2022年微生物的实验室培养.2.docx

精选学习资料 - - - - - - - - - 学习必备 欢迎下载一般高中课程标准试验教科书生物选修 1 人教版 课题 1 微生物的试验室培育课题目标（一）学问与技能 明白有关培育基的基础学问；把握培育基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术（二）过程与方法 分析试验思路的确定和形成的缘由,分析试验流程,对比前面的试验设计,归纳共性,分析差异,增加印象（三）情感、态度与价值观形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神课题重点 无菌技术的操作课题难点 无菌技术的操作教学方法 启示式教学教学工具 多媒体课件教学过程（一）引入新课 在传统发酵技术的应用中,都利用了微生物的发酵作用,其中的微生物来自于制作过程中的自然感染；而在工业 化生产中,为了提高发酵的质量,需要获得优良菌种,并保持发酵菌种的纯度；这就要涉及到微生物的培育、分别、鉴别等基本技术；现在我们开头学习微生物的培育和应用专题；（二）进行新课 1基础学问1 1 培育基的种类包括固体 培育基和液体培育基等；凝固剂；摸索 1琼脂是从红藻中提取的多糖 ,在配制培育基中用作为【补充】培育基的类型及其应用：标准培育基类型配制特点主要应用第 1 页,共 9 页物理性质固体培育基加入琼脂较多菌种分别 ,鉴定 ,计数半固体培育基加入琼脂较少菌种储存化学组成液体培育基不加入琼脂工业生产,连续培育合成培育基由已知成安排制而成,培育基成分明确菌种分类、鉴定自然培育基由自然成安排制而成,培育基成分不明确工业生,产降低成本目的用途鉴别培育基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别挑选培育基添加（或缺少）某种化学成分菌种的分别名师归纳总结 - - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 1 2 培育基的化学成分包括水 、 无机盐学习必备欢迎下载四类养分成分；、 碳源、 氮源摸索 2从细胞的化学元素组成来看,培育基中为什么都含有这些养分成分？C、H、O、N、P、S 是构成细胞原生质的基本元素,约占原生质总量的 97以上；【补充】碳源：如 CO2、糖类、脂肪酸等有机物,构成微生物的结构物质和分泌物,并供应能量；氮源：如 N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等,主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等；含有 C、H、O、N 的化合物既可以作为碳源,又可以作为氮源,如氨基酸等；1 3 培育基除满意微生物生长的pH 、 特别养分物质和 氧气 等要求；【补充】生长因子：某些微生物正常生长代谢过程中必需从培育基中吸取的微量有机小分子,如某些氨基酸、碱 基、维生素等；摸索 3牛肉膏和蛋白胨主要为微生物供应糖 、 维生素和 有机氮等养分物质；,培育细菌时需要将pH摸索 4培育乳酸杆菌时需要添加维生素,培育霉菌时需要将培育基pH 调剂为酸性调剂为中性或微碱性；活动 2：阅读“ 无菌技术” ,争论回答以下问题：1 4 获得纯洁培育物的关键是防止外来杂菌的入侵；1 5 无菌技术包括：（1）对试验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；旁进行；（2）将培育器皿、接种用具和培育基等器具进行灭菌 ；（3）为防止四周微生物污染,试验操作应在酒精灯火焰邻近（4）防止已灭菌处理的材料用具与四周物品相接触；1 6 比较消毒和灭菌（填表）比较项理化因素的作用强度毁灭微生物的数量芽孢和孢子能否被毁灭；消毒较为温顺部分生活状态的微生物不能灭菌摸索 5无菌技术除了防止培育物被污染外,仍具有的目的是防止感染试验操作者1 7 消毒方法：（1）日常生活常常用到的是煮沸消毒法；消毒法（作简要介绍）；紫外线进行（2）对一些不耐高温的液体,就使用巴氏（3）对接种室、接种箱或超净工作台第一喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒成效,然后使用物理消毒；名师归纳总结 （4）试验操作者的双手使用酒精进行消毒；第 2 页,共 9 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - （5）饮水水源用氯气 进行消毒；学习必备欢迎下载1 8 灭菌方法：（1）接种环、接种针、试管口等使用 灼烧 灭菌法；（2）玻璃器皿、金属用具等使用 干热 灭菌法,所用器械是 干热灭菌箱；（3）培育基、无菌水等使用 高压蒸汽 灭菌法,所用器械是 高压蒸汽灭菌锅；（4）表面灭菌和空气灭菌等使用 紫外线 灭菌法,所用器械是 紫外灯；摸索 6对接种环灭菌时要用酒精灯的 充分燃烧 层火焰灼烧可能伸入试管或培育皿的部位；摸索 7利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤,目的是防止阻碍热空气流通；摸索 8物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后,要第一打开排气阀,煮沸并排除锅内冷空气,其目的是 有利于锅内温度上升；随后关闭排气阀连续加热,气压升至 100k Pa,温度为 121 ,并维护 1530 min ；最终切断热源,使温度自然降温,气压务必降至 零 时打开锅盖,其目的是防止 容器中的液体暴沸；【补充】培育基的配制原就：目的要明确：依据培育的微生物种类、培育的目的等确定培育基的类型和配制量；养分要和谐：培育基中各种养分物质的浓度和比例要相宜；例如：碳氮比产生谷氨酸少；碳氮比为 31 时,菌体繁衍受抑制而谷氨酸合成量大增；pH 要相宜：细菌培育基 pH 中性或偏碱性,霉菌培育基呈酸性；2试验操作2 1 运算：依据配方比例,运算 100mL 培育基各成分用量；4 1 时,谷氨酸棒状杆菌大量繁衍而2 2 称量：精确称取各成分；称取牛肉膏和蛋白胨时动作要快速,目的是防止牛肉膏吸取空气中水分；2 3 溶化：加水加热熔化牛肉膏；加入蛋白胨和氯化钠连续加热；加入琼脂；用蒸馏水定容到 100mL ；整个过程不断用玻棒搅拌,目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂；2 4 调 pH：用 1mol/LNaOH 溶液调剂 pH 至偏碱性；2 5 灭菌：将配制好的培育基转移到锥形瓶中,加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌；所用培育皿用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌；2 6 倒平板：待培育基冷却至 50左右时在酒精灯火焰邻近操作进行；其过程是：在火焰旁右手拿锥形瓶,左手拔出棉塞；右手拿锥形瓶,使锥形瓶的瓶口快速通过火焰；左手将培育皿打开一条缝隙,右手将培育基倒入培育皿,马上盖上皿盖；名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页,共 9 页精选学习资料 - - - - - - - - - 学习必备 欢迎下载待平板冷却凝固后,将平板倒过来放置；摸索 1锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是毁灭瓶口的杂菌,防止杂菌感染培育基；摸索 2倒平板的目的是防止培育基冷却过程中形成的水滴落到培育基表面；摸索 3如皿盖和皿底之间粘有培育基,就该平板能否培育微生物？为什么？不能；空气中杂菌会在这些粘附培育基上繁衍,并污染皿内培育基；摸索 4配制斜面培育基中,试管要加塞棉塞的目的是保持通气并防止杂菌感染；摸索 5试管培育基形成斜面的作用是增大接种面积；2 7 接种 2 71 微生物接种的最常用方法是平板划线法和稀释涂布法,另外仍有穿刺接种和斜面接种等；272 平板划线法：通过接种环在琼脂固体培育基表面连续划线的操作,将集合的菌种逐步稀释分散到培育基表 面；其操作步骤是：将接种环在酒精灯火焰上灼烧直至烧红；在酒精灯火焰旁冷却接种环,并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞；将菌种试管口通过火焰达到毁灭试管口杂菌的目的；将冷却的接种环伸入到菌液中取出一环菌种；将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞；将皿盖打开一条缝隙,把接种环伸入平板内划35 条平行线,盖上皿盖,不要划破培育基；灼烧接种环,冷却后从第一区划线末端开头向其次区域内划线；重复上述过程,完成三、四、五区域内划线；留意不要将第五区的划线与第一区划线相连；将平板倒置放在培育箱中培育；摸索 6取菌种前灼烧接种环的目的是毁灭接种环上的微生物；除第一次划线外, 其余划线前都要灼烧接种环的目的是毁灭接种环上残留菌种；取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行,其目的是防止高温杀死菌种；最终灼烧接 种环的目的是防止细菌污染环境和操作者；摸索 7在第 1 次划线后都从上次划线末端开头的目的是获得由单个细菌形成的标准菌落；2 73 稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释,并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培育基上进行 培育；当稀释倍数足够高时,即可获得单个细菌形成的标准菌落；名师归纳总结 2 74系列稀释操作：6 支,编号 101、102、103、104、 105、106；第 4 页,共 9 页取盛有9mL 水的无菌试管用灼烧冷却的移液管吸取1mL 菌液注入编号为101 试管中,并吹打3 次,使之混匀；- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 学习必备 欢迎下载从 101 倍液中吸取 1mL 菌液注入到编号为 102 试管内吹打匀称,获得 102 倍液；依此类推；摸索 8操作中试管口和移液管应在离火焰 12cm 处；整个操作过程中使用了 1 支移液管；3结果分析与评判3 1 培育未接种培育基的作用是对比,如有菌落形成,说明培育基灭菌不完全；3 2 在肉汤培育基上,大肠杆菌菌落呈白色,为圆形,光滑有光泽,边缘整齐；3 3 培育 12h 和 24h 后的菌落大小不同（相同、不同）；菌落分布位置相同（相同、不同）；缘由是时间越长,菌落中细菌繁衍越多,菌落体积越大；菌落的位置不动,但菌落数增多；摸索 9在某培育基上显现了 3 种特点不同的菌落,缘由有培育基灭菌不完全或杂菌感染等；摸索 10频繁使用的菌种利用暂时保藏法储存,长期储存菌种的方法是甘油管藏法；前者利用固体斜面培育基培育后,储存在 4冰箱中,每 36 个月转种培育一次,缺点是储存时间较短,简洁发生污染和变异；后者将菌种与无菌体积等量混合后储存在20冷冻箱中；（三）课堂总结、点评微培育基配制培育基的原就运算称量溶化生无菌技术物培育基的配制的实纯化大肠杆菌配制培育基的方法调 pH分装加棉塞验灭菌倒平板平板划线法室培养稀释涂布法系列稀释平板涂布（四）实例探究例 1关微生物养分物质的表达中,正确选项A. 是碳源的物质不行能同时是氮源 B.凡碳源都供应能量C.除水以外的无机物只供应无机盐 D.无机氮源也能供应能量解析：不同的微生物,所需养分物质有较大差别,要针对微生物的详细情形分析；对于 A、B 选项,它的表达是不完整的；有的碳源只能是碳源,如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源,如NH 4HCO 3；有的碳源同时是能源,如葡萄糖；有的碳源同时是氮源,也是能源,如蛋白胨；对于 C 选项,除水以外的无机物种类繁多,功能也多样；如二氧化碳,可作为自养型微生物的碳源；NaHC O 3,可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而 NaCl 就只能供应无机盐；对于D 选项,无机氮源供应能量的情形仍是存在的,如 答案： D NH 3可为硝化细菌供应能量和氮源；例 2下面对发酵工程中灭菌的懂得不正确选项A. 防止杂菌污染 B.毁灭杂菌C.培育基和发酵设备都必需灭菌 D.灭菌必需在接种前解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节；A 说的是灭菌的目的,由于发酵所用的菌种大多是单一的纯种,名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 9 页精选学习资料 - - - - - - - - - 学习必备 欢迎下载整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌）,所以是正确的；B 是错误的,由于灭菌的目的是防止杂菌污染,但实际操作中不行能只毁灭杂菌,而是毁灭全部微生物；C 是正确的,由于与发酵有关的全部设备和物质都要灭菌；发酵所 用的微生物是灭菌后特地接种的,灭菌必需在接种前,假如接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死；答案： B 综合应用 例 3右表是某微生物培育基成分,请据此回答：是（1）右表培育基可培育的微生物类型量确定的原就编号成分含量是；粉状硫10g （2）如不慎将过量NaCl 加入培育基中；（NH 4）0.4g 如不想铺张此培育基,可再加入,2SO4用于培育；K 2HPO44.0g （3）如除去成分,加入（CH 2O）,该培养基可用于培育；MgSO 49.25g （4）表中养分成分共有类；FeSO40.5g （5）不论何种培育基,在各种成分都溶化后分装前,要进行的是；CaCl20.5g （6）右表中各成分重H 2O 100ml ；（7）如右表培育基用于菌种鉴定,应当增加的成分是解析：对于一个培育基,它能培育何种微生物,要看它的化学成分；当然这只适用于合成培育基,假如是一个天 然培育基就不能从培育基的成分上区分它是培育何种微生物的；分析化学成分要从养分物质的类型动身；右表中的营 养物质有水、无机盐、氮源三类,缺乏碳源和特别养分物质；对特别养分物质,有的微生物是不需要的,但没有微生 物是不需要碳源的；该培育基中没有碳源,说明培育的微生物是从空气中获得碳源的,即可培育的微生物就是自养型 微生物了；该培育基中加入了过量食盐,就可以成为金黄色葡萄球菌鉴别培育基,但金黄色葡萄球菌是异养型微生物,这个培育基就仍需要加入有机碳源；该培育基如加入（CH 2O）,培育基中就有了碳源,但除去成分,却使培育基中没有了氮源,这时就只能用于培育固氮微生物了；对于菌种鉴定,往往用的是固体培育基,而表中没有凝固剂,需要 加入常见的凝固剂琼脂；pH 答案： 自养型微生物含碳有机物金黄色葡萄球菌固氮微生物3 调整依微生物的生长需要确定琼脂（或凝固剂）（五）巩固练习 1不行能作为异养微生物碳源的是A牛肉膏 B含碳有机物 C石油 D含碳无机物2根瘤菌能利用的养分物质的组别是 A NH3,（ CH2O）, NaCl BN2,（ CH2O）, CaCl2 C铵盐, CO 2, NaCl DNO2,CO2,CaCl2 3配制培育基的表达中正确选项名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页,共 9 页精选学习资料 - - - - - - - - - A制作固体培育基必需加入琼脂 D B学习必备欢迎下载加入青霉素可得到放线菌C培育自生固氮菌不需氮源发酵工程一般用半固体培育基4自养型微生物与异养型微生物的培育基的主要差别是A碳源 B氮源 C无机盐 D特别养分物质5下表是有关 4 种生物的能源、碳源、氮源和代谢类型的概述；其中正确选项 生 物 硝化细菌 根瘤菌 酵母菌 谷氨酸棒状杆菌能 源 氧化 NH3 N2 的固定 分解糖类等有机物 光 能碳 源 C02 糖类 糖类 糖类氮 源 NH3 N2 NH4 +、NO3 尿 素-代谢类型 自养需氧型 异养需氧型 异养兼性厌氧型 自养需氧型 A 根瘤菌、谷氨酸棒状杆菌 B硝化细菌、酵母菌 C 酵母菌、谷氨酸棒状杆菌 D硝化细菌、根瘤菌6甲、乙、丙是三种微生物,下表、是用来培育微生物的三种培育基；甲、乙、丙都能在种正常生长繁衍；甲能在中正常生长繁衍,而乙和丙都不能；乙能在中正常生长繁衍,甲、丙都不能；以下说法正确选项（）粉状硫K2HPO4FeSO蔗糖（NH4）2SO4H2O g MgSOCaCl210g 4g 0.5g 10g 0.4g 1009.250.5g ml + + + - + + + + + + + - + + + + + + + + + + + + A、甲、乙、丙都是异养微生物B、甲、乙、丙都是自养微生物、丙是异养微生物C、甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物D、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物7微生物（除病毒外）需要从外界吸取养分物质并通过代谢来维护正常的生长和繁衍；以下有关微生物养分的说法正确选项A乳酸菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的B微生物生长中不行缺少的一些微量的无机物称为生长因子C培育基中的养分物质浓度越高对微生物的增殖越有利名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页,共 9 页精选学习资料 - - - - - - - - - 学习必备 欢迎下载D生长因子一般是酶或核酸的组成成分,微生物本身合成这些生长因子的才能往往不足；8某一种细菌株要从环境中提取现成的亮氨酸（20 种氨基酸中的一种）才能生长,此菌株对链霉素敏锐；试验者用诱变剂处理此菌株,想挑选出表中细菌菌株类型；依据试验年目的,选用的培育基类型是（）注：亮氨酸 链霉素“ ” 加入“ ” 不加入如：不加亮氨酸 ：加入链霉素选 挑选出不需要亮氨酸的菌株 挑选出抗链霉素的菌株 挑选出不需要亮氨项 酸的抗链霉素的菌株 9要将从土壤中提取的自生固氮菌与其他的细菌分别出来,应将它们接种在A加入氮源和杀菌剂的培育基上 B D不加入氮源和不加杀菌剂的培育基上C加入氮源,不加杀菌剂的培育基上不含氮源和杀菌剂的培育基上10酵母菌培育液中常含有肯定浓度的葡萄糖,但当葡萄糖浓度过高时,反而抑制微生物的生长,缘由是A碳源供应太充分 B细胞会发生质壁分别C转变了酵母菌的pH值 D葡萄糖不是酵母菌的原料答案： DACAC CDBBB 课余作业、收集生活中与微生物有关的实例,并通过所学学问对其进行说明、我们打针输液时,第一要用酒精擦拭针刺处,为什么？教学体会本节课可以通过生产实例导入,使同学熟悉在微生物的培育过程中,保持培育物纯洁的重要性；在课堂上可以跳出教材,充分发挥同学的主动性,让同学收集列举更多的生产生活中的实例,从中体会培育物纯洁的重要性；当时由于微生物的微观性和危害性,肯定要训练同学培育良好的卫生习惯；资料袋微生物的特点1.个体微小,结构简洁在形状上,个体微小,肉眼看不见,需用显微镜观看,细胞大小以微米和纳米计量；名师归纳总结 - - - - - - -第 8 页,共 9 页精选学习资料 - - - - - - - - - 学习必备 欢迎下载2.繁衍快 生长繁衍快,在试验室培育条件下细菌几特别钟至几小时可以繁衍一代；3.代谢类型多,活性强；4.分布广泛 有高等生物的地方均有微生物生活,动植物不能生活的极端环境也有微生物存在；5.数量多 在局部环境中数量众多,如每克土壤含微生物几千万至几亿个；6.易变异 相对于高等生物而言,较简洁发生变异；在全部生物类群中,已知微生物种类的数量仅次于被子植物和昆虫；微 生物种内的遗传多样性特别丰富；所以微生物是很好的争论对象,具有广泛的用途；名师归纳总结 - - - - - - -第 9 页,共 9 页