2022年现代分子生物学试题及答案.docx

精选学习资料 - - - - - - - - - 现代分子生物学习题及答案 一、填空题 1 基因工程是 70 岁月进展起来的遗传学的一个分支学科；2基因工程的两个基本特点是：1分子水平上的操作,2细胞水平上的表达3基因克隆中三个基本要点是：克隆基因的类型；受体的挑选；载体的挑选 4 通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段,可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的 限制性酶切图谱；5限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原就命名的,第一个大写字母取自 属名的第一个字母,其次、三两个字母取自 _种名的前两个字母,第四个字母就用 株名 表示；6部分酶切可实行的措施有：间； 3增大反应体积等；1削减酶量； 2缩短反应时7第一个分别的限制性内切核酸酶是 EcoK ；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是 _ EcoRl；8限制性内切核酸酶 BsuRI 和 Hae的来源不同, 但识别的序列都是 GGCC,它们属于 异源同工酶 ；9DNA 聚合酶 I 的 Klenow 大片段是用 _枯草杆菌蛋白酶 切割 DNA 聚合酶 I 得到的分子量为 76kDa 的大片段,具有两种酶活性：1 5'-3'合成酶的活性 ； 2 3'-5'外切核酸酶 的活性；10为了防止DNA 的自身环化,可用碱性磷酸酶 去双链DNA_ 5 端的磷酸基团 ；11EGTA 是_Ca2+_离子螯合剂；12测序酶是修饰了的T7 DNA 聚合酶,它只有_ 5'-3'合成酶的活性,而没有3'-5'外切 酶的活性；13切口移位 nick translation法标记 DNA 的基本原理在于 利用 DNA 聚合酶 I 的_5'一 3'外切核酸酶 和 5'一 3'合成酶 的作用；名师归纳总结 14欲将某一具有突出单链末端的双链DNA 分子转变成平第 1 页,共 31 页末端的双链形式, 通常可采纳 _ S1 核酸酶切割 或 DNA 聚- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 合酶补平 ；15反转录酶除了催化DNA 的合成外,仍具有_核酸水解酶 H 的作用,可以将DNA- RNA 杂种双链中的 _RNA_ 水解掉；16基因工程中有3 种主要类型的载体：质粒 DNA ,病毒DNA ,质粒和病毒DNA 杂合体 ；17就克隆一个基因 必需包括三个部分：DNA 片段 来说,最简洁的质粒载体也 _复制区：含有复制起点； 挑选标记：主要是抗性基因；克隆位点：便于外源DNA的插入 ；另外,一个抱负的质粒载体必需具有低分子量；18一个带有质粒的细菌在有EB 的培育液中培育一段时间后,一部分细胞中已测不出质粒,这种现象叫 质粒排除 或治愈 ；19pBR322 是一种改造型的质粒,它的复制子来源于pMBl,它的四环素抗性基 因来自于 pSCl01,它的氨苄青霉素抗性基因来自于pSF2124R 质粒 ；20YAC 的最大容载才能是 才能是1000kb,BAC 载体的最大容载 300kb ；复制的质21pSCl01 是一种严紧粒；22pUCl8 质粒是目前使用较为广泛的载体；pUC 系列的载 体是通过 pBR322 和 M13两 种 质 粒 改 造 而 来 ； 它 的 复 制 子 来 自pMBl,Amp DNA抗性基因就是来自转座子；23噬菌体之所以被选为基因工程载体,主要有两方面的原 因：一是 它在细菌中能够大量繁衍,这样有利于外源的扩增 ； 二是 对某些噬菌体 如噬菌 的遗传结构和功能研究得比较清晰,其大肠杆菌宿主系统的遗传也讨论得比较详 尽；24 野生型的 M13 不适合用作基因工程载体,主要缘由是名师归纳总结 没有合适的限制性内切核酸酶识别位点和挑选标记 ；第 2 页,共 31 页25黏粒 cosmid 是质粒噬菌体杂合载体,它的复制子- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 来自 质粒 、COS 位点序列来自克隆片段达到45 kb；噬菌体 ,最大的26野生型的 噬菌体 DNA 不宜作为基因工程载体,原因是： 1 分子量大, 2酶的多切点, 3无挑选标记27噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA 共同构成的,其中来自质粒的主要结构是 复制区 ,而来自噬菌体的主要结构是IG 区；28噬菌体载体由于受到包装的限制,插入外源 DNA 片段后,总的长度应在噬菌体基29因组的75 105的范畴内；EDTA 和在分别 DNA 时要使用金属离子螯合剂,如柠檬酸钠等,其目的是螯合 Mg 2+离子,抑制核酸酶的活性；30用乙醇沉淀 DNA 时,通常要在 DNA 溶液中加人单价的阳离子,如 NaCl 和 NaAc ,其目的是 中和 DNA 分子的负电荷,增加 DNA 分子间的凝结力 ；31 引物在基因工程中至少有 4 个方面的用途：1合成探针； 2合成 cDNA ；3用于 PCR 反应； 4进行序列分析32Clark 发觉用 Taq DNA 聚合酶得到的 平末端,而是有一个突出PCR 反应产物不是碱基末端的双链 DNA 分子；依据这一发觉设计了克隆 PCR 产物的 T载体 ；33在 cDNA 的合成中要用到 其次链合成时形成的发夹环S1 核酸酶,其作用是切除在34乙醇沉淀 DNA 的原理是 乙醇使 DNA 分子脱水 ；35假定克隆一个编码某种蛋白质的基因,必需考虑其表 达的三个基本条件：1保持正确的可读框2能够使其转录的启动子3具有翻译的起始和终止信号36受体细胞的感受态是接受外源 DNA 的生理状态 _；37DNA 重组连接的方法大致分为四种：接； 2平末端连接； 3同聚物接尾连接；1黏性末端连 4接头连接法 ；名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页,共 31 页精选学习资料 - - - - - - - - - 38将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个基因组 DNA 克隆 _,各种此类质粒的集合体称之为构建了一个 基因组 DNA 文库 ；39将含有一个 mRNA 的 DNA 拷贝的克隆称作一个 _cDNA克隆 ,源于同一批 RNA 制备物的克隆群就构建了一个 _cDNA 文库 _；40只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成,用_聚合酶链式反应PCR可以将这段DNA进行百万倍的扩增；41人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为 42 C _时摄人 DNA ；0 C 时吸附 DNA, 42目前,在重组体的挑选中,已经进展了很多构思奇妙、具有极高精确性的挑选方法；大致可以分为：1遗传学方法；2物理挑选法；3核酸杂交法； 4表达产物分析法等；43PCR 扩增挑选重组体是比较简便的挑选方法,它适合于 _插入外源片段的种类较多,大小又极为相像的重组体的筛 选；44 核酸杂交探针可分为两大类：DNA 探针和 RNA 探针；其中 DNA 探针又分为 _基因组 DNA 探针和 cDNA 探针；45假如用限制性内切核酸酶切割双链DNA 产生 5 突出的黏性末端,就可以用 _ Klenow 酶填补的方法 _进行 3 末端标记；假如用限制性内切核酸酶切割 DNA 产生的是 3 突出的黏性末端,可以用 _ T4DNA 聚合酶 进行 3末端标记；46单链 DNA 探针的标记可以采纳以下方法：1用 M13 噬菌体载体合成单链 DNA 探针；2从 mRNA 反转录合成单链 cDNA 探针； 3用不对称 PCR 合成单链 DNA探针；47依据 Northern 杂交的结果可以说明：了转录 _；外源基因是否进行48差示杂交 differential hybridization 技术需要 _两种不同 的细胞群体能够表达不同的基因,即在一个群体中能够表达一些基因,而在另一个细胞群体中不能表达这名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 31 页精选学习资料 - - - - - - - - - 些基因 ；49RNA 分子经凝胶电泳后按大小不同分开,然后被转移到一张硝酸纤维素膜尼龙膜 上,同一放射 DNA 探针杂交的技术称_ Northern 印迹 _；50在 _ Southern 印迹 _技术中, DNA 限制性片段经凝胶电泳分别后,被转移到硝酸纤维素膜 与放射性的 DNA 探针杂交；51可用 T4 DNA 聚合酶进行平末端的或尼龙膜 上,然后 DNA 标记,由于这种酶具有 _53 合成酶 _和 _35 外切核酸酶_的活性；52依据外源片段供应的遗传表型挑选重组体,必需考虑三3种因素 ：1克隆的是完整的基因；2使用的是表达载体；不含内含子 ；53Northern 印迹和 Southern 印迹有两点根本的区分：1印迹的对象不同： Northern 是 RNA ,Southern 是 DNA ；2电泳条件不同,前者是变性条件,后者是非变性条 件；54放射免疫挑选的原理基于以下三点：1抗体能够被吸附 到固体支持物上； 2同一个抗原可以同几种抗体结合；3抗体能够被标记 二、挑选题 单项或多项 1因讨论重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是 bW Gilbert cP Berg aA Kornberg dBMcClintock 23有 第一个作为重组DNA 载体的质粒是 apBR322 bColEl cpSCl01 dpUCl8 关于宿主掌握的限制修饰现象的本质,以下描述中只 不太恰当；a由作用于同一DNA 序列的两种酶构成b这一系统中的核酸酶都是类限制性内切核酸酶 c这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对 DNA 进行修饰名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 31 页精选学习资料 - - - - - - - - - d不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统4型限制性内切核酸酶： a有内切核酸酶和甲基化酶活性且常常识别回文序列供b仅有内切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提c限制性识别非甲基化的核苷酸序列 d 有外切核酸酶和甲基化酶活性供e仅有外切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提5下面有关限制酶的表达哪些是正确的. a限制酶是外切酶而不是内切酶的b限制酶在特异序列 识别位点 对 DNA 进行切割c同一种限制酶切割 DNA 时留下的末端序列总是相同d 一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA ,产生黏末端e一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链 DNA ,产生平末端6第一个被分别的类酶是： aEcoK bHind cHind dEcoB 7在以下进行 DNA 部分酶切的条件中,掌握那一项最好. a反应时间 b 酶量 c反应体积 d酶反应的温度8在以下试剂中,那一种可以螯合 Ca2+离子 . aEDTA b柠檬酸钠 cSDS dEGTA 9在以下工具酶中,那一种可以被 EGTA 抑制活性 . aS1 单链核酸酶 b 末端转移酶 c 碱性磷酸酶dBal 31 核酸酶10限制性内切核酸酶可以特异性地识别： a双链 DNA 的特定碱基对 基序列b双链 DNA 的特定碱名师归纳总结 c特定的三联密码d以上都正确第 6 页,共 31 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 11以下关于限制性内切核酸酶的表示方法中,正确一项的是 ；aSau3A I bEcoRI chind III dSau 3A1 12限制性内切核酸酶的星号活性是指： a在特别规条件下,识别和切割序列发生变化的活性；b活性大大提高同c切割速度大大加快 d识别序列与原先的完全不13下面哪一种不是产生星号活性的主要缘由. a甘油含量过高b反应体系中含有有机溶剂c含有非 Mg2+ 的二价阳离子 d酶切反应时酶浓度过低14关于宿主掌握的限制修饰现象的本质,以下描述中只有 不太恰当a由作用于同一DNA 序列的两种酶构成b这一系统中的核酸酶都是类限制性内切核酸酶 c这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对 DNA 进行修饰d不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统互补链时15在长模板链的指导下引物延长合成长的DNA应选用 aT4DNA 聚合酶bKlenow 酶c大肠杆菌 DNA 聚合酶 I dT7DNA 聚合酶16末端转移酶是合成酶类, 3,末端延长DNAa作用时不需要模板b在 Ca 2+的存在下,可以在突出的链c在 Ca 2+的存在下,可以在隐藏的3,末端延长DNA链d上述说法有两种是正确的17在基因工程中,可用碱性磷酸酶 a防止 DNA 的自身环化 行 DNA 的 5,末端标记b同多核苷酸激酶一起进名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页,共 31 页精选学习资料 - - - - - - - - - c制备突出的3,末端d上述说法都正确18以下酶中,除 外都具有磷酸酶的活性a 核酸外切酶b外切酶c单核苷酸激酶d碱性磷酸酶19以下哪一种酶作用时需要引物. a 限 制 酶b 末 端 转 移 酶c 反 转 录 酶dDNA 连接酶20S1 核酸酶的功能是 c切割发a切割双链的DNA b切割单链的RNA 夹环d以上有两项是正确的的活21Klenow 酶与 DNA 聚合酶相比,前者丢失了性；a5,-3,合成酶,b3,-5,外切酶 c5,-3,外切酶 d转移酶22下面关于放松型质粒 relaxed plasmid 性质的描述中, 是不正确的 a质粒的复制只受本身的遗传结构的掌握,而不受染色 体复制机制的制约,因而有较多的拷贝数b可以在氯霉素作用下进行扩增 性标记c通常带有抗药d同严紧型质粒融合后,杂合质粒优先使用放松型质粒的复制子23基因工程中所用的质粒载体大多是改造过的,真正的自然质粒载体很少,在以下载体体中只有 被视为用作基因工程载体的自然质粒载名师归纳总结 apBR322 bpSCl01 cpUBll0 第 8 页,共 31 页dpUCl8 24以下哪种克隆载体对外源DNA 的容载量最大 . a质粒b黏粒c酵母人工染色体YAC d 噬菌体e cDNA 表达载体25. 放松型质粒： - - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 确a在寄主细胞中拷贝数较多 b可用氯霉素扩增c一般没有挑选标记 d上述 a、b两项正26Col El 是惟一用作基因工程载体的自然质粒,这种质粒： a是放松复制型 c能被氯霉素扩增（b具有,四环素抗性 d能产生肠杆菌素27同一种质粒 DNA ,以三种不同的形式存在,电泳时,它们的迁移速率是： aOCDNA>SCDNA>LDNA bSCDNA>LDNA>OCDNA cLDNA>OCDNA>SCDNA dSCDNA>OCDNA>LDNA 28pBR322 是一种改造型的质粒,含有两个抗性基因,其 中四环素抗性基因来自： aColEl bRi 质粒cpSCl01 dpUCl8 29关于穿梭质粒载体,下面哪一种说法最正确. a在不同的宿主中具有不同的复制机制b在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点c在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶d在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率30能够用来克隆 32kb 以下大小的外源片段的质粒载体是 acharomid bplasmid Ccosmid dphagemid 31第一个作为重组 DNA 载体的质粒是 apBR322 bColEl cpSCl01 dpUCl8 32. Ti 质粒： 转移a可从农杆菌转到植物细胞中 b作为双链 DNA 被c在植物中导致肿瘤 d介导冠瘿碱的合成, 作为细菌的养分物和植物的生长激素e需要细菌的vir 基因帮忙转移f在植物细胞中作为染色体外质粒名师归纳总结 33黏粒 cosmid 是一种人工建造的载体, 第 9 页,共 31 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - a它具有 COS 位点,因而可进行体外包装b它具有质粒DNA 的复制特性c进入受体细胞后, 可引起裂解反应 d进入受 体细胞后,可引起溶源化反应34有两种确定核酸中核苷酸序列的方法：化学序列分析法Maxam-Glbert 和酶学序列分析法 序法的基本原理优点是： Sanger；酶学测 a碱基与特殊染料间不同的相互作用b一个合成引物的延长和DNA修复合成的牢靠终止c限制性位点与DNA 末端标记的相关性d可同时对 DNA 双螺旋的两条链进行测序 e反应是 DNA 特异的, RNA 不会带来干扰；这样 既削减纯化步骤,也节约了开支；35关于 cDNA 的最正确的说法是： b同 mRNA 互a同 mRNA 互补的单链DNA 补的双链 DNA c以 mRNA 为模板合成的双链DNA d以上都正确36用碱法分别质粒 DNA 时,染色体 DNA 之所以可以被除去,是由于： a染色体 DNA 断成了碎片 大,而不能释放c染色体变性后来不及复性 分开而沉淀b染色体 DNA 分子量 d染色体未同蛋白质37. 关 于 碱 解 法 分 离 质 粒DNA , 下 面 哪 一 种 说 法 不 正确. a溶液 I 的作用是悬浮菌体 DNA 变性b溶液的作用是使c溶液的作用是使 DNA 复性d质粒 DNA 分子小, 所以没有变性, 染色体变性后不能复性38. Clark 做了一个好玩的试验,发觉 TaqDNA 聚合酶可以不名师归纳总结 - - - - - - -第 10 页,共 31 页精选学习资料 - - - - - - - - - 需要模板,在双链 DNA 的末端加一个碱基,主要是加 cDNAadGTP bdATP cdCTP ddTTP 39依据构建方法的不同,基因文库分为基因组文库、文库等；在以下文库中, 属 cDNA 文库文库c 扣减文库a YAC 文库b MACd BAC 文库clone site,MCS 的描述,40下面关于多克隆位点multiple 不正确的句是 a仅位于质粒载体中b具有多种酶的识别序列c不同酶的识别序列可以有重叠 d一般是人工合成后添加到载体中41在 cDNA 技术中,所形成的发夹环可用 a限制性内切核酸酶切除 c用 S1 核酸酶切除b用 31外切核酸酶切除 d用 51外切核酸酶切除42在 DNA 的酶切反应系统中,通常： a用 SSC 缓冲液 b加入 Mg 2+作帮助因子确的c加入 BSA 等爱护剂 d上述说法中,有两项是正43黏性末端连接法,不仅操作便利,而且 a产生新切点 b易于回收外源片段 c载体不易环化 d影响外源基因的表达44在以下表型中, 是基因工程上抱负的受体菌表型ar +m +rec * br-m-rec-Cr-m-rec + dr +m +rec-45关于 DNA 接头在基因工程中的作用,以下说法中哪一项不正确 . a给外源 DNA 添加适当的切点 c调整外源基因的可读框b人工构建载体 d增加调控元件46cDNA 文库包括该种生物的 因a某些蛋白质的结构基因 b 全部蛋白质的结构基c全部结构基因 d内含子和调控区名师归纳总结 - - - - - - -第 11 页,共 31 页精选学习资料 - - - - - - - - - 47以下关于建立cDNA文库的表达中,哪哪一项错误的. a从特定组织或细胞中提取DNA 或 RNA b用反转录酶合成mRNA 的对应单链DNA . c以新合成的单链DNA 为模板合成双链DNA d新合成的双链DNA 甲基化48以下对黏性末端连接法的评判中,哪哪一项不正确的 a操作便利b易于回收片段c易于定向重组d载体易于自身环化, 降低重组率49关于感受态细胞性质的描述,下面哪一种说法不正确. 功具有可诱导性 b具有可转移性c细菌生长的任何时期都可以显现 现感受态的比例是不同的d不同细菌出50下面关于用T4 多核苷酸激酶标记5' 端制备探针的描述中 是不正确的；RNA b既能标记a既能标记 DNA ,又能标记双链 DNA 又能标记单链DNA c只能标记突出的5' 端不能标记其他类型末端dDNA 或 RNA 必需有 5'-OH 的存在 51Southem 印迹的 DNA 探针 杂交；a只与完全相同的片段 序列的 DNA 片段c可与任何含有互补序列的b可与任何含有相同 DNA 片段 d 可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段e以上都是52 用以下方法进行重组体的挑选,只有 说明外源基因进行了表达；aSouthem 印迹杂交 cWestern 印迹bNorthem 印迹杂交 d原位菌落杂交名师归纳总结 53以下哪一个不是Southern 印迹法的步骤 . 第 12 页,共 31 页a用限制酶消化DNA aDNA 与载体的连接- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - c用凝胶电泳分别DNA片段dDNA片段转移至硝酸纤维素膜上e用一个标记的探针与膜杂交54 报告基因 a以其易于分析的编码序列代替感爱好基因的编码 序列b 以其易于分析的启动子区代替感爱好基因的启动 子区c 能用于检测启动子的活性 动子何时何处有活性d能用于确定启55 在利用 lacZ 失活的显色反应挑选法中,IPTG 的作用是 a诱导宿主的 肽的合成 b诱导宿主的 肽的合成剂c 作为酶的作用底物 d 作为显色反应的指示56. 切口移位是指在 作用下,使 带上放射性标记；aDNA 聚合酶 I,RNA cDNA 聚合酶, RNA bDNA 聚合酶 I,DNA dDNA 聚合酶, DNA 57用于核酸分子杂交的探针可以是放射性标记的 aDNA bRNA c抗体 d抗原58Southern 印迹是用 DNA 探针检测 DNA 片段,而 Northern印迹就是： a用 RNA 探针检测 DNA 片段 检测 RNA 片段c用 DNA 探针检测 RNA 片段 检测蛋白质片段b用 RNA 探针 d用 DNA 探针59用免疫化学法挑选重组体的原理是 的表达a依据外源基因的表达 b依据载体基因c依据 mRNA 同 DNA 的杂交 d依据 DNA 同DNA 的杂交名师归纳总结 - - - - - - -第 13 页,共 31 页精选学习资料 - - - - - - - - - 60随机引物标记探针,以下各项中哪哪一项不正确的. a双链DNA 、单链DNA 、 RNA都是可以标记的b不需要用 Dnase I 预处理c反应时可用Klenow 酶d反应时可用DNA聚合酶 1 61在切口移位标记 DNA 探针时只能使用 aKlenow 酶 bDNA 聚合酶 I cDNA聚合酶 dDNA 聚合酶62要对一双链的 DNA 分子进行 31末端标记,可用 aKlenow 酶 bDNA 聚 合 酶 I cT4DNA 聚合酶 答案dT7DNA 聚合酶1c；2c； 3b； 4b 5b,C,d,e； 6c； 7b； 8d；9d；10B；11d；12a； 13d； 14b 15d； 16c；17a,b；18a；19c；20d；21c；22C；23b； 24C；25d；26a,C,d；27b；28c； 29b；30a；31c； 32a,c,d,e,33a,b,c；34b； 35c；36c； 37d； 38b；39c；40a；41c； 42a,b,c； 43b； 44b； 45d； 46 a；47 a； 48c； 49c；50 b；51 c； 52c；53 b； 54a,c,d； 55a； 56b；57a,b； 58 c；59 a；60d；61b； 62c；三、简答题1说明 Sanger DNA 测序法的原理；Sanger DNA 测序法是建立在两个基本原理之上：1核酸是依靠于模板在聚合酶的作用下由 5'端向 3'端聚合 DNA 聚合酶参加了细菌修复 DNA 合成过程 ；2 可延伸的引物必需能供应游离的 3'羟基末端,双脱氧核苷酸由于缺少游离的 3'羟基末端,因此会终止聚合反应的进行；假如分别用4 种双脱氧核苷酸终止反应,就会获得 4 组长度不同的DNA 片段；通过比较全部DNA 片段的长度可以得知核苷酸的序列；2某同学在用 EcoRI 切割外源 DNA 片段时,显现了星号活性,请分析可能的缘由 . 盐离子浓度不对,温度不对,甘油浓度过高；3在序列 5'-CGAACATATGGAGT-3' 中含有一个 6bp 的类限制性内切核酸酶的识别序列,该位点的序列可能是什么 . 回文序列是： 5'-CATATG-3,4下面几种序列中你认为哪一个哪些 最有可能是类酶的识别序列：GAATCG ,AAATTT ,GATATC ,ACGGCA. 为什么 . GATATC；AAA TTT ,由于它们是回文序列；5当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时,如要进行双酶切,应实行什么措施 为什么 . . 留意星活性,先低盐,后高盐；先低温酶,后高温酶；并且可以直接在换酶前将第一种酶失活,再加其次种酶,否就,易产生星活性；或使用通用缓冲液；名师归纳总结 6为什么反转录酶在聚合反应中会出错. 3'-5'外切核酸酶活性,所以聚第 14 页,共 31 页由于反转录酶缺少在Ecoli DNA聚合酶中起校正作用的- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 合反应往往会出错,在高浓度的dNTP 和 Mg2+ 下,每 500 个碱基中可能有一个错配；7什么是测序酶 sequenaseTM. 从外切核酸酶结构域中所谓测序酶即是修饰了的T7 DNA 聚合酶, 是采纳缺失的方法,除去 28 个氨基酸,这样使 T7 DNA 聚合酶完全失去了3'-5'的外切核酸酶活性, 只有 5'-3'聚合酶的活性,而且聚合才能提高了 39 倍,测序常常用此酶；8什么是 S1 核酸酶作图 S1 nuclease mapping. S1 核酸酶作图是一种对RNA 转录产物的末端和剪接位点进行作图的方法9 YAC 载体具有什么样的功能性DNA 序列 .为什么在克隆大片段时,YAC 具有优越性. YAC 带有自然染色体全部的功能元件,包括一个着丝粒,一个 DNA 复制起点,两个端粒； YAC 能够容纳长达几百 kb 的外源 DNA ,这是质粒和黏粒办不到的；大片段的插入更有可能包含完整的基因,在染色体步移中每次答应更大的步移距离,同时能够削减完整基因组文库所需的克隆数目；10 列举质粒载体必需具备的 4 个基本特性；1独立复制；2有挑选标记；3有特殊的酶切位点；4能转化但不扩散；11 什么叫穿梭载体？含有细菌质粒和克隆的真核生物 DNA 片段的杂种质粒,有两个复制起点和既能在细菌又能在真核细胞中进行挑选的挑选标记,所以, 很简洁从一宿主转到另一个宿主 来回穿梭；12如何将野生型的噬菌体改造成为一个抱负的载体. 3添加挑选标记；1削减分子量 除去非必需区和整合区；2削减酶切位点；4引入终止突变13PCR 的基本原理是什么.用 PCR 扩增某一基因,必需预先得到什么样的信息. 1DNA 半保留复制的原理,在体外进行DNA 的变性、复性和引物延长；2至少要预先知道足够合成一对引物的靶 DNA 序列；14cDNA 克隆与基因组克隆有何不同 . 基因组克隆包含全部不在 cDNA 中显现的内含子；15怎样将一个平末端 DNA 片段插入到 EcoR I 限制位点中去 . 化学合成一些长为 10bp 含有 EcoRI 识别位点的短的 DNA 片段,然后与待克隆片段两端连接起来,假如用 EcoRI 切割这种连接片段,就会产生 EcoRI 的单链末端；这种片段就可以插入到任何 EcoRI 的限制性内切酶位点中