2022年江苏省宝应县画川高级中学高三生物一轮复习专题五DNA的粗提取与鉴定学案.docx

精选学习资料 - - - - - - - - - 学习必备 欢迎下载DNA的粗提取与鉴定考点梳理考点一、 DNA粗提取的原理1、DNA在 NaCl 溶液中的溶解性说明： DNA和蛋白质等成分在不同 NaCl 溶液浓度中溶解度不同,通过掌握 NaCl 溶液浓度达到分别目的；画出 DNA在不同浓度 NaCl 溶液中的溶解度曲线,并依据曲线图摸索在什么浓度下,DNA的溶解度最小？DNA在 NaCl 溶液中的溶解度是如何变化的？如何通过掌握 NaCl 溶液的浓度使 DNA在盐溶液中溶解或析出？2、DNA不溶于酒精溶液,而细胞中的某些蛋白质就溶于酒精；利用这一原理,可以将 DNA进一步“ 提纯”；3、DNA对酶、高温顺洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解,但是对没有影响； 大多数蛋白质不能忍耐6080oC的高温, 而DNA在以上才会变性；洗涤剂能够瓦解,但对 DNA没有影响；考点二、 DNA粗提取与鉴定试验过程1、试验材料的选取请从下面的材料中选取适合的（花菜、鸡血、猪血、洋葱）取材的原就是：一是组织材料中含较多的 的生物作为试验材料；二是取材时,要留意爱护环境,不要将本试验为什么不能选用猪血细胞作为试验材料？2、破裂细胞,猎取 含 DNA的滤液假如本试验选取的试验材料是鸡血和洋葱,在破裂细胞猎取含 鸡血：洋葱：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？DNA的滤液时,所采纳的方法有什么不同？提示：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞胀裂,再加上搅拌的机械作用,就加速了鸡血细胞的破裂 细胞膜和核膜的破裂 ,从而释放出DNA；加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？提示：洗涤剂是一些离子去污剂,能溶解细胞膜,有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl,有利于DNA的溶解；假如研磨不充分,会对试验结果产生怎样的影响 . 提示：研磨不充分会使细胞核内的 DNA释放不完全,提取的 DNA量变少,影响试验结果,导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等；此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？提示：可能含有核蛋白、多糖和 RNA等杂质；3、去除滤液中的杂质说出以下三种方案的“ 去杂” 原理再次使用不同浓度的 NaCl 溶液,分别使用 2mol/L 0.14mol/L 该溶液,“ 去杂” 的对象分别是什么？在滤液中加入“ 嫩肉粉”（含木瓜蛋白酶） ,让其反应 15 分钟；将滤液放在 60-75 的恒温水浴箱中保温 15 分钟；4、DNA的析出与鉴定名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 学习必备 欢迎下载要使滤液中的 DNA析出,需要加入一种特别的溶液,加入后仍需静置 2-3 分钟；这种特别的溶液是什么？静置的目的是什么？此时,溶液中会看到什么现象？怎样用玻璃棒卷起？被卷起的“ 丝状物” 是一个 DNA分子吗？如何对提取的DNA进行鉴定？（想一想：细胞中DNA如何鉴定？）考点三、 PCR技术（体外 DNA分子扩增）以下为体外扩增仪中 PCR过程示意图说明：第一轮的产物作为其次轮的模板再经受上述 三个步骤,如此循环；1、变性：当温度上升到以上时,双链DNA解旋为单链； （想一想：在细胞内DNA复制时,是怎样完成这一步骤的？）2、复性（退火） ：当温度下降到左右时,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合；（想一想：在细胞内这一过程需要引物作用吗？）3、延长：当温度再次上升到 时,溶液中的四种 在 酶的作用下,依据碱基互补配对原就合成新的 DNA链；（想一想：与细胞内相比,该酶作用有什么特点？它是怎样工作的？）强调：引物是指能够与 DNA母链的一段碱基序列互补配对的一小段 DNA或 RNA,PCR技术只能特异地复制处于两个引物之间的 DNA序列,使这段固定长度的序列呈指数增长；作为引物对,在设计时要关注哪些要素？4、PCR技术和 DNA复制的比较（查找共同点和不同点）DNA复制 PCR技术场所原理酶条件原料特点典题赏析例 1、某同学在做PCR反应试验时,最关键的是需要掌握（）相关表达正确选项（）A、氧气的浓度 B、酸碱度 C、温度 D、大气的湿度例 2、（2022 江苏卷）在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定” 的试验中,A用蒸馏水将NaCl 溶液浓度调至0.14mol/L ,滤去析出物B调剂 NaCl 溶液浓度或加入木瓜蛋白酶,都可以去除部分杂质C将丝状物溶解在 2mol/NaCl 溶液中,加入二苯胺试剂即呈蓝色D用菜花替代鸡血作为试验材料,其试验操作步骤相同名师归纳总结 例 3、多聚酶链式反应（PCR）是一种体外快速扩增DNA片段的技术；请回答以下有关PCR技术的基本原理第 2 页,共 6 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 学习必备 欢迎下载及应用问题；（1） DNA的两条链是反向平行的,通常将 的末端称为 5 / 端,当 与 DNA母链通过碱基互补配对结合后, DNA聚合酶就能从引物的 开头延长 DNA链；（2）PCR利用了 DNA的热变性原懂得决了打开 DNA双链的问题, 但又导致了 DNA聚合酶失活的新问题；到20 世纪 80 岁月, 科学家从一种 Taq 细菌中分别到,它的发觉和应用解决了上述问题；要将Taq 细菌从其它一般的微生物中分别出来,所用的培育基叫；（3） PCR的每次循环可以分为 三步；假设在 PCR反 应中,只有一个 DNA片段作为模板,请运算在 5 次循环后,反应物中大约有 个这样的 DNA片段；*（4）图中引物为单链 DNA片段,它是子链合成延长的基础；从理论上估计,第四轮循环产物中含有引物 A的 DNA片段所占的比例为；在第 轮循环产物中开头显现两条脱氧核苷酸链等长的 DNA片段；（5）设计引物是 PCR技术关键步骤之一；某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理 （如下图）,请分别说明理由；第 1 组：；其次组；（ 6） PCR 反应体系中含有热稳固DNA 聚合酶,下面的表达式不能正确反映DNA 聚合酶的功能,这是因为；等方面；（7）目前 PCR技术的主要应用在（1）磷酸基团 3/端 （2）耐高温的TaqDNA聚合酶；挑选培育基（3）变性、退火、延长；32 （ 4）15/16 ；三 （5）引物和引物局部发生碱基互补配对而失效引物自身折叠后会显现局部碱基互补配对而失效（6）DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链 DNA片段的引物链上（7）遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和 DNA序列测定例 4、某生物爱好小组开展 DNA粗提取的相关探究活动；详细步骤如下：材料处理：称取新奇的花菜、辣椒和蒜黄各 2 份每份 l0 g ；剪碎后分成两组,一组置于 20、另一组置于一 20条件下储存 24 h ；DNA粗提取：第一步：将上述材料分别放人研钵中,各加入 取滤液备用；l5 mL 研磨液,充分研磨；用两层纱布过滤其次步：先向6 只小烧杯中分别注人10mL滤液,再加人20 mL 体积分数为95的冷酒精溶液,然后用玻璃棒慢慢地向一个方向搅拌,使絮状物缠绕在玻璃棒上；名师归纳总结 第三步：取6 支试管,分别加入等量的2 mol L NaCl 溶液溶解上述絮状物；5 min ,待试管冷却后比第 3 页,共 6 页DNA检测：在上述试管中各加入4 mL 二苯胺试剂；混合匀称后,置于沸水中加热较溶液的颜色深浅, 结果如下表；- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 学习必备 欢迎下载分析上述试验过程,回答以下问题：1 该探究性试验课题名称是；2 其次步中” 慢慢地” 搅拌,这是为了削减3 依据试验结果,得出结论并分析；结论 1：与 20相比,相同试验材料在-20 条件下储存,DNA的提取量较多；结论 2：；针对结论 I 请提出合理的说明：；4 氯仿密度大于水,能使蛋白质变性沉淀,与水和 DNA均不相溶,且对 DNA影响微小；为了进 一步提高DNA纯度,依据氯仿的特性在 DNA粗提取第三步的基础上连续操作的步骤是：；然后用体积分数为 95的冷酒精溶液使 DNA析出；【答案】（1）探究 不同材料和不同储存温度对 DNA提取量的影响（2） DNA断裂（3）等质量的不同试验材料,在相同的储存温度下,从蒜黄 提取的 DNA量最多低温抑制了向光酶的活性,DNA降解速度慢（4）将第三步获得的溶液与等量的氯仿充分混合,静置一段时间,吸取上清液【解析】此题考查了 DNA粗提取技术的原理、操作过程及同学分析、判定才能,从题目试验看出,该实验的课题是探究不同材料和不 同储存温度对 DNA提取量的影响；在试用其次步中,为了防止 DNA断裂,要慢慢的搅拌,从表中结果看出,由于低温抑制了相关酶的活性,DNA降解慢,使得相同材料在低温储存下,DNA提取量大,在相同条件先,蒜黄蓝色最深,说明相同条件下从蒜黄中提取的DNA量最大,由于氯仿密度比水大,可使蛋白质变性后沉淀,而与水、DNA不相溶,这样可将第三步获得的溶液与等量的氯仿混合,静置一段时间,吸取上清液即可得到较纯洁的 DNA；巩固练习1、DNA粗提取试验中有三次过滤：过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液过滤含粘稠物的 0.14mol/LNaCl溶液过滤溶解有 DNA的 2mol/LNaCl 溶液,以上三次过滤分别为了获得（）A含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含 DNA的滤液B含核物质的滤液、滤液中 DNA粘稠物、含 DNA的滤液C含核物质的滤液、滤液中 DNA粘稠物、纱布上的 DNA D含较纯的 DNA滤液、纱布上的粘稠物、含 DNA的滤液2、在 DNA提取过程中,最好使用塑料试管和烧杯,目的是（）A. 不易破裂 B. 削减提取过程中 DNA的缺失 C. 增加 DNA的含量 D. 简单洗刷3、以下操作中,对 DNA的提取量影响最小的是（）A. 使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂,放出 DNA等核物质B. 搅拌时,要使用玻璃棒沿一个方向轻缓搅拌C.在“ 析出 DNA粘稠物” 时,要慢慢加蒸馏水,直至溶液中粘稠物不再增加名师归纳总结 D.在用酒精沉淀DNA时,要使用冷酒精,甚至再将混合液放入冰箱中冷却第 4 页,共 6 页4、在向溶解DNA的 NaCl 溶液中,不断加入蒸馏水的目的是（）A. 加快溶解 DNA的速度 B.加快溶解杂质的速度C.削减 DNA的溶解度,加快DNA析出 D. 减小杂质的溶解度,加快杂质的析出- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 学习必备 欢迎下载5、以下有关“ 利用菜花进行 DNA的粗提取与鉴定” 试验的表达中,正确选项（）A采纳不同浓度的 NaCl 溶液反复溶解与析出 DNA的方法可去除部分蛋白质等杂质B在切碎的菜花中加入肯定量的蒸馏水,充分研磨后过滤猎取滤液C用蒸馏水将 NaCl 溶液浓度调至 014molL,滤去析出物D将白色丝状物溶解在 2molLNaCl 溶液中,加入二苯胺试剂即呈蓝色6、PCR技术的基本原理是 A. 以 mRNA为模板形成 DNA的逆转录过程 B. 碱基互补配对原就C.双链 DNA分子复制的原理 D.分子杂交的原理7、应用 PCR技术扩增目的基因,目的基因两条链的解开是由于 A.Taq 聚合酶的催化 B. 受热变性 C.DNA水解酶的催化 D. 解旋酶的催化8、PCR技术通过对目的基因进行扩增,可以得到大量的目的基因,下面对该技术的表达,不正确选项 A. 遵循的基本原理是双链 DNA复制 B. 每扩增一次温度发生 9075 55变化C.扩增仪内必需加入引物、原料和 DNA聚合酶 D. 呈指数式扩增,约为 2 n,n 为扩增次数9、在基因工程中,把选出的目的基因 共 1000 个脱氧核苷酸对,其中腺嘌呤脱氧核苷酸 460 个 放入 PCR仪中扩增 4 代,那么,在 PCR仪中放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数至少应是 A.640 B.8100 C.600 D.8640 10、聚合酶链式反应 PCR 技术 是体外酶促合成特异 DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延长等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的 PCR技术的表达不正确选项 DNA得以快速扩增,其简要过程如下图所示；以下关于A.PCR技术是在试验室中以少量 DNA制备大量 DNA的技术 B. 是一种酶促反应C.PCR技术需要引物,引物是两种RNA D.应用 PCR技术与探针杂交技术可检测基因突变11、PCR技术成为分子生物试验的一种常规手段,在很短的时间内,可以将 DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍,使分子生物试验所需的遗传物质不再受限于活的生物体；1 加热至 94 的目的是使DNA样品的键断裂,这一过程在生物体细胞内是通过酶的作用来完成的；2 新合成的 DNA分子与模板DNA分子完全相同的缘由是和；3 下图表示 b 和 c 加入 PCR仪中一个 DNA片段的两条链,请据图回答：图中所示的DNA片段的两条链的走向；名师归纳总结 图中的a 和 d 表示,它们是同一种类吗. ；第 5 页,共 6 页新 DNA单链的合成方向是；4 如要检测一个人是否感染了艾滋病病毒,你认为可以用PCR扩增血液中的A. 白细胞 DNA B.病毒蛋白质 C.血浆抗体 D.病毒核酸进行；5 新合成的 DNA分子与模板DNA分子完全相同缘由是合成过程严格依据- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 学习必备 欢迎下载6 通过 PCR技术使 DNA分子大量复制时,如将一个用 15N 标记的模板 DNA分子 第 1 代 放入试管,以 14N的脱氧核苷酸为原料,连续复制到第 5 代时,含 15N标记的单链数占全部单链数的；7 某个 DNA样品有 1 000 个脱氧核苷酸,已知它的一条单链上碱基AGTC=1234,就经过 PCR仪五次扩增后,将产生 个 DNA 分子,其中需要供应胸腺嘧啶脱氧核苷酸的数量至少是个；名师归纳总结 8 比较 PCR技术中 DNA扩增与人体细胞内的DNA复制过程,主要不同之处是；第 6 页,共 6 页1 氢解旋 2DNA 分子中特殊的双螺旋结构复制过程中严格遵循碱基互补配对原就3 相反引物不是5 端向3 端延长 4D 5碱基互补配对原就 61/16 732 6200 8DNA 扩增所需酶耐高温,而人体内DNA聚合酶最适温度为37 左右,不耐高温- - - - - - -