2022年重金属检测法 .pdf
重金属检测法本法所指的重金属系指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。标准铅溶液的制备称取硝酸铅0.1599g ，置 1000ml 量瓶中 , 加硝酸 5ml 与水 50ml 溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取贮备液10ml，置 100ml 量瓶中， 加水稀释至刻度，摇匀， 即得 ( 每 1ml 相当于10g的 Pb)。本液仅供当日使用。配制与贮存用的玻璃容器均不得含铅。第一法除另有规定外，取25ml 纳氏比色管三支，甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml后，加水或该药品项下规定的溶剂稀释成25ml，乙管中加入按各品种项下规定的方法制成的供试液25ml，丙管中加入与乙管相同量的供试品，加配制供试品溶液的的溶剂适量使溶解，再加与甲管相同量的标准铅溶液与醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml后，用溶剂稀释成 25ml，假设供试液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液, 使之与乙管、丙管一致; 再在甲、乙、丙三管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置 2 分钟， 同置白纸上， 自上向下透视，当丙管中显出的颜色不浅于甲管时，乙管中显示的颜色与甲管比较，不得更深，如丙管中显出的颜色浅于甲管，应取样按第二法检查。如在甲管中滴加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液仍不能使颜色一致，应取样按第二法检查。供试品中如含高铁盐影响重金属检查时，可在甲、乙、丙三管中分别加入相同量的维生素 C0.5-1.0g ，再照上述方法检查。配制供试品溶液时，如使用的盐酸超过1ml，氨试液超过2ml，或加入其他试剂进行处理者，除另有规定外，甲管溶液应取同样同量的试剂置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水 15ml，微热使溶解后，移置纳氏比色管中，加标准铅溶液一定量，再用水或各种项下规定的溶剂稀释成25ml。第二法除另有规定外，当需改用第二法检查时，取各品种项下规定量的供试品，按炽灼残渣检查法 ( 附录 N) 进行炽灼处理，然后去遗留的残渣; 或直接取炽灼残渣项下遗留的残渣;如供试品为溶液，则取各品种项下规定量的溶液，蒸发至干， 再按上述方法处理后取遗留的精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页，共 7 页残渣 ; 加硝酸 0.5ml ，蒸干 , 至氧化氮蒸气除尽后( 或取供试品一定量，缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.51.0ml,使恰湿润 , 用低温加热至硫酸除尽后，加硝酸0.5ml ，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在500600炽灼使完全灰化) ，放冷，加盐酸2ml，置水浴上蒸干后加水 15ml，滴加氨试液至对酚酞指示液显微粉红色，再加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml ，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加水稀释成25ml，作为乙管 ; 另取配制供试品溶液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水 15ml，微热溶解后， 移置纳氏比色管中，加标准铅溶液一定量，再用水稀释成25ml，作为甲管 ; 再在甲、乙两管中分别加硫代乙酰胺试液个 2ml，摇匀，放置2 分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。第三法除另有规定外，取供试品适量，加氢氧化钠试液5ml 与水 20ml 溶解后，置纳氏比色管中, 加硫化钠试液5 滴, 摇匀 , 与一定量的标准铅溶液同样处理后的颜色比较，不得更深。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页，共 7 页操作规程重金属检查法简述1.1 重金属是指在规定实验条件下能与显色剂作用显色的金属杂质。中国药典2005 年版二部附录 H 采用硫代乙酰胺试液或硫化钠试液作显色剂，以铅(Pb) 的限量表示。1.2 由于实验条件不同，分为 4 种检查方法 : 第一法适用于供试品不经有机破坏，在酸性溶液中进行显色的重金属限度检查; 第二法适用于供试品需灼烧破坏，取炽灼残渣项下遗留的残渣，经处理后在酸性溶液中进行显色的重金属限度检查; 第三法用来检查能溶于碱而不溶于稀酸 ( 或在稀酸中即生成沉淀) 的药品中的重金属; 第四法用微孔滤膜过滤，使重金属硫化物沉淀富集成色斑，用于有色溶液或重金属限度较低的品种。检查时， 应根据药典品种项下规定的方法选用。1.3 四种方法显示的结果均为微量重金属的硫化物微粒均匀混悬在溶液中所呈现的颜色; 采用滤膜法可获得 色斑 ; 如果重金属离子浓度大，加入显色剂后放置时间长，就会有硫化物聚集下沉。1.4 重金属硫化物生成的最正确pH值是 3.03.5 ，选用醋酸盐缓冲液(pH 3 ，5)2.0ml调节 pH 较好，显色剂硫代乙酰胺试液用量经实验也以2.0ml 为佳，显色时间一般为2 分钟。以 1020ug 的 Pb 与显色剂所产生的颜色为最正确目视比色范围。在规定实验条件下，与硫代乙酰胺试液在弱酸条件下产生的硫化氢呈色的金属离子有银、铅、汞、铜、镉、铋、锑、锡、砷、锌、钴与镍等。1.5 由于在药品生产过程中遇到铅的时机较多，且铅易积蓄中毒，故以铅作为重金属的代表，用硝酸铅配制标准铅溶液。折叠仪器与用具重金属检查法2.1 纳氏比色管应选玻璃质量好、无色( 尤其管底 ) 、配对、 刻度标线高度一致的纳氏比色管。2.2 滤器见中国药典2005 年版二部附录 H 重金属检查法第四法附图，由具有螺纹丝扣并能密封的上、下两部分以及垫圈、滤膜和辅助滤板组成。滤器上盖部分A的入口处应能与50ml 注射器紧密联接，滤器下部F 的出口处能套上一合适橡皮管。A与 F能通过螺纹丝扣密封。垫圈应内径光滑、大小相同，以使斑点边缘圆整、清楚、大小一致。在滤器上加上橡皮垫圈，既可使滤膜与滤板紧密结合，又可防止在旋紧滤器接头时扭曲或损坏滤膜。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页，共 7 页滤膜的直径为10mm ，孔径为 3.0um，使用前在水中浸泡24 小时以上，可使色斑均匀。2.2.4 50ml注射器，应能与滤器上盖入口处紧密联接折叠试药和试液3.1 标准铅溶液精密称取在105干燥至恒重的硝酸铅0.160g ，置 1000ml 量瓶中，加硝酸 5ml 与水 50ml 溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液 10ml，置 100ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得( 每 1ml 相当于 10ug 的 Pb ) 。3.2 硫代乙酰胺试液、硫化钠试液、醋酸盐缓冲液(pH3.5) 与抗坏血酸等均按药典附录XV的规定。3.3 稀焦糖溶液取蔗糖或葡萄糖约5g，置磁坩埚中， 在玻璃棒不断搅拌下，加热至呈棕色糊状，放冷，用水溶解成约25ml，滤过，贮于滴瓶中备用。临用时，根据供试液色泽深浅，取适当量调节使用。操作方法4.1 第一法取 25ml 纳氏比色管两支，编号为甲、乙。甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml ，加水或各品种项下规定的溶剂稀释成25ml。乙管中加入按该品种项下规定的方法制成的供试液25ml。如供试液带颜色，可在甲管中滴加稀焦糖溶液少量或其它无干扰的有色溶液，使其色泽与乙管一致。在甲、乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2.0ml ，摇匀，放置2 分钟，同置白色衬板上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。如在甲管中滴加稀焦糖溶液仍不能使颜色一致时，可取该品种项下规定的二倍量的供试品和试液，加水或该品种项下规定的溶剂使成30ml，将溶液分成甲乙二等份，乙管中加水或该品种项下规定的溶剂稀释成25ml; 甲管中加入硫代乙酰胺试液2.0ml ，摇匀，放置2分钟，经滤膜 ( 孔径 3um)滤过，然后甲管中加入标准铅溶液一定量，加水或该品种项下规定的溶剂使成25ml，再在乙管中加入硫代乙酰胺试液2.0ml ，甲管中加水2.0ml ，照上述方法比较，即得。供试品中如含高铁盐而影响重金属检查时，可取该品种项下规定方法制成的供试液，加抗坏血酸0.51.0g ，并在对照溶液中加入相同量的抗坏血酸，再照上述方法检查。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页，共 7 页配制供试品溶液时，如使用的盐酸超过1.0ml( 或与盐酸1.0ml 相当的稀盐酸 ) ，氨试液超过 2.0ml ，或加入其他试剂进行处理者，除另有规定外，对照液中应取同样同量的试剂置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2.0ml与水 15ml 溶解后移置甲管中，加标准铅溶液一定量，再加水稀释成25ml。4.2 第二法除另有规定外， 取该品种在500600灼烧的炽灼残渣项下遗留的残渣，加硝酸 0.5ml蒸干， 至氧化氮蒸气除尽后，加盐酸2.0ml ，置水浴上蒸干后加水25ml，滴加氨试液至对酚酞指示液显中性，再加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2.0ml，微热溶解后， 移置乙管中，加水稀释成25ml。如不取炽灼残渣项下遗留的残渣，则可取供试品一定量，缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸 0.51.0ml ，使恰湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加硝酸0.5 ml，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后， 放冷，在 500600炽灼使完全灰化， 再按 4.2.1自放冷，加盐酸 2.0ml 起，依法操作至 加水稀释成25ml 。取配制供试溶液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2.0ml与水 15ml，微热溶解后，移置甲管中，加标准铅溶液一定量，加水稀释成25ml。按 4.1.5方法检查。4.3 第三法取 25ml 纳氏比色管两支，编号为甲、乙。除另有规定外，取供试品适量，加水20ml 与氢氧化钠试液5ml 溶解后，置乙比色管中。取一定量的标准铅溶液，与4.3.2同样处理，置甲管中。于甲、乙两管中各加硫化钠试液5 滴，摇匀。甲、乙两管同置白色衬板上，自上向下透视，乙管中所显的颜色与甲管比较，不得更深。4.4 第四法标准铅斑的制备精密量取标准铅溶液一定量，置小烧杯中，加水或各品种项下规定的溶剂稀释成10ml，加入醋酸盐缓冲液(pH3.5)2.0ml与硫代乙酰胺试液1.0ml ，摇匀，放置 10 分钟，用 50ml 注射器转移至过滤器中进行压滤( 滤速约为每分钟1ml) ，滤毕，取下滤膜，放在滤纸上千燥，即得。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页，共 7 页检查法照各品种项下规定方法制成的供试液10ml，照 4.4.1标准铅斑的制备，自加入醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml起，依法操作，将生成的色斑与标准铅斑比较，不得更深。假设供试溶液有颜色或浑浊，应用滤膜进行预滤，如滤膜上有污染，应换滤膜再滤，直至滤膜不再染色; 然后取滤液10ml，照标准铅斑的制备，自 加入醋酸盐缓冲液 (pH3.5)2.0ml起，依法操作。所得供试液的铅斑与标准铅斑比较，不得更深。注意事项5.1 标准铅溶液应在临用前精密量取标准铅贮备液新鲜稀释配制，以防止硝酸铅水解而造成误差，配制与贮存标准铅溶液使用的玻璃容器，均不得含有铅。5.2 硫代乙酰胺试液与重金属反应的最正确pH值是 3.5 ， 故配制醋酸盐缓冲液(pH3.5)时，要用pH计调节，硫代乙酰胺试液加入量以2.0ml 时呈色最深 ; 第四法中的检测范围为25ug 的 Pb，且因体积小，所以硫代乙酰胺试液的用量为。硫代乙酰胺试液显色剂的最正确显色时间为2 分钟， 除第四法由于检测限量低，且为了方便过滤，显色时间为10 分钟外，第一、二法均为放置2 分钟。5.3 为了便于目视比较，第一、二和三法中的标准铅溶液用量以2.0ml( 相当于 20ug的 Pb)为宜，小于1.0ml 或大于 3.0ml ，呈色太浅或太深，均不利于目视比较。5.4 如需将炽灼残渣项下遗留的残渣作重金属检查时，则炽灼温度必须控制在500600。实验证明，炽灼温度在700以上时，多数重金属盐都有不同程度的损失; 以铅为例， 在 700经 6 小时炽灼，损失达68。某些供试品 ( 如安乃近， 诺氟沙星等 ) 在炽灼时能腐蚀瓷坩埚而带入较多的重金属，应改用石英坩埚或铂坩埚操作。5.5 炽灼残渣加硝酸处理，必须蒸干，至氧化氮蒸气除尽，否则会使硫代乙酰胺水解生成的硫化氢， 因氧化析出乳硫，影响检查。蒸干后残渣加盐酸处理，使重金属转化为氯化物，在水浴上蒸干以赶除多余的盐酸，加水溶解， 加入酚酞指示液1 滴，再逐滴加入氨试液，边加边搅拌，直到溶液刚显浅红色为止，再加醋酸盐缓冲液(pH3.5) 使供试液的pH调节至3.5 。5.6 供试品中如含有高铁盐，在弱酸性溶液中会使硫代乙酰胺水解生成的硫化氢进一步氧化析出乳硫，影响检查，可加入抗坏血酸将高铁离子复原为亚铁离子而消除干扰。5.7 如供试品自身为重金属的盐，在检查这类药品中的其他重金属时，必须先将供试品本身的金属离子除去，再进行检查。如在枸橼酸铁铵中检查铅盐时，利用在一定浓度的盐酸中形成，用乙醚提取除去，再调节供试液至碱性，用氰化钾试液掩蔽微量的铁后进行检查; 右旋醣酐铁注射液中重金属检查，也是在一定浓度的盐酸中，用醋酸异丁酯提取除去铁盐后进行检查。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页，共 7 页5.8 药品本身生成的不溶性硫化物，影响重金属检查，可加入掩蔽剂以防止干扰。如硫酸锌和葡萄糖酸锑钠中铅盐检查，是在碱性溶液中加入氰化钾试液，或在中性溶液中加入酒石酸，使锌离子或锑离子生成稳定的络合物，再依法检查。5.9 为了消除盐酸或其他试剂可能夹杂重金属，故在配制供试品溶液时，如使用盐酸超过 1.0ml( 或与盐酸1.0ml 相当的稀盐酸 ) 或使用氨试液超过2.0ml ，以及用硫酸或硝酸进行有机破坏，或加入其他试剂进行处理者，除另有规定外，对照溶液应取同样量试液蒸干后，依法检查。5.10 当采用第四法时，将注射器套于滤器上后，让注射器内管自然下降，产生的压力比较均匀，而且对于大多数样品溶液过滤速度到达每分钟左右; 对于较粘稠的样品溶液，可施加一均匀压力使到达该速度，以保证色斑上色调的均匀性。滤过时如滤器中存在气泡则会影响色斑质量， 故在装置辅助滤板( 尼龙垫网 )、滤膜和垫圈时应以水排除气泡。滤器上端与注射器连接处的尺寸大小应以两者能严密嵌合为宜，以免滤过时溶液溢漏; 必要时可改用乳胶管连接。6 记录与计算6.1 记录必须记录所采用的方法，供试品取样量，标准铅溶液取用量，操作过程中使用的特殊试剂， 试液名称和用量或对检查结果有影响的试剂用量，实验过程中出现的现象及实验结果等。6.2 计算标准铅溶浓度计算例如葡萄糖注射液中重金属检查，取本品适量 ( 约相当于葡萄糖3g) ，必要时， 蒸发至约 ，放冷，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水适量使成25ml， 依法检查， 按葡萄糖含量计算，含重金属不得过百万分之五 ，计算标准铅溶液取用量。7 结果判定7.1 第一、二、三法，甲管与乙管比较，乙管所呈颜色浅于甲管，判为符合规定。7.2 第四法，供试液所得斑点浅于标准铅瘫的颜色，判为符合规定。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页，共 7 页
