009实验9 吲哚乙酸氧化酶活性的测定.ppt

实验9吲哚乙酸氧化酶活性的测定,P155,实验目的,通过实验掌握测定吲哚乙酸氧化酶活性的方法;加深对体内自由生长素水平调节途径的认识.,实验原理,IAA氧化酶是一种含铁的血红色素蛋白质，参与吲哚乙酸在植物体内的氧化。在吲哚乙酸氧化酶的作用下，吲哚乙酸受到氧化，生成无生理活性的3亚甲基羟吲哚终产物。体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小，对调节体吲哚乙酸的水平，起着重要作用，而影响植物的生长。酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。,器材与试剂,实验仪器：离心机、分光光度计、恒温箱、研钵、移液管、容量瓶、试管。实验试剂：1mMMncl2、1mM2,4-二氯酚、1mMIAA、0.02MpH6.0PBS、试剂B（10ml0.5mMFecl3+500ml35%过氯酸，用前混合，避光保存）实验材料：绿豆下胚轴,实验步骤,绿豆芽上或下胚轴或胚根1g,0.02MpH6.0PBS研磨成匀浆,0.02MpH6.0PBS定容至10ml,4,8000rpm10min,1.酶液提取,2.反应（按下表加入试剂，30，暗反应30min）,实验步骤,2ml上述反应液,3.显色,4.比色,试剂B4ml,+,30，暗反应30min,分别以试管1或2为对照，于530nm处测定试管3的吸光度值A,实验结果计算,1.依回归方程计算1,2号管被反应的IAA量（g）Y=315.98A+7.74722.酶活性计算（单位鲜重材料、单位时间内降解IAA的量：ggFW-1h-1）,Y,W,30,60,10,注意事项,1.低温控制；2.充分研磨提取；3.试剂混匀；4.充分反应。,实验报告（作业）,计算实验结果。实验中反应及显色步骤为什么要在暗处进行？试分析绿豆上胚轴、下胚轴和胚根中该酶活性的大小。,