实验十一分光光度法测定火腿肠中亚硝酸盐的含量.doc

Four short words sum up what has lifted most successful individuals above the crowd: a little bit more.-author-date实验十一分光光度法测定火腿肠中亚硝酸盐的含量实验十一分光光度法测定火腿肠中亚硝酸盐的含量实验十一 分光光度法测定火腿肠中亚硝酸盐的含量一、实验原理样品经沉淀蛋白质，除脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，再与盐酸萘乙二胺偶合形成红色染料，通过测定吸光度可与标准进行比较定量。二、试剂与仪器（1）试剂亚铁氰化钾溶液：称取10.6g K4Fe(CN)6 .3H2O溶于水定容100mL.乙酸锌溶液：称取11g Zn(CHCOO)2 .2H2O加1.5mL冰乙酸，溶于水定容50mL。饱和硼砂溶液：称取5g NaB4O7 . 10H2O溶于100mL热水中，冷却备用。20%盐酸：取54mL浓盐酸加水45mL。0.4%对氨基苯磺酸：称取0.4g对氨基苯磺酸溶于100mL20%盐酸中。200ug/mL亚硝酸钠标准液：精密称取0.1000g经硅胶干燥24小时的亚硝酸钠（GR），加水溶解后，定容500mL。5.0ug/mL亚硝酸钠标准使用液：吸取亚硝酸钠标准液5.0mL于500mL容量瓶中用重蒸馏水定容。（2）仪器电炉 电热恒温水浴锅 玻棒 漏斗 铁架台 烧杯（50mL、 200mL、500mL 各2个）；容量瓶（250ml1个）；吸管（2mL,5mL,10mL,50mL各1支）；比色管（50mL10支）三、实验操作（1）样品处理称取3g左右火腿肠于50mL烧杯中，加入饱和硼砂溶液6.3mL，以玻棒搅匀，用70左右的重蒸馏水约100mL将其洗入250mL的容量瓶中，置于沸水浴中加热15分钟，取出，一边转动一边加入5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL乙酸锌溶液以沉淀蛋白质。定容，混匀，静置半小时，除去上层脂肪，过滤，弃去初滤液30mL，收集滤液备用。（2）绘制标准曲线吸取0.00,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00,1.20mL亚硝酸钠标准使用液，分别置入7支50mL比色管中，各加入0.4%对氨基苯磺酸2mL,混匀，静置3-5分钟后各加入1.00mL 0.2%盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15分钟，用2cm比色皿，以零管调零，于538nm处测量吸光度，以亚硝酸钠含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。（3）样液测定吸取40mL样品处理液于50mL比色管中，按标准曲线绘制步骤进行，测定吸光度，通过吸光度从标准曲线上查出亚硝酸钠的含量（ug）。四、计算式中：X 40mL样品处理液中亚硝酸钠的含量（ug）M火腿肠的质量（g）-