生物化学实验考试试题(完整版).docx

生物化学实验考试试题(完整版)生物化学实验二、填空题：1.测定蛋白质含量的方法有(双缩脲法)，(紫外吸收法)，(Folin-酚试剂法或Lowry法)和考马斯亮蓝G-250染色法。2.CAT能把H2O2分解为H2O和O2，其活性大小以以一定时间内分解的H2O2量来表示，当CAT与H2O2反响结束，再用碘量法测定未分解的H2O2。3.聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为载体的一种区带电泳，这种凝胶是由Acr和交联剂Bis在催化剂作用下聚合而成。化学聚合法一般用来制备分离胶，其自由基的引发剂是Ap，催化剂是TEMED；光聚合法适于制备大孔径的浓缩胶，催化剂是核黄素。4.层析技术按分离经过所主要根据的物理化学性质进行分类，可分成下面几种：吸附层析，分配层析，离子交换层析，凝胶层析和亲和层析。5.使用离心机离心样品前，必须使离心管等重且对称放入离心机。6.米氏常数可近似表示酶和底物亲合力，Km愈小，表示E对S的亲合力愈大，Km愈大，表示E对S的亲合力愈小。7.分光光度计在使用之前必须预热，注意预热及样品槽空时必须_打开_打开、合上样品池翻盖。8.CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的抗逆性密切相关。9.纸层析实验中，_构成固定相，_流动相。10.聚丙烯酰胺凝胶是是由和交联剂在催化剂作用下聚合而成的，在具有自由基团体系时，两者就聚合。引发产生自由基的方法有两种：化学法和光聚合法。11.层析技术按按固定相的使用形式进行分类，可分成下面几种：柱层析，纸层析，薄层层析和薄膜层析。参考答案：生物化学实验一、名词解释：1、电泳：指带电粒子在电场中向与其本身所带电荷相反的电极方向移动的现象。2、同工酶：指催化同一种化学反响，但其酶蛋白本身的分子构造组成却有所不同的一组酶。3、分配层析法：用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同，而到达分离目的的一种实验方法。4、酶活性：酶催化化学反响的能力，往往以酶促反响的初速度表示。5、分光光度法：基于溶液对光吸收的大小来确定被测组份的含量的分析方法称为分光光度法或吸光光度法。6、层析技术：是利用被分离的混合物中各组分的理化性质分子的形状和大小、分子极性、吸附力、分子亲和力、分配系数等的不同，使各组分以不同程度在流动相和固定相中进行分配，最终到达分离目的。7、比活力：即每毫克酶蛋白所含酶的活力单位数。比活力高，表示酶纯度高。二、填空题：9.丙烯酰胺单体Acr，N，N-甲叉双丙烯酰胺Bis1、简述4种测定蛋白质含量的方法及其原理。答：(1)考马斯亮蓝G-250染色法：考马斯亮蓝G-250结合蛋白质后，构成蓝色CBG-蛋白质结合物，最大光吸收在595nm。在一定的蛋白质浓度范围内10-1000ug/ml，CBG-蛋白质结合物的O.D595nm值与蛋白质含量成正比，故可用分光光度法进行蛋白质的定量测定。2双缩脲法：蛋白质含有两个以上的肽键-CO-NH-因而，有双缩脲反响，在碱性溶液中蛋白质与Cu2+构成紫色络合物，其颜色深浅与蛋白质含量成正比，而与蛋白质的相对分子质量及aa成分无关，故能够用来测定蛋白质含量；3Folin-酚试剂法Lowry法：是双缩脲法的发展，第一步涉及到碱性溶液中铜蛋白质复合物的构成，然后这个复合物复原磷钼酸磷钨酸试剂，产生深蓝色钼蓝和钨蓝混合物比双缩脲法灵敏，但费时；4紫外吸收法：蛋白质中一些氨基酸残基中的苯环含有共轭双键，所以蛋白质具有吸收紫外光的性质，最大吸收峰在280nm处，在一定范围内，蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质含量成正比，可用作定量测定，简单、灵敏、快速、不耗样品，低浓度的盐类不干扰。5微量凯式定氮法：根据蛋白质的平均含氮量为16%，因而，测得1g蛋白氮，相当于6.25g蛋白质。2、简述不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳中的三个不连续及三种物理效应。答：三个不连续：1凝胶由上下两层凝胶组成，两层凝胶的孔径不同；2缓冲液离子组成及各层凝胶的pH不同；3在电场中构成不连续的电位梯度。三种物理效应：1电荷效应：酶蛋白按其所带电荷的种类及数量，在电场作用下向一定的电极以一定的速度泳动。2分子筛效应：分子量、形状不同的分子在经过凝胶孔径经过中，遭到的阻力不同，因而移动速率不等。3浓缩效应：使待分离样品中的各组分在浓缩胶中被压缩成层，使原来很稀的样品得到高度的浓缩。3、试分析影响电泳的主要因素有哪些？答：1带电颗粒的大小和形状：颗粒越大，电泳速度越慢，反之越快；2颗粒的电荷数：电荷越少，电泳速度越慢，反之越快；3电场强度：电场强度越小，电泳速度越慢，反之越快；4溶液的pH值：影响被分离物质的解离度，离等电点越近，电泳速度越慢，反之越快；5溶液的粘度：粘度越大，电泳速度越慢，反之越快；6离子强度：离子强度越大，电泳速度越慢，反之越快；7电渗现象：电场中，液体相对于固体支持物的相对移动；8支持物筛孔大小，孔径越小，电泳速度越慢，反之越快。