2022年微生物思考题及参考答案.docx

精选学习资料 - - - - - - - - - 微生物摸索题及参考答案1. 用油镜观看时应留意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油 .起什么作用？答：应当先用擦镜纸将镜头擦洁净 , 以防上次试验的污染 . 操作时 , 先低倍再高倍 . 用完要擦掉油 . 加香柏油 , 作用是增加折光率 , 也就是增加了显微镜的辨论率 . 油的折光率和分辨率成反比 有公式 , 同时与波长成正比 . 2. 什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观看中有什么意义？答：在一般情形下,当物像在一种物镜中已清晰聚焦后,转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观看时,物像将保持基本准焦的状态,这种现象称为物镜的同焦；利用这种同焦现象, 可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时仅用细调剂器即可对物像清晰聚焦,或载玻片；从而防止由于使用粗调剂器时可能的误操作而损坏镜头3. 影响显微镜辨论率的因素有哪些？答：物镜的 NA值（物镜的数值孔径）与照明光源的波长 . 4. 美蓝染色液作用时间的不同 , 对酵母菌死细胞数量有何影响 , 试分析缘由答：会造成更多的死细胞,在显微镜下观看,活的是透亮无色,衰老的是淡蓝色,死亡的是蓝色,假如美蓝染色液作用时间过长,会造成细胞脱水死亡并渗透染液,影响试验结果；5. 镜检时如何区分放线菌基内菌丝,气生菌丝以及孢子丝一般气生菌丝颜色较深,直生或分枝丝状,比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮,可看到横隔膜,继而断裂成球状或杆状小体；6. 在进行细菌涂片时应留意哪些环节1、载玻片应当冷却后再涂片； 2 、假如是涂布液体,可以用毛细管或接种环滴一小滴,然后轻轻抹开,一圈足够； 3 、假如是涂布菌落或菌苔,应当在载玻片上先滴一滴水,再将菌落或菌苔涂布上去,接种环的尖蘸一点点即可； 4 、为了节约时间,可以将干燥和热固定合并成一步；但是应当防止高温,由于温度一高,细菌会变形； 5 、染色时间视染色液种类而定；如结晶紫只需几十秒,亚甲基蓝就需一到两分钟； 6 、冲洗时,水流不能太大,而且尽量防止水流直接冲在涂片上； 7 、冲洗后干燥,可以用酒精灯加热以节约时间,同样的,应当防止高温,由于温度一高,细菌会变形；7. 进行细菌制片时为什么要进行加热固定.在加热固定时应留意什么. 固定的目的有三个：1）杀死微生物,固定细胞结构；2）保证菌体能更牢的粘附在载玻片上,防止标本被水冲洗掉；3）转变染料对细胞的通透性,由于死的原生质比活的原生质易于染色；固定时应留意： 手持玻片, 菌膜朝上, 在微火过 3 次（手指触摸玻片反面, 不烫手为宜） ,固定时应尽可能维护细胞原有形状,防止细胞膨胀或收缩；名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,共 7 页精选学习资料 - - - - - - - - - 8. 为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观看1. 由于用油镜观看时, 镜头离玻片会很近. 假如未完全干燥, 载玻片上的液体会污染油镜镜头 . 镜头特别精密 , 被污染后不利于下次观看 之间折光率,造成视野不够清晰；.2 、如未完全干燥,水滴会影响油与玻璃9. 哪些环节会影响革兰色染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？答：涂片环节、加热固定环节、脱色环节；其中最关键的环节是脱色环节；10. 进行革兰氏染色时,为什么特殊强调菌龄不能太老,用老龄细菌染色会显现什么问 题. 答：菌龄太老,细胞壁通透性转变；着色不均,染色成效不好；阴性阳性不明显分不太 清晰 , 问题是：不便于显微镜下观看是阳性菌仍是阴性菌；11. 革兰氏染色中那一步是关键.为什么？你是如何操作的？革兰氏染色的关键步骤是：乙醇脱色（是脱色时间）；假如脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短, 革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌；脱色时间的长短仍受涂片的厚薄,脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响,难以严格规定 （脱色是应当掌握速度,脱色时间一般为 2030s）；12. 革兰氏染色中 , 哪个步骤可以省略 .在什么情形下采纳媒染目的是在全部的细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物；脱色后使革兰氏阴性菌变为无色；复染使革兰氏阴性菌染成红色；所以鉴别细菌的革兰氏阴阳性只须媒染,复染的目的是为了看清革兰氏阴性菌；13. 你主要依据哪些形状特点来区分四种不同的霉菌曲霉 : 具有分隔； 气生菌丝的一部分形成长而粗糙的分生孢子梗,顶端膨大成球状顶囊,表面辐射出一层或两层小梗,小梗上着生成串的球形分生孢子；上,并通过足细胞与养分菌丝相连；分生孢子梗生于足细胞根霉 : 菌丝无隔、多核、分枝状,有匍匐菌丝和假根；在假根的上方直立地生长出一至数根孢囊梗, 其顶端膨大成球形孢子囊；囊的基部有囊托, 中间有球形或半球形囊轴；毛霉 : 菌丝无隔、多核、分枝状,无假根或匍匐菌丝；菌丝体上直接生出单生、总状分 枝或假轴状分枝的孢囊梗；各分枝顶端着生球形孢子囊,无囊托；青霉 : 菌丝有横隔,分生孢子梗亦有横隔,光滑或粗糙；基部无足细胞,顶端不形成膨 大的顶囊,其分生孢子梗经过多次分枝,产生几轮对称或不对称的小梗,形如扫帚,称 为帚状体；孢子颜色：黑曲霉是黑色,青霉是青色,根霉是白菌丝黑孢子,毛霉就是淡黄色；以上 为试验室观看1）菌丝特点：青菌与曲霉菌丝与膈；毛霉与根霉就无；2）菌丝的特化结构： 曲霉有足细胞, 其它霉菌无； 根霉有假根与匍匐枝, 其它霉菌无；3）孢子头特点：青霉的孢子头为扫帚状；根霉与毛霉的孢子头为囊状；曲霉为菊花状 孢子头；名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 7 页精选学习资料 - - - - - - - - - 14. 为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时,必需用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正 . 目镜测微尺中每小格代表的实际长度是不固定的,它是随所使用目镜和物镜的放大率的不同而转变的, 故在测量前必需先用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正,以得出在 显微镜的特定放大倍率下,目镜测微尺每小格所代表的相对长度；15. 在不转变目镜和目镜测微尺,其测定结果是否相同？为什么？而改用不同放大倍数的物镜来测定同一细菌的大小时,答: 相同 ; 目镜测微尺是一块圆形玻片,其中心刻有精确等分的刻度,有把 毫米刻成为50 等分或把 10 毫米长度刻成 100 等分；测量时,将其放在接目镜中的隔板上来测量经显微 镜放大后的细胞物象；由于在不转变目镜和目镜测微尺,而改用不同放大倍数的物镜来测定 同一细菌的大小时,物象的放大倍数与每小格目镜测微尺所代表的长度在变化比例上是同步的,故而测定结果相同；16. 哪些因素会造成血细胞计数板的计数误差,应如何防止 . 操作时没有先盖盖玻片再滴加悬液,导致体积不精确；防止：先盖盖玻片再滴加悬液；细胞密度太高；防止：稀释溶液；溶液不匀称；防止：滴加溶液前混匀悬液；1、仪器误差：所用器材均应清洁洁净,并且计数板计数区不应当有擦痕；2、计数室内可能有气泡；由于酵母细胞并没有染色,看起来是透亮的,有气泡很简单被计入,使数值偏高；并且,气泡会影响菌悬液的随机分布；改进：如产愤怒泡,就用吸水纸吸出；3、菌体在计数板上分布不均,当用选取5 格计数时,会造成很大误差；改进：应使菌液自然流入并混匀,进行观看时尽可能多数几个格子；4、配制稀释液时吸取的浓度过高或过低,导致稀释液浓度和原液不成正确比例,运算 时产生误差；应将原液摇动匀称后取中部的液体进行稀释；5、由于数菌体数目时视觉疲惫而导致的视觉误差；应多人观看,取记录平均数；6、计数时可能将格四周的菌都运算在内了,使数值偏高；上不计下,计左不计右,不行以重复计数；改进：谨遵一个规章,计7、可能显现有出芽的酵母菌,将出芽的酵母菌按两个计数了,使数值偏高；改进：计数时,只有当芽体于母细胞一样大的时候,才能计为两个；17. 培育基配好后, 为什么必需立刻灭菌 倒置培育？.如何检查灭菌后的培育基是否无菌？为什么要答：由于配制培育基的各类养分物质和容器等含有各种微生物,因此,已配制好的培育 基必需立刻灭菌,假如来不及灭菌,应暂存冰箱内,以防止其中的微生物生长系列而消 耗养分和转变培育基的酸碱度所带来的不利影响；将灭菌的培育基放入37温箱中培育2448h,无菌生长即可证明灭菌后的培育基无菌；倒置培育的主要目的：1）由于重力的作用使培育基表面及次层能富集微生物生长所需的养分物质,利于微生物生长；2）防止空气中微生物的污染培育基及培育物：倒置时平板内的空气是不流淌的, 杂菌不会沉降到培育基表面, 假如不倒置 , 很快平板周边会长起杂菌； 3）倒置培育使琼脂里水分不易蒸发出去,而充分的保持琼脂的弹性与细菌容名师归纳总结 易繁衍和生存的环境；假如不倒置,大致3 天左右培育基就会显现龟裂等水分散失的情第 3 页,共 7 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 况；而一些落菌等试验,需验证培育基无菌,就要先倒置培育 落菌,水分散失是很重要的；19. 在配制培育基的操作过程中应留意些什么问题？为什么？答：一般而言,培育基的配置要留意如下几点原就：48 小时才可作为模板做1）养分成分的配比：碳源和氮源的比例（C/N）要适当；2）相宜的酸碱度（pH值）：配制培育基时 pH 的调剂；3）渗透压：养分物质要有适合的浓度；4）培育基不能反复高温灭菌；5 称不溶性固形物时,应单独称,如量少的可以与无机盐一起称,但肯定要混匀再分装；6）一般情形下培育基用自来水配制；操作细节上就要留意：1）称药品用的牛角匙不要混用,称完药品应准时盖紧瓶盖2）调 pH 值不要调过头, 以免回调而影响培育基内各离子的浓度3）分装时留意不要污染棉塞、试管口,以免染菌；4）准时灭菌,以免培育基及容器里的微生物生长繁衍消耗养分、转变酸碱度；1、当然是留意浓度配比不要搞错2、许多培育基的加料次序有讲究 , 否就会有沉淀产生3、有些培育基会有不溶物质 , 分装前应摇匀4、不要忘了调剂 pH值（一般细菌都需要 , 酵母可能自然 pH 就行 , 不过不肯定）5、加热溶解时尽量不要煮沸 , 会缺失养分物质20. 高压蒸气灭菌开头之前,为什么要将锅内冷空气排尽？灭菌完毕后,为什么待压力降低“0” 时才能打开排气阀,开盖取物；答： 1）在使用高压蒸汽灭菌时,灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要,由于空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压,所以,当水蒸气中含有空气时,在同一压力下,含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度；2）压力未降至“0” 便开盖取物的可能后果：压力锅内压力突然降低,引起容器中的溶液喷出容器口导致污染或导致人员的烫伤；21. 干热灭菌操作过程中应留意哪些问题为什么1、物品不要摆放太挤 , 以免阻碍空气流通2、灭菌物品不要接触干燥箱内壁的铁板 , 以防包装纸烤焦起火3、灭菌时人不能离开4、灭菌终止后不能遗忘关掉电源5、待温度降到 70 度以下再打开 , 否就冷热空气交替 , 玻璃器皿简单炸裂或发生烫伤事故22. 为什么干热灭菌比湿热灭菌所需温度高 时间长？在湿热条件下,有水蒸汽的作用：a 高温水蒸汽导热比干空气要快；b 高温水蒸汽冷凝变水时有放热过程；c 高温水蒸汽能穿透细菌的细胞膜,直接进入细胞内破坏细胞；d 高温水蒸汽能水解一部分细胞结构,加速导热；名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 7 页精选学习资料 - - - - - - - - - （湿热中细菌菌体吸取水分,蛋白质较易凝固,因蛋白质含水量增加,所需凝固温度降低；湿热的穿透力比干热大；湿热的蒸汽有潜热存在,每1 克水在 100时,由气态变为液态时可放出 226kJ（千焦）的热量；这种潜热,能快速提高被灭菌物体的温度,从而增加灭菌效力；）23. 设计试验方案,比较干热灭菌和湿热灭菌的成效；无菌操作条件和等量原就；（一）试验材料以下试验方案有关操作均遵循试管 镊子 酒精灯 嗜热脂肪芽孢杆菌 ATCC 7053 菌片 纸片（与菌片同大小 同材料）溴甲酚紫蛋白冻水培育基（已灭菌）等试验材料（材料有余）；（二）对比组取 9 支洁净试管, 分为 A1 B1 C1 三组（每 3 支一组）,将 A1 组中放入菌片, B1 组中放入纸片, C1 组中什么也不加；不经灭菌,直接加入溴甲酚紫蛋白冻水培育基（等量）；（三）恒为培育56恒温条件下培育48 小时；将上述全部试管按分组在24. 如何确定平板上某单个菌落是否为纯培育请写出试验的主要步骤纯培育的确定除观看其菌落特点外,仍要结合显微镜检测个体形状特点后才能确定,有些微生物的纯培育要经过一系列分别与纯化过程和多种特点鉴定才能得到；25. 配制牛肉膏蛋白胨培育基,有哪些操作步骤？那几步易出错,如何防止？称取药品加热溶化分装加棉塞包扎灭菌搁置斜面易出错的步骤有：a 称取药品 称取时钥匙专用,瓶盖不要错盖,易吸水的药品要快速称取；b 加热溶化 加入药品后要用玻璃棒不停搅拌,以免糊底（在琼脂熔化过程中,应控制火力,以免培育基因沸腾而溢出容器,同时,需不断搅拌, 以防琼脂糊底烧焦； ）；c 分装分装时培育基不能粘在三角瓶（或试管）口,以免接种时染菌；d 搁置斜面斜面长度约试管长度一半为宜；26. 平板菌落计数法的原理是什么 . 它适用于那些微生物的计数？平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后,其中的微生物充分分散为单个细胞,取一定量的稀释液接种到平板上,经过培育,由每个单细胞生长繁衍而形成的肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞；统计菌落数,依据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数；（但是,由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞,所以,长成的一个单菌落也可能来自样品中的 23 或更多个细胞；因此平板菌落计数的结果往往偏低；现在常使用菌落形成单位）；平板计数法是依据微生物在固体培育基上所形成的一个菌落是由一个微生物繁衍而形成的现象进行的,也就是一个菌落可代表一种微生物（并不肯定 中所含细菌、孢子、酵母菌等单细胞微生物的数量； ；通常用来测定样品8、微量移液器的最小量程太大,在加样时,简单加多,使盖玻片鼓起,血球计数板所技术的体积变大,最终结果偏大；改进：用量程的小的微量移液器并少加一些；名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 7 页精选学习资料 - - - - - - - - - 27. 假如一项科学讨论内容需从自然界中挑选到能产生高温蛋白酶的菌株,你将如何完 成？写出试验方案（产蛋白酶菌株在酪素平板上能形成降解酪素透亮圈）；以下试验方案有关操作均遵循无菌操作条件 一 材料预备 1 土壤【有机质（特殊是蛋白质）含量丰富的土壤】2 灭菌生理盐水（0.85%NaCl）3 灭菌移液管 4 添加酪素的 B 4（牛肉膏蛋白胨完全培育基）经灭菌 5 B4 斜面（经灭菌）6 其他材料：接种环 酒精灯等二 操作方法1 在盛有 10ml 灭菌生理盐水的烧杯中添加1g 土壤,配成悬浮液；2 稍静止后,用灭菌移液管移取部分上清液,将其制成 104106 倍的稀释液；3 用灭菌移液管吸取各稀释液用稀释倒平板法（或涂布平板法）将其接入添加酪素的 B4 平板上；4 在 5565下培育 12 天；5 挑取形成降解酪素透亮圈的菌落（透亮圈直径D与菌落直径d 之比较大者）,转接入B4 斜面上培育；（如无特定菌落形成,就需另取土样从开头重复试验）6 将 B4 斜面上的菌落再用平板纯培育,依次重复 23 次后即可得到纯培育 （镜检）；7 纯培育细菌中蛋白酶的提取及活性鉴定【摇瓶培育（如提取蛋白酶及其活性正常,就 纯培育胜利,否就,重取土样重复以上试验）】；28. 为什么熔化后的培育基要冷却至 45左右才能倒平板？低于这个温度琼脂会凝固,温度过高,假如是做倾倒琼脂做菌落计数,会杀死一部分细 菌,假如只是只是制备琼脂平板,那么温度太高就进行倾倒会导致琼脂凝固后偏软,水 汽过多；29. 要使平板菌落计数精确,需要把握哪几个关键？为什么？1 无菌操作 2 稀释良好,不会太浓或太稀；便区分,也不至于太小影响计数； 3 菌落生长时间掌握好,不会长的太大不30. 当你的平板上长出的菌落不是匀称分散的而是集中在一起时,你认为问题出在哪 里？1. 太浓 2. 没涂匀31. 用倾注法和涂布法计数,其平板上长出的菌落有何不同？为什么要培育较长时间（48h）后观看结果？倾注法是在培育皿中接种好样品之后,并使用 L 型棒涂布；倾注琼脂并培育； 而涂布法就是在琼脂表面接种因此,倾注法的菌落将显现在琼脂的各个部位,包括底层和中层,但涂布法培育后形成 的菌落只显现在琼脂表面；32. 你如何说明淀粉酶是胞外酶而非胞内酶？答：淀粉是大分子物质,进入细胞特别困难,甚至需要高耗能的胞吞作用；因而通过 胞外酶的作用,将淀粉水解为葡萄糖后运入细胞,较便利高效；名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页,共 7 页精选学习资料 - - - - - - - - - 试验中显现透亮圈,说明培育基内淀粉被水解,可估计是细菌产生的胞外的淀粉酶起的作用；33. 不利用碘液,你能否证明淀粉水解的存在 . 答：由于淀粉水解生成葡萄糖,即多羟基醛,因此可利用醛的性质进行检验,如银镜试 验,斐林试验等；呈阳性者,说明产生了葡萄糖,淀粉被水解；阴性者说明淀粉未被水 解；34. 假如某些微生物可以有氧代谢葡萄糖,发酵试验应当显现什么结果？答微生物有氧代谢葡萄糖产气不产酸,因此发酵结果是小管中愤怒泡但是溶液不变 黄；35. 说明在细菌培育中吲哚检测的化学原理,为什么在这个试验中用吲哚的存在作为色 氨酸酶活性的指示剂,而不用丙酮酸？答：化学原理：有些细菌产生色氨酸酶,分解蛋白胨中的色氨酸,产生吲哚和丙酮酸；吲哚与对二甲基氨基甲醛结合,形成红色的玫瑰吲哚；但并非全部的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的才能,因此吲哚试验可以作为一个生物化学检测的指标；由于丙酮酸是生物体呼吸作用的产物,无论是有氧仍是无氧,都会产生丙酮酸,因而无 法作为色氨酸酶活性的指示剂进行区分；同时吲哚能通过有明显颜色变化的化学反应观测到,而丙酮酸不能,所以试验中用吲哚 的存在作为色氨酸酶活性的指示剂,而不用丙酮酸；36. 为什么大肠杆菌是甲基红反应阳性,而产气杆菌为阴性？答：当细菌代谢糖产生酸时,培育基就会变酸,使加入培育基中的甲基红指示剂由橙黄 色（ PH6.3）转变为红色（ PH4.2）,即甲基红反应；而大肠杆菌和产气肠杆菌在培育的早期均产生有机酸,但大肠杆菌在培育的后期仍能维护酸性PH4,而产气肠杆菌就转化有机酸为非酸性末端产物,如乙醇、丙酮酸等,使 PH升至大约 6；因此,大肠杆菌为阳性,产气肠杆菌为阴性；37. 用紫外线进行诱变时, 为什么要打开皿盖.为什么要在红光灯下操作紫外线不简单穿透玻璃,所以打开盖,自然光下简单光复活,红光下不会所以在红光下操作名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页,共 7 页