实验八维生素B1片含量测定的方法验证ppt课件.ppt

药药物分析物分析实验实验实验八实验八 维生素维生素B B1 1片含量测定的方法验证片含量测定的方法验证设计性实验设计性实验实验原理实验原理维生素维生素B B1 1又称盐酸硫胺又称盐酸硫胺 （thiamine hydrochloridethiamine hydrochloride），），化学名称为氯化化学名称为氯化4- 4-甲基甲基-3(2-3(2-甲基甲基- 4- 4-氨基氨基-5-5-嘧啶基嘧啶基)- )-甲基甲基-5-(2-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐羟基乙基噻唑鎓盐酸盐NNH2CN+CH2CH2OHCH3NH2H3CCl-HCl性性 质质溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶硫色素反应：硫色素反应：紫外吸收特性：紫外吸收特性：A Amaxmax=246nm=246nm与生物碱沉淀试剂反应与生物碱沉淀试剂反应氯化物特性：氯化物特性：原理原理特征性鉴别特征性鉴别硫色素反应硫色素反应维生素维生素B B1 1在在碱液碱液中可被铁氰化钾氧化生成硫色素，中可被铁氰化钾氧化生成硫色素，色素转溶于色素转溶于正丁醇正丁醇( (或异丁醇、异戊醇或异丁醇、异戊醇) )中，显现中，显现于酸中消失的于酸中消失的蓝色荧光蓝色荧光。（见刘文英主编。（见刘文英主编药物药物分析分析第六版，第六版，P P258258）含量测定含量测定维生素维生素B B1 1有紫外吸收，有紫外吸收，A Amaxmax=246nm=246nm，1%1421cmE1. 1.鉴别鉴别反反应应取本品约取本品约5mg5mg，加氢氧化钠试液，加氢氧化钠试液2.5ml2.5ml使其溶解，使其溶解，加铁氰化钾试液加铁氰化钾试液0.5ml0.5ml与正丁醇与正丁醇5ml5ml，强力振摇，强力振摇2min2min，放置使成两液层，上层醇液即显强烈的，放置使成两液层，上层醇液即显强烈的蓝色荧光，蓝色荧光，加酸使成酸性荧光即消失加酸使成酸性荧光即消失，再加碱，再加碱使成碱性，则荧光复现。使成碱性，则荧光复现。2. 2.含量测定含量测定精密称取片粉适量，相当于相当于维生素维生素B B1 125mg25mg，置100ml量瓶中 加盐酸溶液（91000）约70ml，摇匀15分钟使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 干燥滤纸过滤精密量取续滤液精密量取续滤液5.0ml5.0ml，置，置100ml100ml量瓶中，共量瓶中，共2 2份，份，盐酸溶液（91000）定容至刻度，摇匀 测 A A246246， 用吸光系数计算浓度。如何如何计计算出所需要的量？算出所需要的量？稀稀释释倍倍数数？实验内容与要求实验内容与要求鉴别试验鉴别试验吸收波长选择吸收波长选择精密度试验：用同一份样品溶液测定精密度试验：用同一份样品溶液测定6 6次，计算次，计算RSD%RSD%重复性试验：引用其他组同学数据（称样量，吸光重复性试验：引用其他组同学数据（称样量，吸光度）计算标示量度）计算标示量%，计算，计算RSD%RSD%稳定性试验：考察样品溶液稳定性试验：考察样品溶液30min30min内的稳定性，计算内的稳定性，计算RSD%RSD%加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计加加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计加样回收率试验样回收率试验含量测定：根据测定结果计算含量，标示量含量测定：根据测定结果计算含量，标示量%。 线线性性关关系和范系和范围围分析方法的分析方法的验证验证1 精密度精密度试验试验2 重重现现性性试验试验3 加加样样回收回收试验试验4 稳稳定性定性试验试验5目的目的范围：达到一定精密度、准确度和线性、测定方法适范围：达到一定精密度、准确度和线性、测定方法适用的高低限浓度或量的区间用的高低限浓度或量的区间线性：测试结果与试样中被测物的浓度或量直接呈正线性：测试结果与试样中被测物的浓度或量直接呈正比关系的程度比关系的程度要求要求至少至少5 5份份系列浓度的系列浓度的对照品溶液对照品溶液，高、低浓度之间要，高、低浓度之间要有明显差距，最好能有一定的比例关系。有明显差距，最好能有一定的比例关系。线性相关系数符合规定，如线性相关系数符合规定，如UV-VisUV-Vis法，法，r 0.99r 0.99；HPLCHPLC法，法，r 0.999r 0.999列出回归方程、相关系数和线性图列出回归方程、相关系数和线性图线线性性关关系考察系考察(示例）示例）精密度试验精密度试验目的目的检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可信程度信程度要求要求用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶液，同浓度至少平行操作液，同浓度至少平行操作6 6份，份，浓度与信号值要浓度与信号值要在线性范围内在线性范围内RSD 2.0% RSD 2.0% 仪器分析仪器分析精密度精密度试验试验（示例（示例 ）实验实验序序号号信信号值号值平均平均值值RSDRSD1 10.5120.5120.5100.5100.2% 0.2% (2.0%)(2.0%)2 20.5080.5083 30.5110.5114 40.5090.5095 50.5100.5106 60.5090.509重现性试验重现性试验目的目的考察样品溶液制备方法的可靠程度考察样品溶液制备方法的可靠程度要求要求同批样品按相同方法制备样品溶液，至同批样品按相同方法制备样品溶液，至少少6 6份份, ,浓度与信号值均要在线性范围内浓度与信号值均要在线性范围内RSD 2.0%RSD 2.0% 仪器分析仪器分析重重现现性性试验试验(示例示例)试验试验序号序号称样量称样量（g g）测定值测定值（mgmg）含量含量（mg/gmg/g）平均含量平均含量（ mg/g mg/g ）RSDRSD（%）1 10.16660.166622.0422.04132.29132.29134.53134.530.3%0.3%2.0%2.0%2 20.16670.166724.8224.82148.89148.893 30.16690.166921.9021.90131.22131.224 40.17420.174223.5423.54135.13135.135 50.16670.166720.8620.86125.13125.136 6稳定性试验稳定性试验目的：目的：考察考察制备后多少时间内稳定制备后多少时间内稳定要求要求要有一定的时间间隔，如：在要有一定的时间间隔，如：在0 0、1515、3030、4545、60min60min时间点分别测定样品的时间点分别测定样品的A A246246；在；在0 0、1 1、2 2、4 4、8 8、12h12h分别测定样品的峰面积。分别测定样品的峰面积。则说明样品溶液在多少时间内稳定；则说明样品溶液在多少时间内稳定；则需要重新选取时间点进行计算，直到则需要重新选取时间点进行计算，直到RSD 2.0%RSD 2.0%，否则要尽快测定，否则要尽快测定 同批、同法同批、同法序序号号时间时间(min)(min)信信号值号值平均平均信信号值号值RSRSD D（%）RSRSD D（%）1 10 00.5050.5050.5070.507( 2.0%)( 2.0%)( 2.0%)2 215150.5070.5073 330300.5090.5094 445450.5130.5135 560600.5250.5256 690900.5480.5487 71201200.5670.567稳稳定性定性试验试验(示例示例)加样回收率试验加样回收率试验目的目的考察准确度，即用该方法测定的结果与真实值考察准确度，即用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度或参考值接近的程度要求要求设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别制设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别制备三份供试品溶液进行测试，计算回收率备三份供试品溶液进行测试，计算回收率RSD 2.0%RSD 2.0%加加样样回收回收试验试验序序号号称样称样量量（g g）待待测组测组分分含量含量（mgmg）对对照品加照品加入量入量（mgmg）测测得量得量（mgmg）回收率回收率（%）平均加平均加样样回收率回收率（%）RSDRSD（%）1 10.160.1665.2865.282 20.25000.250015.015.027.227.2100.1100.13 30.25120.25124 40.25090.250953.0453.045 50.25000.250015.015.029.829.898.698.66 60.25000.25007 70.25040.250442.8442.848 80.25000.250015.015.033.133.1100.0100.09 90.25100.2510取含量测定时一半的称样量，取含量测定时一半的称样量，0.5g/20.5g/298102%98102%撰写方法学验证论文撰写方法学验证论文线性与范围线性与范围: : 设计对照品溶液的浓度设计对照品溶液的浓度精密度试验精密度试验稳定性试验稳定性试验 根据实验测定数值进行计算根据实验测定数值进行计算重复性试验重复性试验加样回收试验加样回收试验: :设计称样量、对照品加入量设计称样量、对照品加入量含量测定：根据实验测定数值进行计算含量测定：根据实验测定数值进行计算