课题1DNA的粗提取与鉴定上课课件.ppt

第一部分：预习完成相关基础知识第一部分：预习完成相关基础知识第二部分：实验操作第二部分：实验操作3 3、合适的材料：、合适的材料： 从核从核DNA数目来看，猪数目来看，猪38条，鸡条，鸡78条，哺条，哺乳动物血乳动物血0条，猕猴桃条，猕猴桃58条，洋葱条，洋葱16条，豌条，豌豆豆14条，菠菜条，菠菜12条，大肠杆菌条，大肠杆菌1条。条。鸟类的血细胞核大，鸟类的血细胞核大，DNADNA多多不需要破除细胞壁不需要破除细胞壁哺乳动物的血细胞无细胞核及细胞器。哺乳动物的血细胞无细胞核及细胞器。液体培养基中的大肠杆菌的液体培养基中的大肠杆菌的DNA量较少。量较少。 方案一、在滤液中加入方案一、在滤液中加入NaClNaCl，使，使NaClNaCl溶液浓溶液浓度为度为2mol/L2mol/L，过滤除去，过滤除去不溶的杂质不溶的杂质，再加入蒸，再加入蒸馏水，调节馏水，调节NaClNaCl溶液浓度为溶液浓度为0.14mol/L0.14mol/L，析出，析出DNADNA，过滤除去，过滤除去溶液中的杂质溶液中的杂质，在用，在用2mol/L2mol/L的的NaClNaCl溶液溶解溶液溶解DNADNA。为 什 么为 什 么 反反复复 地 溶 解地 溶 解与析出与析出DNADNA，能 够 去 除能 够 去 除杂质杂质血血浆浆血血细细胞胞红细胞红细胞白细胞白细胞血小板血小板八个步骤 1.制备鸡血细胞液，提取鸡血细胞核物质制备鸡血细胞液，提取鸡血细胞核物质 2.溶解细胞核内溶解细胞核内DNA 3.析出析出DNA粘稠物粘稠物 4.滤取滤取DNA粘稠物粘稠物 5.将将DNA粘稠物再溶解粘稠物再溶解 6.过滤含过滤含DNA的的NaCL溶液溶液 7.提取含杂质少的提取含杂质少的DNA 8.DNA的鉴定的鉴定方法步骤方法步骤 加入物质加入物质 目的目的 1 1.制备鸡血细胞液制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液柠檬酸钠溶液 1 1.提取鸡血细胞细胞核物质提取鸡血细胞细胞核物质 20 m120 m1蒸馏水蒸馏水 幻灯片 18 2 2.溶解细胞核内的溶解细胞核内的DNADNA 2 m12 m1L L 的的 NaCINaCI溶液溶液4040mLmL 幻灯片 18 3 3.析出含析出含DNADNA 的黏稠物的黏稠物 蒸馏水蒸馏水 4 4.滤取含滤取含DNADNA 的黏稠物的黏稠物 5 5.将将 DNADNA 的黏稠物再溶解的黏稠物再溶解 2 mol2 molL L 的的 NaClNaCl溶液溶液20 mL20 mL 6 6.过滤含过滤含DNADNA 的的 NaCNaCl l 溶液溶液 7 7.提取含有杂质较少的提取含有杂质较少的DNADNA 冷却的冷却的9595的酒精的酒精50 mL50 mL 幻灯片 18 A A:(1)1)向试管中加入向试管中加入0 0.015 mol015 molL L 的的 NaClNaCl溶液溶液5 5mLmL (2)2)加入加入DNADNA (3)43)4 mLmL二苯胺试剂二苯胺试剂 8 8.DNADNA的鉴定的鉴定 B B:(1)(1)向试管中加入向试管中加入0 0.015mol015molL L 的的 NaClNaCl溶液溶液5 5mLmL (2)4 m2)4 mL 二苯胺试剂二苯胺试剂 加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加速血细胞破裂加速血细胞破裂 溶解溶解DNA 使使2mol/L的的NaCl溶液稀释至溶液稀释至0.14mol/L使得使得DNA最大限度地释出最大限度地释出 使含使含DNA的黏稠物被留在纱布上的黏稠物被留在纱布上使含使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中除去含除去含DNA的滤液中的杂质的滤液中的杂质提取提取DNA A出现蓝色出现蓝色 B无变化无变化 1、在制备鸡血细胞液的过程中，加入柠、在制备鸡血细胞液的过程中，加入柠檬酸钠的目的是（檬酸钠的目的是（ ） A .防止凝血防止凝血 B. 加快加快DNA析出析出 C .加快加快DNA溶解溶解 D.加速凝血加速凝血 2、DNA的溶解度最低时，的溶解度最低时，NaCl的物质的物质的量浓度为（的量浓度为（ ） A 2mol/l B 0.1mol/l C 0.14mol/l D 0.015mol/l 3、在向溶解、在向溶解DNA的的NaCl溶液中，不断溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（加入蒸馏水的目的是（ ） A 加快加快DNA溶解的速度溶解的速度 B 加快溶解杂质的速度加快溶解杂质的速度 C 减小减小DNA的溶解度，加快的溶解度，加快DNA析出析出 D减小杂质的溶解度，加快杂质的析出减小杂质的溶解度，加快杂质的析出4、向溶有、向溶有DNA的的2mol/L的的NaCl溶液中不溶液中不断加入蒸馏水断加入蒸馏水,在这个过程中在这个过程中DNA的溶解的溶解度变化情况分别是度变化情况分别是A 减小减小;减小减小 B 增大增大;增大增大C 先减小后增大先减小后增大 D增大增大; 减小减小5、欲使溶有、欲使溶有DNA的的2mol/L的的NaCl溶液中溶液中的的DNA析出，最有效的办法是析出，最有效的办法是A 加蒸馏水加蒸馏水 B 加矿泉水加矿泉水C 加清水加清水 D 加生理盐水加生理盐水6、与析出、与析出DNA粘稠物有关的叙述，不正确的是粘稠物有关的叙述，不正确的是A 操作时缓慢滴加蒸馏水，降低操作时缓慢滴加蒸馏水，降低DNA的溶解度的溶解度B 操作时用玻棒轻缓搅拌以保证操作时用玻棒轻缓搅拌以保证DNA分子的完整分子的完整C 加蒸馏水可以同时降低加蒸馏水可以同时降低DNA和蛋白质的溶解度和蛋白质的溶解度D 当丝状粘稠物不再增加时，当丝状粘稠物不再增加时，NaCl溶液的浓度可溶液的浓度可以认为是以认为是0.14mol/L7、你能采用其他方法对、你能采用其他方法对DNA进行鉴定吗？进行鉴定吗？用甲基绿染液。结果丝状呈现绿色。用甲基绿染液。结果丝状呈现绿色。 8、DNA遇二苯胺会染成（沸水浴）遇二苯胺会染成（沸水浴） A 硅红色硅红色 B 红色红色 C 紫色紫色 D 蓝色蓝色 方案二、直接在滤液中加入嫩肉粉，反应方案二、直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10101515分钟。分钟。 方案三、将滤液放在方案三、将滤液放在606075750 0C C的恒温水浴箱的恒温水浴箱中保温中保温10101515分钟。分钟。练习练习1、请解释提取、请解释提取DNA的实验操作中主要的步骤的目的。的实验操作中主要的步骤的目的。答：提取答：提取DNA的的第一步是材料的选取第一步是材料的选取，其目的，其目的是一定要选取是一定要选取DNA含量较高的生物材料，否则会含量较高的生物材料，否则会由于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困难；由于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困难；第二步是第二步是DNA的释放和溶解的释放和溶解，这一步是实验成功，这一步是实验成功与否的关键，要尽可能使细胞内的与否的关键，要尽可能使细胞内的DNA全部溶解；全部溶解；第三步是第三步是DNA的纯化的纯化，即根据，即根据DNA的溶解特性、的溶解特性、对酶及高温的耐受性的不同等特性，最大限度地将对酶及高温的耐受性的不同等特性，最大限度地将DNA与杂质分开；与杂质分开；最后一步是对最后一步是对DNA进行鉴定进行鉴定，这是对整个实验的结果的检测。这是对整个实验的结果的检测。2、你认为从细胞中提取某种特定的蛋白质、你认为从细胞中提取某种特定的蛋白质与提取与提取DNA一样容易吗？一样容易吗？答：答：提取蛋白质比提取提取蛋白质比提取DNA的难度大的难度大。这是因为，。这是因为，与与DNA相比，相比，蛋白质对温度、盐浓度、蛋白质对温度、盐浓度、pH等条件等条件要敏感得多，很容易失活要敏感得多，很容易失活；并且蛋白质的空间结；并且蛋白质的空间结构多种多样，理化性质各不相同，使得蛋白质的构多种多样，理化性质各不相同，使得蛋白质的提取提取没有一种统一的方法没有一种统一的方法，只能根据特定蛋白质，只能根据特定蛋白质的特性摸索提取的条件，设计特定的方法。的特性摸索提取的条件，设计特定的方法。