遗传学实验——微核.doc

Four short words sum up what has lifted most successful individuals above the crowd: a little bit more.-author-date遗传学实验微核遗传学实验微核 本科生课程论文 遗传学实验报告论文实验名称紫外线对大蒜根尖分生区细胞核的影响组长 张礼春 学 号2010506076组员 朱秉坚 学号 2010506089 谭志刚2010506044 杨新2010506062所在院系生命科学学院专业班级2010级生科(1)班指导教师李桂芳日期2012年11月28日 石河子大学生命科学学院二零一二年 紫外线对大蒜根尖分生区细胞核的影响摘要：以大蒜根尖分生区为材料，研究了紫外线对大蒜根尖分生区正在有丝分裂细胞的致畸效应。结果表明，紫外线可使细胞核发生结构变异，在分裂间期出现微核、多核现象，分别在紫外线照射0min、15 min、25min、45min和65min 时观察各种畸变类型，且畸变率随着照射时间的加长而增高。关键词：微核；紫外线；大蒜；畸变引言： 细胞核畸变指细胞核形状大小以及核中染色体结构或数目的改变，在显微镜下可以观察和识别。物理因素和化学因素都能诱发细胞核发生畸变，其中诱发细胞核最明显的畸变是细胞核呈微核和多核1。微核（Micronucleus, 简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是在细胞有丝分裂间期细胞中的一种表现形式。微核往往是各种理化因子，如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的，微核常应运于测试辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、食品添加剂的安全评价，以及染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面2，所以对于研究微核具有极其重要的价值意义。 大蒜是研究微核的很好材料，大蒜在室温下35 天即可生根，根尖生长速度一致且生根较多3。因此，在本研究中使用紫外线作为诱变剂，观察其在不同剂量的诱变剂下对大蒜根尖分生区细胞核的影响。1 材料和方法选取个体较大，健壮无病虫害的大蒜，剥去老皮，放置于培养皿中，加蒸馏水浸没基部，每天换水2 次，室温下培养培养4天，直到根尖长到 1.0cm2.0cm 左右。在上午1112 时左右时，将大蒜及其根尖向上置于超净工作台上，用普通灭菌台中紫外灯进行照射，分别照射0min、15 min、25min、45min和65min。剪下根尖立即投入卡诺氏固定液中处理24 h ，再放置于95% 、80%的乙醇中依次脱水，最后换70%的乙醇，在冰箱内4°C保存。用蒸馏水冲洗保存的根尖 2 次后，将根尖用1N盐酸放入恒温箱解离 1015 min，然后用蒸馏水漂洗2次，切取根尖分生区置于载玻片上，加改良苯酚品红溶液，同时用镊子捣碎。染色1015 min ，进行常规压片。每个处理至少观察3个根尖，每个根尖至少观察1 00个左右细胞。用显微镜摄像系统拍摄，观察细胞核畸变类型及统计在一个视野中的微核数目。2 结果与分析紫外线照射对分裂期细胞核的影响结果：1当照射0 min时，细胞基本上都处于正常状态（图1）。当照射时间增加至15min时，有不规则形状的细胞核出现（图2）。当25min处理时，视野中微核的数量和15 min 处理相比，细胞核畸变微核类型明显增多（图3）。当照射时间继续延长至45 min ，出现的多核现象比25 min 处理约增加1倍，此时，细胞核的各种畸变类型非常容易观察，轻轻挪动显微镜视野，很快就会找到各种畸变细胞核。照射65min时，微核和多核现象也有所减少。此时细胞核中染色体分裂紊乱，出现多级分裂现象（图4）。 在有丝分裂中期、后期和末期都能观察到细胞核分裂后形成的微核，中期和后期中最为常见。在后期和末期观察到细胞核多核，在后期中最为常见。 综合分析，紫外线的照射时间与细胞核的损伤程度呈正比，紫外线处理45 min时总微核数最高，各种畸变类型的细胞核也达到最高或相对较高。因此45 min 处理是观察细胞核畸变的最佳处理。3 讨论紫外线最有效的诱变波长是260 nm，这正是DNA分子的吸收波长4在 DNA分子强烈地吸收紫外线后，细胞核会发生畸变，因而在大蒜根尖细胞中观察到多种畸变现象。微核不含着丝点，最终会被排斥在新的子核之外，造成遗传物质的丢失。微核主要来源于染色体断片、落后染色体,以及间期细胞核的破碎5。多核可能主要是细胞核的破碎形成的本研究结果表明，紫外线照射大蒜根尖细胞25 min ，适于观察分裂期的畸变，照射 45 min 适于观察间期核的畸变，可为以后关于紫外线照射引起的问题做一鉴定的参考依据。 图（1） 图（2） 图（3） 图（4）参考文献1 韩九皋,马惠钦,王洪江.衡水湖水生动物多样性研究初报J.衡水学院报,2006,8(1):75-78. 2 郑云翔.衡水湖湿地植物群落初探J.衡水学院学报,2005,7(1):21-22. 3 孙成,于红霞,朱万森,等.环境检测实验M.北京:科学出版社,2003:3-39. 4 范秀容,李广武,沈萍.微生物学实验M.2版.北京:高等教育出版社,1989:260-269. 5 李玉英,张乃群,胡兰群,等.南水北调中线工程水源区微生物菌群研究J.水利渔业,2006,26(4):57-59. -