高三一轮复习生物：基因工程专项练习.docx

基因工程 专项练习一、选择题1.作为基因的运输工具载体，必须具备的条件之一及其理由是（ ）A.能够在受体细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因B.具有多个限制酶切割位点，以便于目的基因的表达C.具有某些标记基因，以使目的基因能够与其结合D.对受体细胞无伤害，以便于重组DNA的鉴定和选择2.科学家通过基因工程的方法，能使马铃薯块茎含有人奶主要蛋白。以下有关基因工程的叙述错误的是（ ）A.在基因工程中，PCR技术可用于任何目的基因的获取，且能迅速获得大量目的基因B.启动子对于目的基因在块茎中的表达是不可缺少的C.应用PCR技术，可检测出转基因马铃薯植株中是否存在目的基因及其转录产物D.用同一种限制酶，分别处理质粒和含目的基因的DNA，可用DNA连接酶连接形成重组DNA分子3.作为基因工程中的“分子运输车”载体，应具备的条件是（ ）必须有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上载体必须具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制必须带有标记基因，以便进行重组后的筛选必须是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去A.B.C.D.4.基因工程自20世纪70年代兴起后得到了飞速发展，目前已经成为生物科学的核心技术，下列有关基因工程的应用的描述正确的是（ ）A.利用农杆菌转化法培育得到的转基因植物，可能会引起基因污染B.从人类基因组文库中获得胰岛素基因导入大肠杆菌，可获得具生物学功能的胰岛素C.用基因枪法将肠乳糖酶基因导入奶牛受精卵，可培育出产低乳糖牛乳的奶牛D.若将腺苷酸脱氨酶基因转入淋巴细胞后回输患者进行基因治疗，该基因可遗传给子代5.干扰素是动物体内的一种蛋白质，可以用于治疗病毒的感染和癌症，但在体外保存相当困难。如图是利用蛋白质工程设计干扰素的生产流程图。据图分析，下列叙述错误的是（ ）A.图中构建新的干扰素模型的主要依据是预期的蛋白质功能B.图中新的干扰素基因必须加上启动子和终止子才能表达C.图中改造干扰素结构的实质是改造干扰素基因的结构D.图中各项技术并没有涉及基因工程技术6.为了增加菊花花色类型，研究者从其他植物中克隆出花色基因C（如图1），拟将其与质粒（如图2）重组，再借助农杆菌导入菊花中。下列叙述错误的是（ ） A. 用限制性核酸内切酶EcoR和DNA连接酶构建重组质粒，不能保证基因C正常表达B. 图中质粒取自农杆菌，然后将重组质粒再导入农杆菌，侵染菊花的愈伤组织C. 在培养基中添加抗潮霉素抗性基因，筛选被转化的菊花细胞D. 该技术的原理是基因重组，克服了远缘杂交不亲和的障碍7.2020年诺贝尔化学奖颁给了开发基因组编辑方法的两位女科学家，CRISPA/Cas9基因编辑技术可对基因进行定点编辑，其原理是由一条单链向导 RNA引导核酸内切酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割，示意图如下。下列叙述错误的是（ ）A.核酸内切酶Cas9由相应基因指导在核糖体中合成B.向导RNA可识别、切割DNA上的目标位点C.引入供体DNA分子的插入以实现替换，可以对基因进行定向改造D.生物体自身存在的修复系统能将断裂上下游两端的序列连接起来，实现目标基因的敲除8.下表为常用的限制性内切核酸酶（限制酶）及其识别序列和切割位点，由此推断以下说法中，错误的是（ ）限制酶名称识别序列和切割位点限制酶名称识别序列和切割位点BamHGGATCCKpnGGTACCEcoRCAATTCSau3AGATCHindGTYRACSmaCCCGGG（注：Y=T或C，R=A或G）A.Hind、Sma两种限制酶切割后形成平末端B.Sau3A限制酶的切割位点在识别序列的外部C.BamH和Sau3A两种限制酶切割后形成相同的黏性末端D.一种限制酶一定只能识别一种核苷酸序列二、综合题9.几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：（1）在进行基因工程操作时，若要从植物体中提取几丁质酶的mRNA，常选用嫩叶而不选用老叶作为实验材料，原因是_。提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是_。（2）以mRNA为材料可以获得cDNA，其原理是_。（3）若要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞原因是_（答出两点即可）。（4）当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是_。（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是_。10.某种荧光蛋白（GFP）在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光，这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某种病毒的外壳蛋白（L1）基因连接在GFP基因的5末端，获得了L1GFP融合基因（简称为甲），并将其插入质粒P0，构建了真核表达载体P1，其部分结构和酶切位点的示意图如下，图中E1E4四种限制酶产生的黏性末端各不相同。回答下列问题：（1）据图推断，该团队在将甲插入质粒P0时，使用了两种限制酶，这两种酶是_。使用这两种酶进行酶切是为了保证_，也是为了保证_。（2）将P1转入体外培养的牛皮肤细胞后，若在该细胞中观察到了绿色荧光，则说明L1基因在牛的皮肤细胞中完成了_和_过程。（3）为了检测甲是否存在于克隆牛的不同组织细胞中，某同学用PCR方法进行鉴定，在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的_（填“mRNA”“总RNA”或“核DNA”）作为PCR模板。11.金属硫蛋白（MT蛋白）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过聚合酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程如图，请回答下列问题：（1）从高表达MT蛋白的生物组织中提取mRNA，通过_获得_用于PCR扩增。（2）设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物（引物1和引物2），为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的_位点。设计引物时需要避免引物之间_而造成引物自连。（3）PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键，退火温度过高会破坏_的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但_的引物需要设定更高的退火温度。（4）如果PCR未得到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有_（填序号：升高退火温度；降低退火温度；重新设计引物）。（5）图中步骤1代表_，步骤2代表退火，步骤3代表延伸。12.如图是利用基因工程技术生产人胰岛素的流程示意图，请回答下列问题：（1）合成人胰岛素的RNA应从人类的_细胞中获取；较从基因组文库中获取的目的基因，图示方法获取的目的基因所含碱基数量_（填“更多”“更少”或“一样多”）。（2）将质粒A和目的基因结合为重组质粒的过程中，需要使用的酶有_，这两个不同的DNA分子能进行重组的原因是_。（3）将重组质粒导入细菌B之前，常需要使用_处理细菌B，使导入更易成功。（4）在筛选目的细菌的过程中，我们应该选择_（填序号）A.在含氨苄青霉素和四环素的培养基中都能存活的细菌B.在含氨苄青霉素的培养基中能存活，在含四环素的培养基中不能存活的细菌C.在含四环素的培养基中能存活，在含氨苄青霉素的培养基中不能存活的细菌D.在含氨苄青霉素和四环素的培养基中都不能存活的细菌（5）选择细菌作为受体细胞的原因可能是_，在细菌培养液中分离得到的目的基因的表达产物_（填“能”或“不能”）直接使用。13.嗜热土壤芽孢杆菌产生的-葡萄糖苷酶（BglB酶）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下实验：.利用大肠杆菌表达BglB酶（1）PCR扩增bglB基因时，选用_的基因组DNA作模板。（2）如图为质粒限制酶酶切图谱。bglB基因不含图中限制酶的识别序列。为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入_和_不同限制酶的识别序列。（3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为_。.温度对BglB酶活性的影响（4）据图1、2可知，80 保温30分钟后，BglB酶会_；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在_（单选）。A.50 B.60 C.70 D.80 .利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率。经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因。（5）与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽孢杆菌相比，上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中_（多选）。A.仅针对bglB基因进行诱变B.bglB基因产生了定向突变C.bglB基因可快速累积突变D.bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变14.科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图1所示，图2、图3分别表示干扰素基因及质粒的相关信息。（1）在图1治疗过程中是否体现了细胞的全能性，为什么？_（填“是”或“否”），_。（2）分析图2、图3，对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用的限制酶组合为_。（3）为了得到实验所需的大量干扰素基因，研究人员利用PCR技术进行扩增。由于DNA复制时，子链只能由53方向延伸，因此可以从图2所示的A、B、C、D四种单链DNA片段中选取_作为引物。若要将1个干扰素基因复制4次，则需要在缓冲液中至少加入_个引物。（4）将步骤获得的ES细胞放在荧光显微镜下观察，选择发_色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可以采用_方法进行检测。（5）科学家通过蛋白质工程技术将干扰素分子中的一个半胱氨酸变成丝氨酸，就可以在不影响其活性的前提下延长其保存周期。这项技术是以_为基础而进行的操作。15.人类基因启动子上游的调控序列中含有BCL11A蛋白结合位点，该位点结合BCL11A蛋白后，基因的表达被抑制。通过改变该结合位点的序列，解除对基因表达的抑制，可对某种地中海贫血症进行基因治疗。科研人员扩增了基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测，以确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置。相关信息如图所示。（1）为将扩增后的产物定向插入载体指导荧光蛋白基因表达，需在引物末端添加限制酶识别序列。据图可知，在F1F7末端添加的序列所对应的限制酶是_，在R末端添加的序列所对应的限制酶是_。本实验中，从产物扩增到载体构建完成的整个过程共需要_种酶。（2）将构建的载体导入除去BCL11A基因的受体细胞，成功转化后，含F1F6与R扩增产物的载体表达荧光蛋白，受体细胞有荧光，含F7与R扩增产物的受体细胞无荧光。含F7与R扩增产物的受体细胞无荧光的原因是_。（3）向培养液中添加适量的雌激素，含F1F4与R扩增产物的受体细胞不再有荧光，而含F5F6与R扩增产物的受体细胞仍有荧光。若基因上游调控序列上与引物序列所对应的位置不含有BCL11A蛋白的结合位点序列，据此结果可推测，BCL11A蛋白结合位点位于_，理由是_。答案解析1.答案：A解析：作为载体必须能够在受体细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因，A正确；作为载体必须具有一个至多个限制酶切点，以便于目的基因的插入，而不是表达，B错误；作为载体必须具有标记基因，以便于重组DNA的鉴定和选择，C错误；作为载体必须是安全的，对受体细胞无害，以便受体细胞能进行正常的生命活动，D错误。2.答案：A解析：用PCR技术获取目的基因，需要已知目的基因的部分核苷酸序列，以便设计引物，而并非所有的目的基因都有已知核苷酸序列，A错误；启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动DNA转录，是目的基因在块茎中表达时不可缺少的部分，B正确；应用PCR技术，可以检测目的基因是否成功插入和转录，如果出现杂交带说明植株中存在目的基因及其转录产物，C正确；用同种限制酶处理质粒和含有目的基因的DNA，可产生相同的末端，再用DNA连接酶连接，就可以形成重组DNA分子，D正确。3.答案：D解析：本题考查基因工程的运载体的相关知识。作为基因工程中的“分子运输车”载体，应具备的条件是。4.答案：A解析：农杆菌转化法把目的基因导入到受体细胞的染色体DNA上，目的基因有可能通过减数分裂进入精子，若果精子与野生型同种生物的卵细胞受精则会造成基因污染，故A正确；从人类基因组文库中获得胰岛素基因有内含子，在大肠杆菌中，其初始转录产物中与内含子对应的RNA序列不能被切除，无法表达出胰岛素，故B错误；动物基因工程常用的是显微注射技术，基因枪法属于植物转基因方法之一，故C错误；由于此处基因治疗是把表达载体导入淋巴细胞，而淋巴细胞不会产生配子，故目的基因不会传给子代个体，D错误。5.答案：D解析：由题干可知，构建新的干扰素模型要利用蛋白质工程，而蛋白质工程的主要依据就是预期的蛋白质功能，A正确；新的干扰素基因合成之后，要在受体细胞中表达，必须构建基因表达载体，基因表达载体的组成包括启动子和终止子等，B正确；蛋白质工程是以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过改造或合成基因，来改造现有蛋白质，或制造一种新的蛋白质，因此题图中改造干扰素结构的实质是改造干扰素基因的结构，C正确；题图中，合成新的干扰素基因后，要构建基因表达载体，并将其导入受体细胞中才能表达，这属于基因工程技术，D错误。6.答案：C解析：用限制性核酸内切酶 EcoRI和DNA连接酶构建重组质粒，可能会发生质粒的自身环化或者反冋连接，故不能保证基因C正常表达，A正确； 利用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞时，应借助农杄菌的I质粒上的TDNA，将目的基因导入到菊花细胞，这是利用了TDNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体DNA上，B正确； 图中显示标记基因是潮霉素抗性基因，应该在培养基中添加潮霉素（而非潮霉素抗性基因），筛选被转化的菊花细胞，C错误；图示基因工程依据的原理是基因重组，基因重组的意义在于克服了远缘杂交不亲和的障碍，D正确。故选C。7.答案：B解析：A、核糖体是蛋白质的合成场所，核酸内切酶Cas9本质为蛋白质，故核酸内切酶Cas9由相应基因指导在核糖体中合成，A正确；B、根据“由一条单链向导RNA引导核酸内切酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割”，说明向导RNA可识别目标位点，并由核酸内切酶Cas9切割目标位点，B错误；C、引入供体DNA分子的插入以实现替换的过程属于基因工程，可以对基因进行定向改造，C正确；D、向导RNA通过碱基互补配对与靶向目标序列结合，核酸内切酶Cas9使该基因上下游的DNA双链断裂，对基因进行定点切割，生物体自身会将断裂上下游两端的序列连接起来，从而实现了细胞中目标基因的敲除，D正确。故选B。8.答案：D解析：本题考查限制性核酸内切酶（限制酶）的识别序列和切割位点。从表格可以看出，Hind、Sma两种限制酶是沿着中轴线的切口切割，形成平末端，A正确；Sau3A限制酶识别序列是GATC，切割位点在识别序列的外部，B正确；BamH限制酶识别GGATCC序列，Sau3A限制酶识别GATC序列，切割后形成相同的黏性末端GATC，C正确；一种限制酶不一定只能识别一种核苷酸序列，如Sau3A能识别GATC，也能识别GGATCC，D错误。9.答案：（1）嫩叶组织细胞易破碎；防止RNA降解（2）在逆转录酶的作用下，以mRNA为模板按照碱基互补配对的原则可以合成cDNA（3）目的基因无复制原点；目的基因无表达所需启动子（4）磷酸二酯键（5）目的基因的转录或翻译异常解析：本题主要考查基因工程的相关知识，包括基因工程材料的选取、cDNA的合成、构建基因表达载体的目的、DNA连接酶的功能以及目的基因的表达情况分析等。（1）在进行基因工程操作时，若要从植物体中提取几丁质酶的mRNA，常选用嫩叶而不选用老叶作为实验材料，原因是相对于老叶而言嫩叶组织细胞更容易被破碎。提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是防止RNA降解。（2）以mRNA为材料获得cDNA的原理是在逆转录酶的作用下，以mRNA为模板按照碱基互补配对的原则可以合成cDNA。（3）若要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是目的基因无复制原点且目的基因无表达所需启动子。（4）DNA连接酶催化形成的化学键是磷酸二酯键。（5）若获得的转基因植株不具备所期望的性状表现，根据中心法则分析，其可能的原因是目的基因的转录或翻译异常。10.答案：（1）E1和E4；甲的完整；甲和载体正确连接（2）转录；翻译（3）核DNA解析：（1）甲为L1-GFP融合基因，要将甲插入质粒P0，需保证限制酶作用时不破坏甲的结构，所以应选择E1和E4进行酶切，使用两种酶进行酶切，可产生不同的黏性末端，从而避免了甲和载体的自身环化，保证二者之间正确连接。（2）将P1转入体外培养的牛皮肤细胞后，若在该细胞中观察到绿色荧光，则说明L1基因在牛皮肤细胞中成功表达，即完成了转录和翻译过程。（3）PCR技术的原理是DNA双链复制，因此需以该牛不同组织细胞中的核DNA作为PCR模板。11.答案：（1）逆转录；cDNA（2）限制酶切割；碱基互补配对（3）引物与模板；GC含量高（4）（5）变性解析：（1）PCR扩增目的基因，首先要有目的基因作为模板，所以从高表达MT蛋白的生物组织中提取mRNA，通过逆转录获得cDNA，从而用于PCR扩增。（2）构建重组质粒，首先要用限制酶切割含目的基因的DNA片段和质粒，所以引物中需要增加适当的限制酶切割位点，设计的引物之间不能有碱基互补配对情况，否则会造成引物自连。（3）退火的目的是使引物与模板结合，若退火温度过高会破坏引物与模板的碱基互补配对。由于GC之间有三个氢键，AT之间有两个氢键，所以GC含量越高的引物，退火温度越高。（4）如果PCR未得到任何扩增产物，可能是退火温度过高，导致引物与模板不能结合，或引物间相互配对，发生自连，因此，可通过降低退火温度或重新设计引物进行改进，正确。（5）题图中步骤1、2、3分别代表变性、退火、延伸，这三个步骤组成一轮循环。12.答案：（1）胰岛B；更少（2）限制酶和DNA连接酶；两者具有相似的化学组成和空间结构（3）Ca2+（4）B（5）细胞代谢和繁殖速度快，能快速获得大量产物；自身基因组较小，较易获得成功；不能解析：（1）由于细胞分化，胰岛素基因只在胰岛B细胞中表达，因此合成人胰岛素的RNA应从人类的胰岛B细胞中获取；题图这种通过合成胰岛素的RNA获取目的基因的方法为逆转录，得到的目的基因中不含非编码区和内含子，因此该方法获取的目的基因与从基因组文库中获取的目的基因相比，所含的碱基数量更少。（2）将质粒A和目的基因结合为重组质粒的过程，即构建基因表达载体的过程中需要使用限制酶和DNA连接酶；这两个不同的DNA分子能进行重组的原因是两者具有相似的化学组成和空间结构。（3）将目的基因导入微生物常用Ca2+处理细菌B，使之处于能够吸收周围环境中DNA分子的感受态，以便于基因表达载体的导入。（4）根据题图可知，重组质粒中氨苄青霉素抗性基因未被破坏，四环素抗性基因被破坏，所以应选择在含氨苄青霉素的培养基中存活，在含四环素的培养基中不能存活的细菌，综上所述，B正确，A、C、D错误。（5）由于细菌细胞代谢和繁殖速度快，能快速获得大量产物；且自身基因组较小，较易获得成功，因此常选择细菌作为基因工程的受体细胞。由于细菌属于原核生物，细胞内没有内质网和高尔基体等，不能对肽链进行进一步加工，细菌细胞内合成的胰岛素几乎没有活性，故在细菌培养液中分离得到的胰岛素不能直接使用。13.答案：（1）嗜热土壤芽孢杆菌（2）Nde；BamH（3）转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶（4）失活；B（5）AC解析：（1）根据题意可知，-葡萄糖苷酶（BglB酶）是由嗜热土壤芽孢杆菌产生的，因此PCR扩增bglB基因时，选用嗜热土壤芽孢杆菌的基因组DNA作模板。（2）根据启动子和终止子的生理作用可知，目的基因应插入启动子和终止子之间。由题图可看出，两者之间存在三种限制酶的酶切位点，但是由于Xba在质粒上有不止一个酶切位点，用Xba切割会使质粒丢失终止子，因此为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入Nde和BamH限制酶的识别序列。（3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶。（4）据题图2可知，80 保温30分钟后，BglB酶会失活；由题图1可看出，6070 时该酶的相对活性最高，而由题图2可看出，随着保温时间的延长，70 条件下酶的相对活性下降明显，因此为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在60 ，B正确。（5）PCR过程中仅针对bglB基因进行诱变，而用诱变剂直接处理嗜热土壤芽孢杆菌对嗜热土壤芽孢杆菌体内的所有DNA均起作用，A正确；基因突变具有不定向性，B错误；突变后的bglB基因进行PCR扩增，可快速累积突变，C正确；bglB基因突变可能会导致酶的氨基酸数目改变，D错误。14.答案：（1）否；因为没有发育成完整个体（2）Hind和Pst或EcoR和Pst（3）B和C；30（4）绿；抗原抗体杂交（5）蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系解析：（1）在题图1治疗过程中并未体现细胞的全能性，因为整个过程中没有发育成完整个体。（2）据题图2、图3中的酶切位点分析可知，不能选用Sma，因为该酶的酶切位点位于目的基因内部，会破坏目的基因的结构，选择限制酶时要满足目的基因两端的酶切位点在质粒当中都包含，而且使用限制酶切割后依然能保留一种标记基因，所以构建基因表达载体可以选择目的基因两端的酶切位点进行组合，据此可知，可选用的限制酶组合为Hind和Pst或EcoR和Pst。（3）用PCR技术扩增目的基因时，由于DNA复制过程中子链只能由53方向延伸，又因DNA分子中的两条链是反向平行的，因此可以作为引物的单链DNA片段为B和C。由于每条新合成的DNA单链都需要有引物才能合成，因此，若要将1个干扰素基因复制4次，则需要加入的引物数量为24×2-2=30（个）。（4）在构建基因表达载体时，绿色荧光蛋白基因没有被破坏，因此在进行筛选时，可用该基因作为标记基因进行检测，即选择发绿色荧光的细胞进行体外诱导。基因表达是指基因指导蛋白质合成的过程，所以检测基因是否表达就是检测是否合成了相关的蛋白质，可采用抗原抗体杂交方法进行检测。（5）蛋白质工程是以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。15.答案：（1）Sal；EcoR；6（2）F7与R扩增产物不含完整的启动子，荧光蛋白基因不表达（3）引物F4与F5在调控序列上所对应序列之间的区段上；根据有无荧光情况判断，F1F4与R扩增产物上均有结合位点，因此结合位点位于F4所对应调控序列的下游（右侧）；F5F6与R扩增产物上均无结合位点，可知结合位点位于F5所对应调控序列的上游（左侧），所以结合位点位于引物F4与F5在调控序列上所对应序列之间的区段上解析：（1）据题意可知，需要将扩增后的产物定向插入并指导荧光蛋白基因的表达，则含有启动子P的扩增后的产物读取方向与荧光蛋白基因的读取方向一致，故扩增后的产物中的R端与荧光蛋白基因中限制酶Mun识别序列端结合，才能保证扩增后的产物定向插入并指导荧光蛋白基因的表达。要做到定向插入，需要引物末端两端添加限制酶的识别序列，且被限制酶识别并切割后，两端的黏性末端不能相同而扩增后的产物中可能含有Mun和Xho的识别位点，故在引物末端添加限制酶的识别序列不能被限制酶Mun和Xho所识别，故应该选用添加限制酶EcoR和限制酶Sal识别序列，据图中对限制酶的注释可知，限制酶Mun识别并切割后的黏性末端与限制酶EcoR识别并切割后的黏性末端相同，故R末端添加的序列所对应的限制酶是EcoR，在F1F7末端添加的序列所对应的限制酶是Sal；荧光蛋白基因中含有限制酶EcoR的识别位点，故对载体使用限制酶Mun和Xho切割。综上所述，对载体使用限制酶Mun和Xho切割，对扩增后的产物用限制酶EcoR和限制萨Sal识别序列，然后在DNA连接酶的催化作用下，连接形成重组载体；产物扩增中需要使用TaqDNA聚合酶催化，合成更多的产物，故从产物扩增到载体构建完成的整个过程共需要6种酶，分别是TaqDNA聚合酶、限制酶EcoR、限制酶Sal限制酶Mun、限制酶Xho、DNA连接酶。（2）受体细胞中已经除去BCL11A基因，故扩增产物中的BCL11A蛋日结合位点，不会抑制荧光蛋白基因的表达；基因的表达需要RNA聚合酶与启动子结合，才能完成荧光蛋白基因的转录过程；含F1F6与R扩增产物的载体表达荧光蛋白，受体细胞有荧光，含F7与R扩增产物的受体细胞无荧光，则可能是F7与R扩增产物不含完整的启动子，荧光蛋白基因不表达。（3）向培养液中添加适量的雌激素，此时重组载体上的BCL11A基因表达，产生BCL11A蛋白，BCL11A蛋白与BCL11A蛋白结合位点结合后，导致荧光蛋白基因被抑制；含F1F4与R扩增产物的受体细胞不再有荧光，则说明BCL11A蛋白结合位点结合后在引物F4与引物R之间的序列上；含F5F6与R扩增产物的受体细胞仍有荧光，则说明BCL11A蛋白结合位点结合后在引物F5的上游序列，故据此结果可推测，BCL11A蛋白结合位点位于引物F4与F5在调控序列上所对应序列之间的区段上。学科网（北京）股份有限公司