天然药物实验报告(共8页).docx

精选优质文档-倾情为你奉上天然药物化学实验实验报告实验一、槐米中芦丁的提取、精制和鉴定（一）实验目的要求1. 制备芦丁，供药用。2. 通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。3. 熟悉重结晶技巧。4. 了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。（二）实验的基本原理1. 芦丁的提取原理利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法）。也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进行提取。2. 芦丁的分离原理利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。也可采用醇溶水沉法进行精制。3. 芦丁的鉴定原理（1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。（2）通过专属的化学显色反应（如三氯化铝显色反应），确定芦丁的成分类型（黄酮类）。(三)实验内容1.用碱提法、水提法、醇提法提取槐米中芦丁。2.用酸沉法和冷却过饱和法分离芦丁。3.溶剂重结晶精制芦丁。4.薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁(四) 实验药材仪器与试剂1. 实验药材 槐米20g。2. 仪器：磁力加热搅拌器、旋转蒸发仪、粉碎机、500ml烧杯，1000ml烧杯，50ml烧杯，250ml园底烧瓶、500ml园底烧瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml锥形瓶、50ml锥形瓶、研钵、移液管、减压过滤装置，布氏漏斗，抽滤瓶、层析缸等。3. 试剂：硼砂、氧化钙、 HCI、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、滤纸、PH试纸等。（五）实验方法与注意事项1. 芦丁的提取（2）方法二（水提取法）称取槐米粗粉20g，在研钵中研碎后放入500ml烧瓶中，（注意小心沿侧边放入磁子），加水200ml，用磁力加热搅拌器加热煮沸30min，（设定温度为105°C，当加热到103°时，观察到：液体开始沸腾，有气味，有泡沫产生。药材翻滚，圆底烧瓶壁有水滴。且随着时间的增多，泡沫越来越多，加热20min左右后，泡沫丰富。稍调低转速。），趁热过滤。残渣同法操作一次，合并两次滤液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，（观察到：析出后，有黄色晶体，上清液为棕色，香卞甘味。抽滤时，固体为淡黄色。烘干后，呈黄绿色）。减压抽滤，用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶，抽干，得粗制芦丁，干燥，称重，计算得率。（滤纸+漏斗145.02g，滤纸+漏斗+样品 146.617g，故知样品为1.597g，得率为7.99%）（附加步骤：旋转蒸发，浓缩至50ml，观察是否有残余芦丁。其中，重点注意旋转蒸发仪的使用。组装好仪器后，关闭玻璃气阀，打开真空泵，至0.05Mpa时，打开加热开关，旋转开关等。然后开始旋转蒸发，过程中，要耐心等待，并时刻注意蒸发液体，防止喷溅出蒸发瓶，造成实验失败。）2. 芦丁的精制（1）方法一（醇-水重结晶法）取粗制芦丁1g，(实际上为1.008g，其中，粗制芦丁为淡黄色固体，有香味)，置于250ml园底烧瓶中，加90%(实际为80%)乙醇30ml加热回流15分钟，趁热抽滤。（滤液为黄色透明油状液体）。滤液置250ml烧杯中，向滤液中加蒸馏水（约34倍量）至溶液呈明显混浊，室温放置，抽滤得精致芦丁。用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶，晾干，称重。（滤纸+漏斗29.69g，滤纸+漏斗+样品30.20g，故知样品为0.51g）。3.鉴定（1）点滴显色反应 取芦丁的甲醇溶液（供试液）分别点在滤纸上，挥去溶剂，然后分别加下列试剂，观察显色前后颜色及荧光的变化。供试液：芦丁的甲醇溶液。显色剂：2%三氯化铝乙醇溶液在紫外灯下365nm观察显色前后颜色及荧光的变化（2）薄层色谱鉴定吸附剂：硅胶GF254薄层板（5.0cm X 10.0cm）。样 品：自制芦丁（用甲醇溶解，浓度约1mg/ml）对照品：芦丁对照品的甲醇溶液。展开剂：三氯甲烷-甲醇-甲酸（730.5）显 色：a.先在可见光下观察，然后在紫外光下观察（365nm紫外灯下观察）（观察到两点，呈深色）b.喷三氯化铝试剂前后观察颜色变化（365nm紫外灯下观察）（对照组为浅褐色，实验组为黄绿色，有拖尾）实验结果记录：观察斑点颜色，记录图谱并计算Rf值。Rf样品=3.00/5.75=0.522总结：1.实验应细心，耐心，如旋转蒸发时。2从失败中总结经验，改进实验的方法，为以后积累经验。3.实验的过程中，需要团队合作，从不同的方面来注意、分析实验，得到最好的结果。5 .注意事项(1) 硼砂因能与芦丁中的邻二酚羟基结合，起保护邻二酚羟基，不被氧化破坏的作用。实验证明，提取时加入硼砂，产品的质量会好些。(2) 石灰乳既能达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除去槐米中大量的粘液质和酸性树脂（形成钙盐沉淀），但PH不能过高和长时间煮沸，因为会导致芦丁的水解而开环和形成钙鳌合物，影响产品的质量和产率。(3) PH过低（酸性太强）会使芦丁形成洋盐而收率降低。(4) 称量芦丁时，先将带滤纸的漏斗称重，再将盛样品的带滤纸的漏斗称重，差重即为样品的重量。实验二 牡丹皮中丹皮酚的提取、分离与鉴定 (一)实验目的要求1.掌握挥发油的一般提取和鉴定方法。2掌握用水蒸气蒸馏法从牡丹皮中提取丹皮酚的方法。3掌握丹皮酚的色谱检识和定性鉴定方法。(二)实验的基本原理利用挥发油与水不相混合，当受热后，二者蒸气压的总和与大气压相等时，溶液即开始沸腾。继续加热，则挥发油可随水蒸气蒸馏出来。丹皮酚具有挥发性，可随水蒸气蒸馏，又因在冷水中难溶，故放冷后析出结晶。(三)实验内容1.用挥发油提取器提取牡丹皮中的丹皮酚。2.溶剂重结晶或引种结晶纯化丹皮酚。3三氯化铁显色反应和薄层色谱法鉴定丹皮酚。(四) 实验药材仪器与试剂 1.实验药材 牡丹皮20g。2.仪器：水蒸气蒸馏装置（包括挥发油提取器、蒸馏瓶500ml、回流冷凝管）、粉碎机、500ml烧杯，量筒，减压过滤装置， 滤纸，布氏漏斗，层析缸等。3.试剂：氯化钠、三氯化铁、盐酸、乙醇、环己烷、乙酸乙酯等。4材料：GF254硅胶薄层板（五）实验方法及注意事项1.丹皮酚的提取取牡丹皮20g（实际为20.066g），粉碎，置250ml圆底烧瓶(改为“三口瓶”)中，加100ml水、2ml乙醇和8g氯化钠(实际为8.043g)，(装仪器时，注意凡士林的涂抹方法，不是全涂抹于塞子，而是口与塞各涂一半，注意方向)，振摇混合后浸润1h，连接挥发油提取器并加注冷凝水，自冷凝管上端加水使充满测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。（过程中现象为：乳白色粉末，混合后，颜色变深，上有咖啡色浅浮沫），水浴回流收集蒸馏液（共收集蒸馏液约60ml）。将蒸馏液放冷，分层，开启测定器下端活塞使油层下降至其上端与刻度“0”线平齐，读取挥发油量，计算百分含量。（出现问题：开始加热时，油层在下，加热全部压回，重新开始。后来，温度传感器在瓶中与磁子相吸，处理过程中，由于频繁开塞且时间过长，导致大量有效挥发性油物质从侧口挥发，最终未能成功收集到大量油性物质。实验失败！）缓缓放出水分，接收挥发油。挥发油静置过夜，有白色针状结晶析出，滤取结晶，干燥，称重。如结晶不纯，可加入95%乙醇至全部溶解，（约为粗晶的15倍），抽滤，滤液中加入4倍量的蒸馏水，使溶液呈乳白色，静置后则有大量白色针状结晶析出。（由于上一步的失败，未进行此步骤，而是与“第七组”共同分享了他们的成果，从而顺利进行实验的下一步。在此表示感谢！）2.丹皮酚的.鉴定（1）薄层色谱鉴定吸附剂：硅胶GF254薄层板（5.0cm X 10.0cm）。样 品：自制样品的乙醇液，丹皮酚对照品乙醇溶液展开剂：环己烷-乙酸乙酯-（3：1）或环己烷-三氯甲烷-无水乙醇（7：3：1）显 色：喷5%三氯化铁乙醇溶液或盐酸酸化的5%三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰实验结果记录：观察斑点颜色，记录图谱并计算Rf值。Rf样品=4.90/7.10=0.690总结：1.本实验出现问题：温度传感器在瓶中与磁子相吸，处理过程中，由于频繁开塞且时间过长，导致大量有效挥发性油物质从侧口挥发，最终未能成功收集到大量油性物质。实验应细心，耐心，不可操之过急。2 .实验的过程也是探索的过程，实验失败，得不到产物，需要我们从失败中总结经验，防止再发生错误；改进实验的方法，寻找合适的方法。3.实验指导及注意事项1.提取完毕后，须待油水完全分层，在接受挥发油时，应注意尽量避免带出水分。2.产品应在干燥、密闭、避光条件下保存（注意，严禁放入烘箱中烘干）。实验三 黄柏中小檗碱的提取、分离与鉴定实验部分实验目的要求学习和掌握小檗碱的结构特点和特殊的理化性质，及小檗碱的一般提取精制方法。实验的基本原理小檗碱的提取原理根据水溶性季铵碱在乙醇和碱水中溶解度大性质，利用乙醇回流法和碱水提取法进行提取。小檗碱的分离原理(1)利用小檗碱的盐酸盐在水中溶解度小（1：500），采用盐析法使小檗碱沉淀析出，达到纯化的目的。(2)利用盐析法分离小檗碱实验内容1.用乙醇回流提盐析法、醇索氏提盐析法和碱渗漉提盐析法提取黄柏中盐酸小檗碱。2.溶剂重结晶精制盐酸小檗碱。3.薄层显色反应鉴定盐酸小檗碱实验药材仪器与试剂1.实验药材 黄柏30g。2.仪器：250ml烧瓶、500ml烧杯，冷凝管、渗漉筒250ml，粉碎机、减压过滤装置、纱布、漏斗，层析缸等。3.试剂：氧化钙，氨水，NaCI，盐酸、H2SO4，三氯甲烷，甲醇，乙醇，改良碘化铋钾等。实验方法小檗碱的提取（2）方法二（醇索氏提盐析法）称取黄柏30g(实际上，试验中取15g)，（用粉碎机）粉碎成粗粉，用滤纸包成筒状，置于索氏提取器中，（由于索氏提取器的内径较小，在装入粗粉的过程中要注意药粉不能溢出，注意最后药品不要高于管口），烧瓶中加入210ml的95%乙醇，（实验中由于判断失误，开始只加了105ml，后来在过程中，由于虹吸较难，补加了一部分乙醇，大约70多ml），（水浴提取开始时，未加水浴锅的盖，后来及时加盖，并用棉花裹住索氏提取器侧管，防止因水蒸气影响过热），（过程中，观察到：提取液刚开始为黄色液体，随着提取次数增多，颜色变淡），水浴提取至无颜色。乙醇提取液浓缩至糖浆状(浓缩采用旋转蒸发仪，现象为：随着蒸发的进行，液体减少，颜色变深)，加水约80ml（实际为40ml），滤出沉淀（树脂等杂质），滤液加入15%NaCI（W/V）(实际为6.05g)，溶解后（为了加快溶解，可以把加入NaCI的滤液放在水浴上方，并用玻璃棒搅拌），放置过夜。析出沉淀，(沉淀为黄色固体，溶液为红棕色)，过滤沉淀物（盐酸小檗碱）。烘干，称重。（由于电子天平仪器的故障，第一次测量得到负质量。除去漏斗，重新采用分析天平测得：样品+滤纸为0.4603g，滤纸为0.54516g，故粗略得样品0.0087g。虽产量较低，但也是所有实验组中唯一成功的一组，得到了经验：。盐酸小檗碱的精制（2）方法二：取上述盐酸小檗碱粗品全部,放入适宜的小锥形瓶（实际为烧瓶）中，加25倍量沸水，水浴加热溶解，趁热过滤，滤出不溶物，滤液在65时加浓盐酸调PH23，放置12h，析晶，用蒸馏水洗至PH4.8，80以下干燥，得精制盐酸小檗碱，称重，计算得率。（由于粗制得的样品较少，未进行此步骤，直接进入鉴定）。鉴定（1）检识反应 取盐酸小檗碱(浅黄色)少许，加蒸馏水3ml（10ml），缓缓加热，（小檗碱逐渐溶解，成浅黄色液体），溶解后加氢氧化钠试液2滴（10滴），显橙色，溶液放冷，过滤，取澄清滤液，加丙酮4滴，即发生混浊。（加入丙酮后可观察到黄色浑浊）放置，生成黄色小檗碱沉淀。 （2）薄层色谱鉴定吸附剂：硅胶GF254薄层板（5.0cm X 10.0cm）。样 品：自制盐酸小檗碱（用甲醇溶解）展开剂：三氯甲烷-甲醇-氨水（1440.5）显 色：a.先在可见光下观察，（观察到点呈黄色，由于产品不纯，样品点后面还有拖尾现象）。然后在紫外光下观察。（可以明显的观察到两点的位置，为明显的黑蓝色，拖尾现象很明显）。 b.喷改良碘化铋钾液显色，前后观察颜色变化（由黄色变为黄棕色）。实验结果记录：观察斑点颜色，记录图谱并计算Rf值。Rf样品=4.10/7.60=0.539Rf对照=3.40/7.60=0.741 （可看出，在纯度上与对照品还是存在一定的差距）。总结：1.实验应细心，耐心，不可操之过急。2从实验得率低中，知道了药物中要提取有用成分含量是很少的，析晶过程需要的时间很长，故药物总是如此之贵。3. 实验的过程也是探索的过程，每次实验都有可能失败，得不到产物或者产物量，需要我们从失败中总结经验，改进实验的方法，寻找到最合适的方法。4.实验的过程中，需要团队合作，不同人从不同的方面来分析实验，总结出误差来源。实验指导及注意事项1.从黄柏中提取小檗碱时，宜采用石灰浸泡，使所含的大量粘液质形成钙盐难溶于水而不被提出。2.在精制盐酸小檗碱的过程中，加热煮沸以后，应迅速抽滤，以免溶液在过滤过程中变冷而析出盐酸小檗碱结晶，造成产量损失。3.加热溶解样品时温度不宜太高，时间不宜太长，否则很容易析出固体，影响晶形。4.小檗碱的干燥温度不宜太高，否则产品的颜色加深，影响产品的质量。5.展开剂中加氨水的量应严格控制，所用的容器一定要干，展开剂配好后不能产生混浊。专心-专注-专业