环境微生物监测标准操作规程.doc

环境微生物监测标准操作规程一、监测指征 1感染暴发或感染流行时，环境因素在感染传播中有流行病学意义。 2监测潜在的危险环境状况，证明有危险的病原体存在或证明危险的病原体已被成功清除。 3当某项感染控制措施改变时，评估其效果；或者根据规范要求，仪器设备或系统启用时监测。 4目标性监测的需要。 5循证医学证据支持。 二、空气监测(沉降法) (一)采样时间：消毒处理后与进行医疗活动之前。 (二)采样高度：距地面垂直高度80150 cm。 (三)采样点设置 1非洁净房间：室内面积30 ，在对角线上设里、中、外3点。里、外两点位置各距墙1 m；室内面积>30 ，设东、西、南、北、中5点。其中东、西、南、北4点均距墙1 m。9 cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5 min后送检培养。 2洁净房间：清洁房间在空态或静态条件下，根据房间的不同清洁级别进行布点，操作按照GB 503332002。9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露30 min后送检培养。 (四)采样注意事项 1采样人员做好手部卫生，佩戴口罩、帽子等个人防护装备。进入清洁房间采样须穿洁服。 2皿盖打开顺序应先内后外；手臂及头不可越过培养皿上方；行走及放置动作要轻，尽量减少对空气流动状态的影响；皿盖应扣放，以防污染。3采样结束后，由外向内合上皿盖。 4采样完毕的培养皿应在6 h内培养。 (五)实验室检验 1培养皿在37培养48 h后，进行菌落计数和致病菌检验。普通营养琼脂培养基的配制按照GBT 4789282003；菌落计数方法按照GBT 791821987；致病菌检验：溶血性链球菌检验按照GBT 4789112003，沙门菌检验按照CBT 478942003，铜绿假单胞菌检验按照GBT791841987，金黄色葡萄球菌检验按照CBT 791851987,，2计算结果：非洁净房间以100 c的平皿在空气中暴露5 min即相当于10 L空气中的细菌数，计算公式为：细菌数(cfum3)=1 000(A100t105)N=50 000NAt式中：t平皿暴露于空气中的时间(min)；N一培养后平皿上的菌落数(cfu平皿)；A所用平皿的面积(c)。 洁净房间直接以“个(30 min90)”平皿为单位计算结果。 (六)结果判断： 参照GB 159821995医院消毒卫生标准。 三、物体表面监测 (一)采样时间：消毒处理后4 h内。 (二)采样方法 被采样本面积<100 c取全部表面；如采样面积100 c，连续采样4个位置(不可有重叠)，每个位置采5 cm5 cm的大小，用浸有无菌生理盐水的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转动棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投入10 ml无菌生理盐水试管内。不规则的物体表面，用棉拭子直接涂擦，采样面积30 c (三)采样注意事项 1送检时间不得超过6 h，若样品保存于4，则不得超过24 h。 2消毒后采样一定要采用中和剂，不同消毒剂所用中和剂不同，可参考2002版消毒技术规范。 (四)实验室检验 1取1 m1倾注液培养，平分双份。37培养48 h，进行菌落计数和致病菌检验。普通营养琼脂培养基的配制按照GBT 4789282003；菌落计数方法按照(3BT 791821987；致病菌检验与空气监测相同。 2计算公式： 细菌总数(cfuc)=(平板菌落数稀释倍数)采样面积(c。)(五)结果判断： 参照GB 159821995医院消毒卫生标准。