浙科版高中生物选修1 第一部分 实验1 大肠杆菌的培养和分离_教案设计.pdf

大肠杆菌的分离与培养大肠杆菌的分离与培养【教学目标】【教学目标】（一）知识目标1描述大肠杆菌的特征；2说出细菌培养和分离的方法及灭菌的过程；3说明大肠杆菌分离和培养的条件和操作要求的原理。（二）能力目标1通过大肠杆菌分离培养，学会划线分离的原理和方法；2通过描述大肠杆菌的扩大培养的实验过程，分析实验结果，初步体验实验设计；3通过实际操作实验过程，解决遇到的实际问题，提升问题分析能力。（三）情感态度与价值观目标1在实验操作的过程中，初步形成严谨的实验精神；2在分析实验结果的过程中，体会生物体的奥妙；3在小组合作讨论的过程中，体验团队合作精神。【教学重点】【教学重点】1大肠杆菌的划线分离；2大肠杆菌的无菌操作和灭菌技术；3大肠杆菌的特点及实验室应注意的安全事项。【教学难点】【教学难点】1大肠杆菌实验的无菌操作技术及实验室安全事项的解读；2大肠杆菌的划线分离。【教学过程】【教学过程】一、创设情境，导入新知一、创设情境，导入新知【教师活动】教师展示饮用水净化、消毒灭菌、检测、出品的简略过程，抛出在检测这一过程中主要是以某一微生物作为指标来进行检测，从而引出本次实验的材料大肠杆菌（展示图片） 。饮用水这一素材与我们的实际生活相联系，有利于吸引学生的兴趣。【学生活动】观看 PPT，听讲二、师生对话，构建新知二、师生对话，构建新知【教师活动】抛出“为什么大肠杆菌能够作为饮用水是否合格的指标呢？” “大肠杆菌是如何被分离的呢？”三个问题，请学生就此三个问题进行思考讨论。本环节有利于学生明确本实验材料的特点，明确实验目的【学生活动】思考，并查看书本，回答：大肠杆菌是革兰氏阴性菌，兼性厌氧【教师活动】总结学生的答案，并对学生的表现做出形成性评价，随后结和 PPT 上呈现大肠杆菌的有关信息，进行讲解。大肠杆菌是革兰氏阴性菌，兼性厌氧。是人和动物肠道中的正常栖居菌，与人终身相伴。其代谢活动能抑制肠道内分解蛋白质的微生物生长，减少蛋白质分解产物对人体的危害，还能合成维生素 B 和 K，以及有杀菌作用的大肠杆菌素。正常栖居条件下不致病，但若进入胆囊、膀胱等处可引起炎症。在环境卫生不良的情况下，常随粪便散布在周围环境中。若在水和食品中检出此菌，可认为是被粪便污染的指标，从而可能有肠道病原菌的存在。因此，大肠菌群数大肠菌值常作为饮水和食物（或药物）的卫生学标准。设疑：同学们，如果我们检验自来水大肠杆菌有没有超标，应该怎么做呢？今天，我们先学习大肠杆菌的扩大培养、分离。【教师活动】讲解实验目的：1进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。2进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的划线培养。3说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。【学生活动】认真听讲，明确实验目的，了解本节课主要的内容。【教师活动】为了达到本次实验的目的，同学们觉得应该如何做呢？我们应该先做什么，后做什么呢？同学们来设计下实验流程。我请同学起来回答。结合学生的回答，给出以下流程图：扩大培养划线分离伊红-美兰鉴别培养基涂布鉴别：带有金属光泽的深紫色菌落【学生活动】认真听讲，分组进行思考讨论并设计实验流程，学生代表回答老师问题。三、运用新知，步骤讲解三、运用新知，步骤讲解【教师活动】根据大肠杆菌的相关知识，进行实验步骤的讲解1培养基的选择同学们来思考下，我们培养细菌通常采用什么培养基？根据学生的回答指出， 本实验主要采用的是 LB 培养基进行培养， 伊红-美蓝鉴别培养基进行分离和鉴定。LB 培养基的基本配方： 蛋白胨 1g， 酵母提取物 0.5g， 氯化钠 1g， 琼脂粉 2g， 蒸馏水 100mL伊红-美蓝鉴别培养基： 蛋白胨 1g， 乳糖 1g， 磷酸氢二钾 0.2g， 琼脂粉 2g， 蒸馏水 100mL，pH 70-74 ，2%伊红水溶液 2mL ，0.5%美蓝水溶液 13mL。2大肠杆菌的扩大培养我们首先选择 LB 液体培养基， 进行大肠杆菌的扩大培养： 首先， 挑取 1 环大肠杆菌菌种，接种到装有的三角烧瓶内，包扎后置于 37摇床内振荡培养 12h。3大肠杆菌的划线分离大肠杆菌的分离，主要采用伊红-美蓝鉴别培养基。在伊红-美兰鉴别培养基上产生的带有金属光泽的深紫色的大肠杆菌菌落。（1）倒平板：倒平板：培养基加热熔化，待冷至 55-60时倒平板，每皿约 15ml，水平放置，凝固成平板。注意：A无菌操作，在酒精灯火焰旁。B培养基加热熔化，待冷至 55-60时倒平板，温度过高，会烫伤手或拿不稳倒出而造成污染，温度太低容易重新凝固。（2）划线分离：划线分离：采用平板划线分离法进行分离，用接种环挑取少量的菌液在伊红-美蓝培养基平板上进行划线分离，将平板置于 37培养箱培养 12-24h。主要采用三区划线法，形成的菌落由多到少，最后形成单菌落也可采用稀释涂布平板法，以获得单菌落。注意：1）接种环要在酒精灯外焰进行灼烧灭菌。2）划线时要让平板充分冷却，以防培养基破裂。3）划线时，动作要轻，以防割裂培养基。（3 3） 观察结果：观察结果： 在伊红-美兰鉴别培养基上产生的带有金属光泽的深紫色菌落为大肠杆菌，挑取少量菌种进行简单染色，镜检并画出显微结构图。观察菌落特征，是否符合下列特征：深紫黑色、有金属光泽；紫黑色、不带或略带金属光泽； 淡紫红色、中心颜色较深。4斜面接种和菌种保存在酒精灯火焰旁，挑取大肠杆菌单菌落，接种于斜面培养基上，保存下来。注意：1在酒精灯旁操作，先对试管口进行操作。【学生活动】有些同学通过预习和课外知识积累，回答：牛肉膏蛋白胨培养基。认真听老师的讲解，同时做好相关笔记。思考步骤中为什么这么做，明白操作的原理。四、课外延伸，小结新知四、课外延伸，小结新知【教师活动】在上完实验课呢， 同学们有没有什么问题？解决学生还没有明白的问题，同时提出以下问题，让同学们思考。1在接种操作结束后是否需要灼烧接种环？2操作过程中如何避免被杂菌污染？3如何判断培养物是否有杂菌污染？4实验结束后，接种过微生物的器皿应该如何处理？【学生活动】思考实验中自己的困惑，并提出来。