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Four short words sum up what has lifted most successful individuals above the crowd: a little bit more.-author-date中国农业大学基因工程考试试题基因工程作业基因工程 一、名词解释1、同裂酶2、双酶切法3、限制性物理图谱4、重组子5、cDNA基因文库6、启动子7、基因工程8、感受态细胞9、受体细胞10、增强子11、限制性内切酶12、Star活性13、Ti质粒14、重叠基因15、转化二、简答题 1、定位整合克隆载体有几种模式，各是什么？2、简答天然DNA提取的三个主要步骤。 3、简述mRNA差别显示技术的优点。4、简述构建质粒克隆载体的基本策略。5、Northen杂交的基本步骤。6、简述mRNA差别显示技术的优点。7、简述cosmid克隆载体的特征。8、整个基因克隆的过程则包括哪些步骤？三、问答题1、如果知道某一基因的功能及相应的蛋白质的氨基酸序列组成，可以通过何种方法克隆该基因？2、什么是蓝白斑筛选法？基因工程参考答案 一、名词解释1、基因工程:按照人们的愿望，进行严密的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，有目的地改造生物种性，使现有的物种在较短的时间内趋于完善，创造处更符合人们需求的新的生物类型。2、双酶切法：用两种不同的限制性核酸内切酶切割同一种DNA分子的方法。3、限制性物理图谱：DNA分子上每种限制性核酸内切酶的识别序列分布图。4、质粒克隆载体：以质粒DNA分子为基础构建而成的克隆载体。5、cDNA基因文库：某种生物基因组转录的部分或全部mRNA经反转录产生的各种cDNA片段分别与克隆载体重组，贮存在一种受体菌群体中，这样的群体称为cDNA基因文库。6、启动子：是一段提供RNA聚合酶识别和结合的DNA序列，它位于基因的上游，可启动基因转录。7、同裂酶：有一些限制性核酸内切酶来源不同，但具有相同的识别序列，这样的限制性核酸内切酶被称为同裂酶。8、转化子：将导入外源DNA分子后能稳定存在的受体细胞称为转化子。9、受体细胞：能够摄取外源DNA并使其稳定维持的细胞，有一定的应用价值和理论研究价值，又称宿主细胞或寄主细胞。10、Vir区：在Ti质粒T-DNA区的上游有一组基因，其表达产物可激活T-DNA向植物细胞转移，使植物引发肿瘤，显示农杆菌的致病性，因此称为Vir区。11、限制性内切酶：是一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶 12、Star活性:某些限制性核酸内切酶在特定条件下，可以在不是原来的识别序列处切割DNA，这种现象称为Star活性。13、Ti质粒：根癌农杆菌含有的一种内源质粒，它是一种双链环状DNA分子，可分为4个功能区：T-DNA区；Vir区；Con区;Ori区。14、重叠基因：在某些生物中，不同基因可共用同一段DNA的核苷酸序列，它们的核苷酸序列是彼此重叠的，这样的基因称为重叠基因。15、基因组文库：某种生物的基因组的全部遗传信息通过克隆载体贮存在一个受体菌的群体之中，这个群体即为这种生物的基因组文库。16、转化：重组质粒DNA分子通过与膜蛋白结合进入受体细胞，并在受体细胞内稳定维持和表达的过程称之为转化。17、增强子：是能够增强启动子转录活性的DNA顺式作用序列。它由多个元件组成，每个元件可以一种或多种转录调控因子结合。18、重组子：含有重组DNA分子的转化子称为重组子。19、感受态细胞：是指处于能够吸收周围环境中DNA分子的生理状态的细胞。20、同裂酶：有一些限制性核酸内切酶来源不同，但具有相同的识别序列，这样的限制性核酸内切酶被称为同裂酶。二、简答题 1、定位整合克隆载体有几种模式，各是什么？答：有四种模式，分别是：内源平台双交换置换克隆载体外源平台双交换置换克隆载体内源平台双交换插入克隆载体内源平台单交换插入克隆载体2、简答天然DNA提取的三个主要步骤。 答：主要步骤是：准备生物材料裂解细胞分离和抽提DNA3、酵母双杂交系统有哪三部分组成。答：与BD融合的蛋白表达载体，被其表达的蛋白称为诱饵蛋白与AD融合的蛋白表达载体，表达的蛋白称为靶蛋白带有一个或多个报告基因的宿主菌株4、简述mRNA差别显示技术的优点。答: 几乎可以检测细胞表达的所有基因可同时比较多种细胞类型可同时展现所有差异可同时检测基因的上调和下调表达）5、简述构建质粒克隆载体的基本策略。答：基本策略：构建的质粒克隆载体应该是能在转化的受体细胞中进行有效的复制。构建的质粒克隆载体必须含有允许外源DNA片段克隆的位点，尽可能多。构建的质粒克隆载体必须含有供选择克隆子的标记基因。构建的质粒克隆载体DNA分子尽可能小。根据特殊需要，使构建的质粒克隆载体中组装各种“元件”，构建成不同用途的质粒克隆载体。6、Northen杂交的基本步骤。答：提取总RNA并进行琼脂糖凝胶电泳。转移及固定 变性处理后的RNA可以转移并结合到硝酸纤维膜上，膜夹在两层干净滤纸中晾干，80烤膜2h。 杂交 让探针与同源DNA片段特异性结合； 洗脱 去除非特异性结合的探针；自显影检查目的DNA所在的位置。7、简述构建质粒克隆载体的基本策略。答：基本策略：构建的质粒克隆载体应该是能在转化的受体细胞中进行有效的复制。构建的质粒克隆载体必须含有允许外源DNA片段克隆的位点，尽可能多。构建的质粒克隆载体必须含有供选择克隆子的标记基因。构建的质粒克隆载体DNA分子尽可能小。根据特殊需要，使构建的质粒克隆载体中组装各种“元件”，构建成不同用途的质粒克隆载体。8、简述mRNA差别显示技术的优点。答: 几乎可以检测细胞表达的所有基因可同时比较多种细胞类型可同时展现所有差异可同时检测基因的上调和下调表达9、简述cosmid克隆载体的特征。答：cosmid克隆载体是一种环形双链DNA分子，大小不超过36.4kb。具有质粒的性质，可在大肠杆菌细胞内进行复制载体上含有一个cos位点构建的cosmid克隆载体较小，能承载较大的外源DNA片段10、简述mRNA差别显示技术的优点。答: 几乎可以检测细胞表达的所有基因可同时比较多种细胞类型可同时展现所有差异可同时检测基因的上调和下调表达）11、整个基因克隆的过程则包括哪些步骤？答：用于基因克隆的DNA材料的选择，及DNA分子的片段化；外源DNA片段与载体分子的体外连接反应；将人工重组的DNA分子导入它们能够进行正常复制的寄主细胞的程序；获得了重组体分子的转化子克隆的选择或筛选。基本策略：12、Northen杂交的基本步骤。答：提取总RNA并进行琼脂糖凝胶电泳。转移及固定 变性处理后的RNA可以转移并结合到硝酸纤维膜上，膜夹在两层干净滤纸中晾干，80烤膜2h。 杂交 让探针与同源DNA片段特异性结合； 洗脱 去除非特异性结合的探针；自显影检查目的DNA所在的位置。三、问答题1、如果知道某一基因的功能及相应的蛋白质的氨基酸序列组成，可以通过何种方法克隆该基因？答：可以通过合成核苷酸探针或设计简并PCR引物从cDNA文库或基因组文库中筛选。或者利用相应的抗体从cDNA表达文库中筛选相应的克隆。（还可以采用其它方法）2、什么是蓝白斑筛选法？答：这种方法是根据组织化学的原理来筛选重组体。主要是在载体的非必要区插入一个带有大肠杆菌-半乳糖苷酶（lac）的基因片段，携带有lac基因片段的载体转入lac-宿主菌后，在含有X-gal平板上形成浅蓝色的菌落或噬菌斑。外源基因插入lac（或lac基因部分被取代）后，重组的菌体或噬菌斑将丧失分解的能力，转入lac-宿主菌，在含有X-gal平板上形成白色的菌落或噬菌斑，非重组的菌落或噬菌斑则为蓝色。-