空调系统关掉，再关掉排风机，之后关掉送风机。4.4.8文件的处理：当天所做的实验结果，当天拷到部门电脑上处理，复制一份将文件名改为记录本上的命名。可将试验结果导到PPT上，并标记。4.5传递窗的使用4.5.1传递窗天天早上灭菌20分钟一次。当天使用可不用再次灭菌。将试剂放到传递窗时，在底下垫上一层手套。4.6压力监控4.6.1天天早上空调运行半小时后，记录各PCR实验室的压力差：试剂准备间：510；标本制备间：-5-10；扩增间：-10。各缓冲间的压力为+5.4.7超净台的摆放