选一21微生物的实验室培养ppt课件.pptx

特点：结构相当简单,个体多数十分微小。微生物包括哪五类：放线菌真菌原生动物微生物基础知识SARS病毒、 禽流感病毒、是由一个核酸分子（是由一个核酸分子（DNADNA或或RNARNA）与蛋白质构成）与蛋白质构成的非细胞形态的营寄生生活的生命体。的非细胞形态的营寄生生活的生命体。病毒病毒细菌细胞细菌细胞，通常用适当染料通常用适当染料后后显微镜观察显微镜观察 常见的三种细菌典型形态常见的三种细菌典型形态葡萄球菌葡萄球菌大肠杆菌大肠杆菌霍乱弧菌霍乱弧菌细菌细菌结构：结构：原核细胞原核细胞分支状的菌丝（营养分支状的菌丝（营养（基内）菌丝、气生菌丝）基内）菌丝、气生菌丝）链霉素、土霉素、四环素、链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素氯霉素、红霉素、庆大霉素 应用:真菌真菌是一种是一种真核生物真核生物 ，通常又分为三类，即，通常又分为三类，即酵母菌酵母菌、霉菌霉菌和和蕈菌蕈菌（大型真菌）（大型真菌）是动物界中最低等的一类真核是动物界中最低等的一类真核单细胞动物单细胞动物，个体由单个细胞组成。个体由单个细胞组成。 原生动物原生动物草履虫草履虫大变形虫大变形虫课题1 微生物的实验室培养（以培养大肠杆菌为例）（以培养大肠杆菌为例）一、需要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件二、需要确保其他微生物无法混入配制培养基进行无菌操作在实验室中培养纯净的微生物，需要为培养物提供怎样的条件呢？一、基础知识：一、基础知识：（一）培养基（一）培养基 1.概念：概念： 2. 2. 培养基的类型和用途培养基的类型和用途液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基据物理性质分据物理性质分天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基据化学成分分据化学成分分选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基据用途分据用途分 培养基培养基是人们按照是人们按照微生物对营养物质微生物对营养物质的的不不同需求同需求，配制出，配制出供其生长繁殖供其生长繁殖的的营养基质营养基质。半固体培养基半固体培养基标准标准培养基类型培养基类型配制特点配制特点主要应用主要应用物理性质物理性质固体培养基固体培养基半固体培养基半固体培养基液体培养基液体培养基化学组成化学组成合成培养基合成培养基天然培养基天然培养基目的用途目的用途选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基加入琼脂较多加入琼脂较多加入琼脂较少加入琼脂较少不加入琼脂不加入琼脂添加（或缺少）某添加（或缺少）某种化学成分种化学成分添加某种指示剂或添加某种指示剂或化学药剂化学药剂由已知成由已知成分配制分配制而而成成，培养基，培养基成分明成分明确确菌种的分离菌种的分离菌种的鉴别菌种的鉴别菌种菌种分离分离,鉴定鉴定,计数计数菌种保存菌种保存工业生产，连工业生产，连续培养续培养菌种分类、鉴菌种分类、鉴定定工业生，产降工业生，产降低成本低成本由天然成分配制而由天然成分配制而成成，培养基，培养基成分不成分不明确明确选择培养基选择培养基加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物鉴定培养基：鉴定培养基：鉴定所培养生物的类型鉴定所培养生物的类型紫黑色，并带有紫黑色，并带有金属光泽金属光泽固体培养基：固体培养基：菌落菌落2.2.特征：特征：大小、形状、光泽度、大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。颜色、透明度等。3.3.功能：功能：1.1.定义：定义：菌落菌落鉴定菌种鉴定菌种的重要依据的重要依据单个单个或少数菌体或少数菌体在固体培养基上在固体培养基上大量繁殖大量繁殖子细胞群体子细胞群体金黄色葡萄球菌菌落路邓葡萄球菌3 3、培养基的营养构成、培养基的营养构成淀粉琼脂培养基淀粉琼脂培养基( (培养放线菌用培养放线菌用) )可溶性淀粉可溶性淀粉 20g 20gKNOKNO3 31g1gNaCl0.5gNaCl0.5gK K2 2HPOHPO4 40.5g0.5gMgSOMgSO4 40.5g0.5gFeSOFeSO4 40.01g0.01g琼脂琼脂 20g 20g水水 1000ml 1000mlpH 7.27.4pH 7.27.4pH 7.07.2pH 7.07.2 不管哪种培养基，一般都含有水、水、碳源、碳源、和氮源、无机盐氮源、无机盐；3 3、培养基的营养构成、培养基的营养构成另外还需要满足微生物生长对pH、氧氧气气以及特特殊营养物质（殊营养物质（如生长因子）如生长因子）等的要求。 碳源碳源 （1）概念：概念：（2 2）不同微生物所利用的碳源不同）不同微生物所利用的碳源不同异养型：异养型：自养型：自养型：含碳有机物（有机碳）含碳有机物（有机碳）含碳无机物（无机碳）含碳无机物（无机碳）3 3、培养基的营养构成、培养基的营养构成糖类（主要）、糖类（主要）、蛋白质蛋白质、脂肪酸脂肪酸碳酸盐，碳酸氢盐，二氧化碳等碳酸盐，碳酸氢盐，二氧化碳等构成细胞物质和一些代谢产物构成细胞物质和一些代谢产物异养微生物的能源异养微生物的能源（3）作用：）作用：凡是能为微生物提供凡是能为微生物提供碳元素碳元素的营养物质的营养物质无机氮源：无机氮源：N N2 2、NHNH4+4+、NONO3-3-、NHNH3 3等等。有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等。氨基酸等。凡是能够为微生物提供凡是能够为微生物提供N N元素元素的营养的营养物质。物质。主要用于合成蛋白质、核酸及含主要用于合成蛋白质、核酸及含N N的的代谢产物。代谢产物。氮源（1）概念：来源：作用：生长因子常见的生长因子：概念：作用：微生物生长不可缺少的微量有机物。酶和核酸的组成成分。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。（二）无菌技术（二）无菌技术1.1.定义：定义： 无菌技术无菌技术泛指泛指在培养微生物的操作中，在培养微生物的操作中，所有所有防止杂菌污染的方法防止杂菌污染的方法。（1 1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒毒 ；（2 2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌 ；（3 3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；附近旁进行；（4 4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。 应该从哪些方面避免杂菌污染呢？应该从哪些方面避免杂菌污染呢？（1 1）消毒和消毒和灭菌的灭菌的定义：定义：2.2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别 比较比较项项理化因素的理化因素的作用强度作用强度消灭微生物的消灭微生物的数量数量芽孢和孢子能芽孢和孢子能否被消灭否被消灭消毒消毒灭菌灭菌较为温和较为温和部分生活状部分生活状态的微生物态的微生物不能不能强烈强烈全部微生物全部微生物能能（2 2）区别：）区别：有些细菌在一定的条件下，有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的细胞里面形成一个椭圆形的休眠体休眠体，叫做芽孢。，叫做芽孢。细菌、原生动物、真菌和植物细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的等产生的一种有繁殖作用的生生殖细胞殖细胞。能直接发育成新个体。能直接发育成新个体。 3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法1、煮沸消毒法：2、巴氏消毒法：3、化学药物消毒法:4、紫外线消毒：消毒灭菌方法消毒灭菌方法有哪些？有哪些？分别适用于哪些分别适用于哪些操作对象？操作对象？如何操作？如何操作？紫外线照射30min70-75 下煮30min或 80 下煮15min用75%酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源；适量喷洒石碳酸或煤酚皂溶液消毒100煮沸5-6min 1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1） 培养细菌用的培养基与培养皿（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管（3） 实验操作者的双手无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。消毒 灭菌 本实验采用牛肉膏蛋白胨固体培养基进本实验采用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的行大肠杆菌的纯化培养纯化培养。1 1、制备、制备牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨固体固体培养基培养基2 2、纯化大肠杆菌、纯化大肠杆菌二、实验操作二、实验操作( (以培养大肠杆菌为例以培养大肠杆菌为例) )实验过程分为两个阶段：实验过程分为两个阶段：二、实验操作二、实验操作( (以培养大肠杆菌为例以培养大肠杆菌为例) )制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 可用手触摸锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手时，就可以倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。5.如何检验制备的培养基灭菌是否合格？如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温112 2天，无菌落生长，说明培养基的制备成天，无菌落生长，说明培养基的制备成功；否则需要重新制备。功；否则需要重新制备。微生物的纯化：微生物的纯化：将待检测将待检测微生物样品微生物样品通过划线或涂布通过划线或涂布接种在固接种在固体培养基上体培养基上，样品中的，样品中的每一个细胞或孢子每一个细胞或孢子都可都可以以生长繁殖生长繁殖形成单个菌落形成单个菌落。将单个菌落将单个菌落接种到斜面培养基上，接种到斜面培养基上，经过培养后，经过培养后，即可得到一个微生物的纯种即可得到一个微生物的纯种。平板划线的操作（二）纯化大肠杆菌 1.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 以免接种环温度太高，杀死菌种。2.不要划破培养基的原因？为了不影响对菌落形态的观察和特征鉴别；一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的。3.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？ 操作的第一步灼烧接种环是： 每次划线前灼烧接种环是：为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 为了杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。 4.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。5.在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。6.描述什么是平板划线法？3 3系列（梯度）稀释操作系列（梯度）稀释操作 9mL9mL水水9mL9mL水水9mL9mL水水9mL9mL水水9mL9mL水水9mL9mL水水1mL1mL10101 1 10102 2 10103 3 10104 4 10105 5 10106 6 1mL1mL1mL1mL1mL1mL1mL1mL1mL1mL稀释涂布平板法操作过程分稀释涂布平板法操作过程分两个两个步骤步骤，即，即系列系列稀释操作稀释操作和和涂布平板操作涂布平板操作。涂布平板操作涂布平板操作 1.涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。2.描述什么是稀释涂布平板法？9mL9mL水水9mL9mL水水9mL9mL水水9mL9mL水水9mL9mL水水9mL9mL水水1mL1mL10101 1 10102 2 10103 3 10104 4 10105 5 10106 6 1mL1mL1mL1mL1mL1mL1mL1mL1mL1mL系列稀释操作系列稀释操作 3.平板划线法和稀释涂布平板法为什么能纯化微生物？通过连续划线，使细菌数目随着划线次数通过连续划线，使细菌数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终得到单个细菌繁的增加而逐步减少，最终得到单个细菌繁殖而来的菌落。殖而来的菌落。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。养基表面形成单个菌落。平板划线法和平板划线法和稀释涂布平板稀释涂布平板法的法的操作方法操作方法各不相同各不相同。但但技术核心都技术核心都是要防止杂菌是要防止杂菌污染，保证培污染，保证培养物的纯度养物的纯度。菌落分布并不均匀，不易分离出单个菌落，不能计数菌落分布均匀，便于计数斜面接种斜面接种穿刺接种穿刺接种保持菌种的纯净保持菌种的纯净1mL1mL甘油灭菌甘油灭菌+1mL+1mL菌液，充分混合菌液，充分混合后，于后，于-20-20的冷冻箱中保存的冷冻箱中保存（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温12d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。微微生生物物的的培培养养基础基础知识知识实验操作实验操作结果分析与评价结果分析与评价培养基培养基定义：定义：分类：分类：人们按照微生物对营养物质的人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁不同需求，配置出供其生长繁殖的营养物质殖的营养物质固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基无菌技术无菌技术培养微生物的操作中，所有防培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法止杂菌污染的方法定义：定义：消毒与灭菌消毒与灭菌常用消毒灭菌方法常用消毒灭菌方法制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌课堂小结课堂检测课堂检测1 1、有关微生物营养物质的叙述中，正确的是、有关微生物营养物质的叙述中，正确的是（ ）A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量D编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2O O100ml100ml2 2、右表是某微生物、右表是某微生物培养基成分，请据此培养基成分，请据此回答：回答：（1 1）右表培养基可）右表培养基可培养的微生物类型培养的微生物类型是是 。自养型微生物自养型微生物 （3 3）若除去成分，加入（）若除去成分，加入（CHCH2 2O O），该培养基可），该培养基可用于培养用于培养 。（4 4）表中营养成分共有）表中营养成分共有 类。类。（5 5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是前，要进行的是 。（6 6）用于菌种鉴定，应该增加的成分）用于菌种鉴定，应该增加的成分是是 。固氮微生物固氮微生物 3 调整调整pHpH 琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂） 2011河南高考河南高考有些细菌可分解原油，从而消除由原有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：解原油的菌株。回答问题：（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以释液接种于以 为唯一碳源为唯一碳源的固体培养基土，从功能上讲，该培的固体培养基土，从功能上讲，该培养基属于养基属于 培养基。培养基。原油原油选择选择（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，采用的接种方法有两种，即即 和和 。（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈说明该菌株落周围分解圈的大小，分解圈说明该菌株的降解能力的降解能力 。平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法强强（4）通常情况下，在微生物培养）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌烧灭菌、 和和 无菌无菌技术要求试验操作应在酒精灯附近技术要求试验操作应在酒精灯附近进行，以避免周围环境中微生物的进行，以避免周围环境中微生物的污染。污染。 。干热灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 例:某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：（1）分离纯化乳酸菌时，首先需要用_对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是:无菌水 在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的乳酸菌将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 （2）推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有_和_。分离纯化时应挑选出_的菌落作为候选菌。（3）乳酸菌在 -20长期保存时，菌液中常需要加入一定量的_（填“蒸馏水”、“甘油”或“碳酸钙”）。中和乳酸菌代谢过程中产生的乳酸 在平板上有溶钙圈甘油 利于乳酸菌的识别和分离