血清载脂蛋白B免疫透射比浊法测定法作业指导书.doc

血清载脂蛋白血清载脂蛋白 B B 免疫透射比浊法测定法作业指导书免疫透射比浊法测定法作业指导书 1 1. . 实实验验原原理理 免疫透射比浊终点测定法。使用抗Apo B 抗体和 样品中的 Apo B 进行抗原抗体反应。反应完成后，用 透射比浊法检测吸光度的变化反映Apo B 浓度。 2 2. . 标标本本： 2.1 病人准备： 12 小时禁食。 2.2 类型：血清、肝素或EDTA 血浆。 3 3. . 标标本本存存放放： 稳定性： 1525保存可稳定 5 天； 28保存可稳定 2 周；-20保存可稳定 3 个月； 标本不可反复冻融。 4 4. . 标标本本运运输输： 常温条件下保存运输。 5 5. . 标标本本拒拒收收标标准准： 细菌污染的标本。 6 6. . 实实验验材材料料 6.1 试剂 申能 APO B 测定试剂盒（货号： 251 7110210 1 试剂 1 525ml；试剂 2 125ml） 6.1.1 试剂组成 试剂 1（R1）： Tris 缓冲液 pH 7.5 100mmol/L 聚乙二醇（ PEG）表面活性剂，稳定剂 适量 试剂 2（R2）： Tris 缓冲液 pH 7.5 100mmol/L 羊抗人 Apo B 抗体（含稳定剂） 适量 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于28，若 无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊 度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不 能继续使用。 6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95 g/L）为防 腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的 预防措施使用试剂 6.2 校准品：建议使用DiaSys 公司提供的 TruCal Apo B 校准品对自动分析仪进行校准，校准稳定期： 4 周。具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。 7 7. . 仪仪器器：奥林巴斯 AU1000 生化分析仪 8 8. . 操操作作步步骤骤 8.1 项目基本参数：参见AU1000 生化分析仪项目测定 参数.SOP 文件 8.2 仪器操作步骤：参见AU1000 生化分析仪操作规程 . SOP 文件 9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 1 10 0. . 质质量量控控制制： 在每一批标本中都应把非定值血清水 平 I 与 II 质控做为未知标本进行分析，以2S 为质控 警告限， 3S 为失控限，绘制质控图，判断是否在控。 质控规则参见室内质控操作规程.SOP 文件。 1 11 1. . 计计算算方方法法： 按照公司配套校准品使用要求，用3 个不同水平的校准液，并以9g/L 氯化钠溶液为空白， 经校准测定，仪器自动对校准品响应量通过合适的数学 模型如 Logit/Log，拟合成校准曲线。校准仪器后，在 病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。 1 12 2 参参考考值值范范围围 3 3 女性： 0.751.50g/L 男性： 0.801.55g/L 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差 别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参 考值。 1 13 3. . 临临床床意意义义 1 1, ,2 2 ： ：载脂蛋白 B(Apo B)是低密度脂蛋 白(LDL)的主要结构蛋白，它输送胆固醇至细胞中，因 此与动脉粥样硬化斑块形成有关。因为Apo B 浓度水 平与动脉粥样硬化程度密切相关，因此Apo B 浓度水 平的上升和冠心病 (CHD)紧密有关。在使用总胆固醇和 甘油三酯来过筛冠心病危险时，除检测脂蛋白(a)与 载脂蛋白 A1 之外，同时检测载脂蛋白B 能对各种脂 蛋白代谢失调提供更多的信息，也可替代低密度脂蛋白 胆固醇 (LDL-C)检测。检测载脂蛋白B 在监视降脂药 物治疗时非常有用。一些研究表明，当Apo B 浓度上 升(女性 Apo B>1.50g/L，男性 Apo B>1.55g/L)，而 Apo A1 浓度下降 (女性 Apo A1<1.20g/L，男性 Apo A1<1.10g/L)，对于预测 CHD 危险非常有用。 1 14 4. . 操操作作性性能能 14.1 线性范围： 0.012.50g/L。 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS 推荐的标 准方法， AU1000 批内精密度小于 3%，总精密度小于 3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的 NCCLS 的规则。 批内精密度 n=20 x (g/L) s (g/L) CV (%) 天间精密度 n=20(每天校 准) x (g/L ) s (g/L ) CV (%) 样品 1 0.2420.00642.63 样品 1 0.31 2 0.00 74 2.38 样品 2 0.9520.02332.45 样品 2 0.63 8 0.01 18 1.84 样品 3 1.560.03412.18 样品 3 1.49 0.05 16 3.46 天间精密度 n=20(一次校 准) x (g/L) s (g/L) CV (%) 样品 1 0.2540.00742.89 样品 2 0.9130.02332.55 样品 3 1.580.03762.38 14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试 剂盒(x)，同时对 63 个样品进行 Apo B 检测，将检测 结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.08x- 0.0512g/L；r=0.990。 14.4 灵敏度：本试剂的检测限为0.003g/L。 14.5 病人结果可报告范围： 0.012.50g/L 1 15 5. . 超超出出范范围围结结果果处处理理： 本法的检测范围为 0.012.50g/L。当样品测定值超过上限时，应将样品 用 9g/L 氯化钠溶液作 1：1 稀释后，重新测定，结果 乘以 2。 1 16 6. . 病病危危报报警警值值的的处处理理： 无。 1 17 7. . 方方法法局局限限性性 17.1 本法的检测范围为0.012.50g/L。当样品测定 值超过上限时，应将样品用9g/L 氯化钠溶液作 1：1 稀释后，重新测定，结果乘以2。 17.2 干扰物质： DiaSys 公司的 Apo B 试剂中抗体特 异地只与人 Apo B 发生免疫反应。当样品中抗坏血酸 浓度1704mol/L，胆红素浓度 598 mol/L，血红 蛋白浓度 5.00g/L，甘油三酯浓度 22.6mmol/L 时 没有观察到干扰。试剂与Apo A1 和 Apo A2 没有交叉 反应。 17.3 前带限制： 血清 Apo B 值 10.00g/L 时，没有 观察到前带效应。 1 18 8. . 补补救救措措施施： 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂 家进行维修。 1 19 9. . 参参考考文文献献 1. Bhatnagar D, Durrington PN. Measurement and clinical significance of apolipoproteins A-I and B. In: Rifai N, Warnick GR, Dominiczak MH, eds. Handbook of lipoprotein testing. Washington: AACC Press, 1997: p. 177-98. 2. Rifai N, Bachorik PS, Albers JJ. Lipids, lipoproteins and apolipoproteins. In: Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B Saunders Company; 1999. p. 809-61. 3. Jungner I, Marcovina SM, Walldius G, Holme I, Kolar W, Steiner E. Apolipoprotein B and A- I values in 147576 Swedish males and females, standardized according to the World Health Organization-International Federation of Clinical Chemistry First International Reference Materials. Clin Chem 1998; 44: 1641- 9. 2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处置管理规定 执行。