植物生理学-过氧化氢酶的活性的测定.doc

Four short words sum up what has lifted most successful individuals above the crowd: a little bit more.-author-date植物生理学-过氧化氢酶的活性的测定过氧化氢酶的活性的测定紫外线吸收法过氧化氢酶的活性的测定紫外线吸收法一、原 理 H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度（A240）随反应时间而降低。根据测量率的变化速率即可测出过氧化氢酶的活性。二、材料与设备 植物材料：植物的叶 实验材料：紫光分光光度计、离心机、研钵、250ml容量瓶、0.5ml吸管1支、10ml试管1支 试剂：0.2mol/LpH7.8磷酸缓冲液 0.1mol/ H2O2（用0.1mol/L高锰酸钾标定）三、操作步骤 1、酶提取液：称取叶片0.5g置于研钵中，加入pH7.0的磷酸缓冲液研磨成为匀浆，并用缓冲溶液清洗研钵数次（共用6ml磷酸缓冲液，缓冲液分几次加入），取上部澄清液在4000rpm下离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗提液。保存备用。 2、测定：取10ml试管1支，按表20-2顺序加入试剂。紫外线吸收法测定H2O2样品配置表管号S1粗酶液0.2pH7.8磷酸1.5蒸馏水1.0在管中加入0.3ml0.1mol/L的H2O2，加完后立即计时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔一分钟读数一次，共测三分钟，测完后，按下式计算酶活性。四、结果计算以1min内减少0.1的酶量为一个酶活单位（u） A240×VT 过氧化氢酶活性（u/gFW/min）=0.1×V×t×FW =0.043×4.6÷0.1÷0.2÷0.3÷3 =10.99五、实验反思 1、影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些？过氧化氢酶提取自植物的新鲜叶片中，新叶与旧叶的酶活性存在差异，所以叶片的选择会影响酶活性的测定。 温度的变化也会引起酶活性的测定 研磨是否充分，洗涤是否洗干净也会影响。2、实验测得的吸光度较小（吸光度的起始值较低），酶活性较小，可能是选取的叶片较老，实验中的失误，用滴定管滴定时，滴定的蒸馏水超过了1ml，造成了过氧化氢酶的浓度偏低，用紫外线吸收法测定时造成吸光度值偏低。-