最新十一章胚胎移植ppt课件.ppt

一、概述一、概述（一）概念 胚胎移植是指将一头胚胎移植是指将一头良种母畜配种后的早良种母畜配种后的早期胚胎取出（或通过体外受精及及其他方式得期胚胎取出（或通过体外受精及及其他方式得到体外生产的胚胎），到体外生产的胚胎），移植到另一头移植到另一头同种且生同种且生理状态相同理状态相同的母畜体内，使之继续发育成为新的母畜体内，使之继续发育成为新个体的过程。个体的过程。 也称作借腹怀胎。提供胚胎的个体为供体(Donor)，接受胚胎的个体为受体(Recipient)。八八戒戒飞飞抵抵岛岛城城跨跨国国娶娶妻妻 加拿大加拿大846846头猪运抵青头猪运抵青岛，价值岛，价值190190万美元万美元（2007-10-172007-10-17） 成本高，时成本高，时间长，可用间长，可用ETET代替活体代替活体引种。引种。4.4.保存品种资源保存品种资源 结合结合胚胎冷冻技术胚胎冷冻技术为可保存国家或地区间特有为可保存国家或地区间特有的家畜品种资源，建立种质资源库提供新的技的家畜品种资源，建立种质资源库提供新的技术手段，还可术手段，还可降低种质资源保存费用降低种质资源保存费用。活畜保。活畜保种不仅成本很高、规模有限，而且还容易发生种不仅成本很高、规模有限，而且还容易发生基因漂变。胚胎冷冻保种也优于精液冷冻保种，基因漂变。胚胎冷冻保种也优于精液冷冻保种，因为一个胚胎是一个完整的个体，这样，冷冻因为一个胚胎是一个完整的个体，这样，冷冻或冷藏一个胚胎不仅保存了一个个体的基因，或冷藏一个胚胎不仅保存了一个个体的基因，也保存了基因组织。也保存了基因组织。 而且要从精子中重新构建一个已经灭迹了的群而且要从精子中重新构建一个已经灭迹了的群体，需要级进许多世代，而通过胚胎再构建一体，需要级进许多世代，而通过胚胎再构建一个群体，仅在一个世代内即可实现。个群体，仅在一个世代内即可实现。 胚胎冷冻保种不仅胚胎冷冻保种不仅成本低廉、方法简单成本低廉、方法简单，而且，而且能能避免活畜保种因疾病、自然灾害或基因漂变避免活畜保种因疾病、自然灾害或基因漂变造成种质消亡造成种质消亡的风险。的风险。5.5.诱发单胎动物产双胎诱发单胎动物产双胎 性别控制性别控制 避免异性孪生不育症避免异性孪生不育症 6.6.研究手段研究手段 目前，胚胎工程技术中应用最多的是胚胎移目前，胚胎工程技术中应用最多的是胚胎移植技术，无论是转基因胚胎还是克隆等获得植技术，无论是转基因胚胎还是克隆等获得的胚胎，最后都必须经胚胎移植才能获得后的胚胎，最后都必须经胚胎移植才能获得后代，胚胎移植是代，胚胎移植是胚胎工程的最后一道胚胎工程的最后一道“工工序序”。因此，可以说它是因此，可以说它是胚胎工程技术的基胚胎工程技术的基础。础。胚胎移植技术与其他繁育技术的关系胚胎移植技术与其他繁育技术的关系 胚胎移植技术在整个动物繁育新技术的体系中是一胚胎移植技术在整个动物繁育新技术的体系中是一项基础性的、关键的技术项基础性的、关键的技术人工授精核移植技术发情控制与超数排卵技术胚胎移植干细胞技术胚胎采集、鉴定与冷冻保存技术胚胎分割技术卵子体外成熟，体外受精嵌合体技术（四）生理学基础、基本原则和条件1、生理学基础（1）母畜发情后生殖器官的孕向发育（2）早期胚胎呈游离状态（3）不存在免疫问题（4）胚胎的遗传特性不受受体影响2、胚胎移植的基本原则（1）同一性原则（供、受体在分类上的相同属性；在生理上的一致性 ；在解剖位置上的一致性）。（2）胚胎的期限 （3）胚胎的质量 （4）供、受体的状况3、条件 供体超排反应良好； 胚胎回收顺利； 胚胎质量好、保存可靠； 受体黄体良好； 受体饲养管理条件良好； 技术人员操作熟练； 胚胎操作及移植器械恰当。(五)胚胎移植的技术程序 包括供体的超数排卵、供体和受体的同期发情处理、供体的发情鉴定与配种、胚胎采集、胚胎的检查与鉴定、胚胎的保存、胚胎的移植胚胎移植程序示意图二、胚胎移植的基本步骤二、胚胎移植的基本步骤( (一一) )供体和受体的选择供体和受体的选择1.供体的选择 遗传学价值高；身体健康（传染病、寄生虫病、生殖系统疾病）；年龄适中；体况适中；发情周期正常；避免应激2.受体的选择( (二二) )供体和受体的同期发情供体和受体的同期发情 最好12h之内，如果超过24h(牛)或48h(绵羊和山羊)，妊娠率即急剧下降1、仅对受体进行同期发情处理2、供、受体同时进行同期发情处理( (三三) )供体的超数排卵供体的超数排卵1.超排方法（1）已知发情周期供体超排（2）未知发情周期供体超排（未知+安排工作+初期周期不稳定） 孕激素+FSH PG一次注射法 PG二次注射法 同（1）3.影响超排效果的因素(1)个体差异 与动物的种类、品种、年龄、胎次、体重及营养情况都有关系(2)激素 所用激素的种类、用量和注射程序，都会对超排效果有一定的影响(3)用药时间 发情周期、产后阶段及季节不同，超排结果均有差别（山羊一般可以在注射PGF2后的4896h内发情。可使超排处理安排在周期的第917d的任何一天。但15d以后处理排卵数较多）。4.超排效果的评判标准 实践中一半以上的处理母畜得到满意结果，就认为是成功的。 牛较理想的要求是达到1012个，可用胚率65%，可获67个；妊娠率60%，可获34头犊牛，在经济上比较合算。当前一般水平是每头供体牛平均提供45个好胚胎。 ( (四四) )供体的发情鉴定和配种供体的发情鉴定和配种 供体大多在超排处理后1248h发情，一般在发情后812h输精一次，以后间隔812h再输精一次或自然交配。( (五五) )胚胎回收与鉴定胚胎回收与鉴定 1.回收时间 2.回收方法（离体生殖道、手术回收、非手术回收） 实验动物猪、羊牛、马 手术回收场所、器械和人员的准备场所、器械和人员的准备供体准备输卵管回收子宫角回收输卵管+子宫角回收胚胎采集子宫回收胚胎输卵管回收胚胎 超排后的黄体超排后的黄体 非正常的卵巢：大卵泡非正常的卵巢：大卵泡羊手术回收子宫角胚胎 移植胚胎移植胚胎 受体与产的羔羊受体与产的羔羊PBS集卵杯集卵杯子宫颈子宫颈 子宫角子宫角卵巢卵巢3.检胚剔除异物检胚吸管检胚吸管1.吸管2.乳胶管3.玻璃珠 胚胎净化4.胚胎鉴定-检查和评定质量 (1)形态学法 卵子是否受精。透明带形状、厚度，有无破损等。卵裂球的大小、致密程度是否有差异，卵黄间隙是否有游离的细胞或细胞碎片。胚胎发育阶段与回收时应达到的胚龄是否一致，胚胎的透明度，胚胎的可见结构(内细胞团、滋养层细胞、囊胚腔)是否清晰可见。 A A级级; ;形态完整形态完整, ,轮廓清晰轮廓清晰, ,呈球形呈球形, ,分裂球大小分裂球大小均匀均匀, ,透明带适中；透明带适中； B B级级; ;轮廓清晰轮廓清晰, ,色调和细胞密度良好；色调和细胞密度良好； C C级级; ;轮廓不清楚轮廓不清楚, ,色调发暗色调发暗, ,结构较松散结构较松散, ,游离游离的细胞和液胞较多；的细胞和液胞较多； D D级级; ;轮廓模糊轮廓模糊, ,色调暗色调暗, ,结构松散结构松散, ,碎片细胞和碎片细胞和液泡很多。液泡很多。 胚胎的分级标准胚胎的分级标准不同发育阶段的正常胚胎和不正常胚胎不同发育阶段的正常胚胎和不正常胚胎1细胞期2细胞期4细胞期8细胞期密集桑椹胚桑椹胚囊胚扩张囊胚未受精卵透明带破损透明带椭圆退化变性胚正常胚胎异常胚胎2-cell4-cell8-cell16-cellMorulaBlastocyst正常胚胎的形态正常胚胎的形态(2)体外培养法 (3)荧光(活体染色)法 (4)代谢活性测定法将待鉴定胚胎放入含有葡萄糖的培养液中，培养1h后，测定培养液中葡萄糖的消耗量，每培养1h消耗葡萄糖2g以上者为活胚胎。( (六六) )胚胎保存胚胎保存 1.常温保存(1525)通常采用含20%犊牛血清的PBS保存液，可保存胚胎48h 2.低温保存。 010 3.冷冻保存 (1)逐步降温法 (2)一步细管法 (3)玻璃化法 ( (七七) )胚胎移植胚胎移植1.移胚方法 2.移胚部位 非手术法手术法移植前胚胎装管手术法将胚胎移植到输卵管牛胚胎的移植方法牛胚胎的移植方法直肠把握法直肠把握法山羊受体移植 3.影响胚胎移植妊娠率的因素 (1)胚胎因素 包括胚胎质量，日龄，移植胚胎的数量，提供胚胎的供体，胚胎在体外培养的时间，鲜胚和冻胚等。 (2)母体因素 包括供、受体发情同期化程度，受体的孕酮水平，受体的营养，子宫、卵巢的生理状况等。 (3)其他因素 包括自然发情与人工诱导发情，移植器污染程度以及操作者熟练程度等。本章小结本章小结u重点重点 胚胎移植步骤胚胎移植步骤 胚胎移植意义胚胎移植意义u难点难点 手术法移植和非手术法移植手术法移植和非手术法移植