酸枣仁粉碎前后对酸枣仁皂苷A含量和安神成效的影响.docx

酸枣仁粉碎前后对酸枣仁皂苷A含量和安神成效的影响酸枣仁粉碎前后对酸枣仁皂苷A含量和安神成效的影响【摘要】目的研究在水提取经过中酸枣仁粉碎前后其所含有效成分酸枣仁皂苷A的溶出以及安神成效能否有差异。方法采用HPLC法,AgilentC18色谱柱(250mm×4.6mm,5m),流动相：甲醇-水(6535),流速1.0mL/min；蒸发光散射检测器；漂移管温度110；载气流速2.4L/min。采用协同睡眠、自主活动等指标,观察粉碎的酸枣仁与未粉碎的酸枣仁对小鼠的作用。结果未经粉碎的酸枣仁在其水提样品中未检测出酸枣仁皂苷A,粉碎后的酸枣仁在其水提样品中的酸枣仁皂苷A含量为0.0090%；粉碎后的酸枣仁对戊巴比妥钠有较好的协同睡眠作用。结论临床应用酸枣仁宜粉碎。【关键词】酸枣仁；酸枣仁皂苷A；安神作用Keywords：SemenZiziphiSpinosae；jujubasideA；tranquilization酸枣仁为鼠李科植物酸枣ZiziphusjujubaMill.var.spinosa(Bunge)的枯燥成熟种子,始载于（神农本草经）,具有补肝宁心、敛汗生津的作用,用于虚烦不眠、惊悸多梦、体虚多汗、津伤口渴等证1,是临床中医常用的安神要药。当代研究以为,酸枣仁皂苷A为酸枣仁的活性成分,具有较强的镇静、催眠作用2。目前,北京各大医院中药房所使用的酸枣仁有的是经过粉碎的,有的没有粉碎。为了研究粉碎与未粉碎的酸枣仁在水煎煮经过中有效成分含量以及安神作用能否有差异,更好的指导临床合理用药,我们进行了下面试验。1材料1.1试药酸枣仁(炒)购于北京同仁堂(亳洲)饮片有限责任公司；酸枣仁皂苷A购自中国药品生物制品检定所(批号110734-200407)。甲醇为色谱纯,水为去离子水,其余试剂均为分析纯。安宁,天津力生制药股份有限公司,批号0703004；戊巴比妥钠,北京化学试剂公司,批号020919。1.2动物昆明种小鼠,体重1822g,雌雄各半,中国人民当兵的人总医院动物实验中心,动物合格证号：SCXK(京)2004-0001。1.3仪器Agilent1100高效液相色谱仪,Alltech蒸发光散射检测器,G1311A泵,手动进样器,G1379A脱气泵,AgilentchemstationforLC工作站；JZZ98-CM动物自主活动监测仪。2酸枣仁皂苷A含量测定2.1色谱条件AgilentC18色谱柱(250mm×4.6mm,5m),流动相为甲醇-水(6535),流速1.0mL/min,蒸发光散射检测器,漂移管温度110,载气流速2.4L/min。2.2对照品溶液的制备取酸枣仁皂苷A对照品适量,精细称定,置10mL容量瓶中,加甲醇溶解,定容,制成0.52mg/mL的酸枣仁皂苷A溶液。2.3供试品溶液的制备挑选颗粒饱满、大小均匀的酸枣仁(炒),用铜铳粉碎后,过12目筛。精细称取粉碎后的酸枣仁100g,加蒸馏水回流提取3次,第次加7倍量溶媒回流1.5h,第2次加6倍量溶媒回流1h,第3次加5倍量溶媒回流1h。提取液过滤,合并,浓缩至每毫升溶液含0.25g原药材。将浓缩液以2000r/min离心20min,取上清液,上SP825大孔吸附树脂柱,先用4BV蒸馏水洗脱,水洗脱液弃去,再用4BV的80%乙醇洗脱,采集80%乙醇洗脱液,回收乙醇至无醇味,经冷冻枯燥后,得枯燥物。精细称取枯燥物适量,加甲醇溶解,定容至5mL容量瓶中,得样品,备用。挑选颗粒饱满、大小均匀的酸枣仁(炒),不经粉碎,精细称取100g,按样品的制备经过,得样品,备用。挑选颗粒饱满、大小均匀的酸枣仁(炒),经粉碎机粉碎后,精细称取10g。用石油醚回流脱脂2次,石油醚弃去,药渣挥去石油醚至干；再用甲醇回流提取2次,第1次用8倍量溶媒回流2h,第2次用7倍量溶媒回流1.5h。提取液过滤,合并,用旋转蒸发仪回收甲醇至干,再加甲醇少量屡次溶解枯燥提取物,转移至10mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,得样品,备用。2.4线性关系考察精细汲取对照品溶液(0.52mg/mL)2、4、6、8、10、12L,按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积为纵坐标,以酸枣仁皂苷A进样量为横坐标进行线性回归,得回归方程：Y1.2888X5.8898,r0.9993。结果表明,酸枣仁皂苷A在1.046.24g范围内呈良好的线性关系。2.5精细度试验精细汲取对照品溶液,连续测定5次,酸枣仁皂苷A色谱峰面积的RSD0.87%,表明精细度良好。2.6重复性试验取同一批次酸枣仁药材,根据“2.3项下样品制备方法制备供试品溶液5份,测定酸枣仁皂苷A含量,结果平均含量为0.00903%,RSD1.59%,表明重复性良好。2.7稳定性试验取同一供试品溶液,于0、30、60、120、240、480min分别进样,酸枣仁皂苷A色谱峰面积的RSD1.61%,表明供试品在8h内测定,结果稳定。2.8加样回收率试验采用加样回收法,精细称取5份已知含量的样品,分别参加一定量的对照品,按供试品溶液制备方法和色谱条件进行测定并计算回收率。结果见表1。表1加样回收率试验结果(略)2.9样品测定将各供试样品溶液按上述色谱条件测定并计算含量。结果表明,未经粉碎的酸枣仁,用水回流提取,其样品中未检测到酸枣仁皂苷A；粉碎后的酸枣仁用水或甲醇提取,其样品中均检测到酸枣仁皂苷A,但前者的含量远低于后者。结果见表2。表2样品中酸枣仁皂苷A的含量测定结果(略)3对安神成效的影响3.1与戊巴比妥钠协同睡眠试验取昆明种小鼠40只,雌雄各半,按性别、体重随机分为4组,每组10只。其中空白对照组每只给予等体积的生理盐水,阳性对照组(安宁组)给予安宁水溶液灌胃,两个试药组分别给予粉碎后的酸枣仁及未粉碎的酸枣仁提取液,连续给药10d。于末次给药前8h禁食,前1h禁水,末次给药30min后,腹腔注射戊巴比妥钠40mg/kg,观察并记录各组小鼠睡眠持续时间。结果见表3。表3受试药物对小鼠戊巴比妥钠催眠作用的影响(略)注：与阴性对照组相比,*P较差异有统计学意义。本研究从化学成分和药效作用两方面证明,粉碎与未粉碎的酸枣仁在水煎煮经过中其有效成分的溶出和安神药效作用均有一定的差异。因而,临床酸枣仁的应用还是宜粉碎。在小鼠自主活动影响的实验中,给药后30min,安宁组自主活动与对照组比拟差异有统计学意义,酸枣仁粉碎组和未粉碎组与对照组比拟,固然均能减少自主活动数量,但无统计学意义。这讲明酸枣仁镇静作用较弱,其安神成效可能还与别的作用有关,这也符合中药多成分、多途径、多靶点的作用特点。为了考察试验所用酸枣仁中酸枣仁皂苷A的绝对含量,同时考察水提取经过中酸枣仁皂苷A的转移率,故制备了样品。样品和样品相比拟,前者的含量远低于后者。一方面是粉碎的粒度不同,样品所用的酸枣仁是过40目筛,样品所用的酸枣仁是过12目筛。另一方面是提取溶媒不同,酸枣仁皂苷A属于达玛烷型四环三萜皂苷类化合物,皂苷元不溶于水,能溶于有机溶剂3。通过分析酸枣仁皂苷A的化学构造可知,由于糖分子的引入,使酸枣仁皂苷A极性增大,可溶于水,但由于构造中内酯环和分子内氢键的作用,酸枣仁皂苷A极性仍然较弱,进而使酸枣仁皂苷A更易溶于甲醇等溶剂中。在含量测定的试验经过中,曾选择乙腈-水系统作为流动相,但溶剂峰的干扰相对较大,不如用甲醇-水系统的效果好。【参考文献】1国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)S.北京：化学工业出版社,2005.274.2封洲燕,郭殿武,苏松,等.酸枣仁皂甙A镇静和抗惊厥作用试验J.浙江大学学报(医学版),2002,31(2)：103106.3陆蕴如.中药化学M.北京：学苑出版社,1995.241.