第六章-人工染色体ppt课件.ppt

第六章第六章 人工染色体人工染色体v酵母人工染色体载体（酵母人工染色体载体（yeast artificial chromosome, YAC，1000kb）v细菌人工染色体（细菌人工染色体（bacterial artificial chromosome, BAC，300kb ）v哺乳类人工染色体（哺乳类人工染色体（MAC）vP1衍生人工染色体衍生人工染色体现正在研究的人工染色体现正在研究的人工染色体总结 TRP 1：色氨酸生物合成基因缺陷型：色氨酸生物合成基因缺陷型URA 3：尿嘧啶生物合成基因缺陷型：尿嘧啶生物合成基因缺陷型LEU 2：亮氨酸合成基因缺陷型：亮氨酸合成基因缺陷型v1、YAC作为可提供大片段作为可提供大片段DNA的方法，简的方法，简化了构建染色体延伸区域图谱和分离完整基化了构建染色体延伸区域图谱和分离完整基因的过程（因的过程（200500kb，甚至甚至1000kb）v2、用酵母为宿主重新构建大的人类基因区段，、用酵母为宿主重新构建大的人类基因区段，可将小的重叠的可将小的重叠的YAC变成一个大的变成一个大的YACv3、酵母作为一种真核生物，为其它真核的、酵母作为一种真核生物，为其它真核的DNA提供了更合适的环境提供了更合适的环境返回二、二、BAC载体的结构载体的结构v1992年年Shizuya利用利用F因子的复制起点和氯因子的复制起点和氯霉素抗性标记基因，在霉素抗性标记基因，在F质粒（质粒（pMBO131）基础上构建了第一代基础上构建了第一代BAC人工染色体。能人工染色体。能够克隆和保持大于够克隆和保持大于100kb的的DNA。新一代新一代BAC载体为载体为7.4kb的环状质粒：的环状质粒： F因子的因子的parA，parB，parC基因以保证低拷贝基因以保证低拷贝的的BAC质粒在大肠杆菌分质粒在大肠杆菌分裂时均匀分配到子代细胞裂时均匀分配到子代细胞 oriS基因：来源于大肠基因：来源于大肠杆菌杆菌 F 因子（致育因子）因子（致育因子）的严谨型控制的复制子的严谨型控制的复制子返回vP1噬菌体与噬菌体与噬菌体一样，外有蛋白质壳。内含噬菌体一样，外有蛋白质壳。内含相当大的（相当大的（110115kb）线性）线性DNA，并在体外，并在体外包装于包装于P1壳内。壳内。P1进入宿主细胞后环化，扩增。进入宿主细胞后环化，扩增。v1994年，有人将年，有人将P1和和F因子克隆结合产生因子克隆结合产生P1人人工染色体克隆系统工染色体克隆系统-PAC。返回练习题练习题v已知基因已知基因a的表达产物是一种酶的表达产物是一种酶A，已知这种酶，已知这种酶A具有几个保守位点，请考虑如何从基因组中具有几个保守位点，请考虑如何从基因组中扩增基因扩增基因a，并实现体外高效表达？需要使用，并实现体外高效表达？需要使用的质粒载体有哪些？酶切位点如何选择？的质粒载体有哪些？酶切位点如何选择？保守区2保守区1保守区3酶A